国家大学生创新申报书

附件1山东农业大学大学生创新创业训练计划项目申请书（创新训练项目）项目名称：不同硫代修饰CpG对鸡只免疫调节作用的研究申请人：解云霞学号：20120495E—mail：[e-mail]联系电话：[phone]所在学院：动物科技学院专业年级：12级制药工程专业1班指导教师:郭慧君职称副教授申报日期：2014年6月27日山东农业大学大学生创新创业训练计划管理委员会项目编号41填表说明一、本申请书由申请学生在指导教师或有关专业教师指导下独立填写。申请书要按照要求，逐条认真填写，各项内容必须实事求是，表达明确、严谨。一律要求用打印稿件。二、申请书为A4幅面，于左侧装订成册。一式一份，由指导教师签署意见并经学院评审小组评审，学院审核后，报送教务处。需签字部分由相关人员以黑色钢笔或水笔签名。三、“项目编号”由学校统一编号。四、“学院意见”由项目申请人所在学院填写，应注明研究人员、时间、条件、政策等方面的保证措施和意见。五、如表格不够，可以加附页。一、简表项目简介项目名称不同硫代修饰CpG对鸡只免疫调节作用的研究项目覆盖学科或课程药物化学，动物免疫学，动物生理学，细胞生物学依托实验教学中心或实验室国家本科实验教学中心“动物科学与动物医学实验教学中心”申请经费30000．00元起止年月2013.12—2014．12项目申请人姓名解云霞学号20120495性别女出生年月1993-11专业年级班级制药工程2012级1班学院动物科技学院前一学期平均学分绩点3.6兴趣爱好打羽毛球，读书前一学期综合测评名次3电话[phone]指导教师姓名郭慧君职称副教授研究方向动物免疫调控主要教学工作简历时间授课名称授课对象学时授课单位2013年上半年动物生理学与实验2012级制药90动科院2013年下半年动物生理学与实验2012级动医90动科院2013年下半年动物生理学与实验2012级动检72动科院2012年下半年动物生理学实验2011级动医216动科院主要科学研究工作简历时间项目名称获奖情况2011年禽白血病流行病学及防控技术国家科学技术进步奖二等奖2010年禽白血病流行病学及防控技术山东省科学技术进步一等奖2006年鸡群免疫抑制病毒多重感染的研究中国畜牧兽医学会奖项目组主要成员∧不含申请者∨姓名学号性别出生年月专业年级所在学院学习状况项目中的分工签字赵康20120501男1993-03制药工程2012级动科学院优秀动物养殖实验赵康刘伟20120477男1994-02制药工程2012级动科学院优秀样品检测记录数据刘伟二、立项依据（项目的意义、现状分析）人类早期的研究发现，一些细菌和病毒的DNA能诱发机体的免疫反应，但是脊椎动物的DNA却无法激活机体的免疫应答，近几年的研究发现，正是存在于细菌体内的CpGDNA具有免疫激活活性。CpGDNA本质是存在于细菌、病毒和无脊椎动物的DNA中的具有免疫学活性的较短的核苷酸序列。这些核苷酸序列大多数含有以非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸（CpG）为基元构成的特定结构，此特定结构即为CpG基序（CpGmotif）或免疫刺激序列（Immunostimulatorysequences，ISS）或者CpGDNA，其在天然细菌和病毒DNA中出现的频率为1/16，但是在脊椎动物中较为罕见，且通常已甲基化。因此细菌CpGDNA可以作为一种“危险信号”被脊椎动物识别，激活机体的免疫系统，这也是机体的免疫系统在长久的进化过程中形成的一种防御机制。而在体外人工合成的含有CpG基序的寡核苷酸（Oligonucleotide，ODN）被称为CpG-ODN[1,2]。大量研究显示CpG-ODNs能激活高等动物的免疫系统，活化B淋巴细胞、巨噬细胞(M)、树突状细胞(DC)、自然杀伤细胞(NK)等免疫细胞，诱导天然免疫应答分泌多种细胞因子，增强抗原的加工提呈，诱导Th1型免疫应答，产生较强的体液免疫和细胞免疫，增强特异性和非特异性免疫反应，临床上可作为哺乳动物免疫治疗剂和免疫增强剂而倍受关注[3,4]。已在人开展用于治疗肿瘤、过敏反应性疾病、感染性疾病和免疫功能低下的临床试验[5,6]；其中国外对人免疫刺激活性最强的CpGODN7909被证明是一种高效低毒的新型免疫治疗剂和佐剂，并已申请专利。CpG-ODN也可以为家禽一些重大疾病防治可以提供重要思路。目前大部分研究主要集中在CpG-ODN作为免疫佐剂的作用认识。一些研究表明CpG-ODN作为亚单位疫苗佐剂可以增强抗疟疾寄生虫感染[7]和提高卵清蛋白抗体滴度[8]。CpG-ODN可提高鸡对大肠杆菌和肠沙门氏杆菌抗感染的能力[9-12]，增加IBDV疫苗和重组DNA质粒的免疫保护作用[13,14]；增加NDV疫苗的抗体滴度和淋巴细胞增殖活性，增加AIV-H5N1疫苗抗体滴度，显著增加AIV灭活疫苗对鸡肠道分泌型IgA、IgG细胞数量[15-17]；用重组艾美耳球虫蛋白（EtMIC2）和CpG-ODN接种鸡胚尿囊腔可促进雏鸡生长和降低粪便球虫卵囊排出量[18]；B型CpG-ODN作为免疫增强剂对J亚型鸡白血病（ALV-J）的重组蛋白的免疫保护作用，证实其具有增强中和抗体的形成和抗ALV-J早期感染的作用[19]。一些研究表明，这类核酸免疫增强剂具有结构、种属差异性[20-22]。在癌胚抗原DNA疫苗抗体诱导实验中已经发现经硫代修饰的CpG-ODN比未经硫代修饰的免疫增强效果好[23]，但在鸡上对于不同硫代修饰的CpG-ODN与免疫增强效果之间的关系并未有研究，所以对于经不同硫代修饰的CpG-ODNs对免疫细胞活性，细胞因子分泌的影响我们不得而知。因此本实验小组希望通过进行实验筛选出不同硫代修饰的对于鸡具有最佳免疫刺激活性的CpG-ODN，为其在家禽疫病预防与生产中应用提供依据。主要参考文献：[1][20]BrownlieR.,ZhuJ.,AllanB.,MutwiriG.K.,BabiukL.A.,PotterA.,GriebelP.2009.ChickenTLR21actsasafunctionalhomologuetomammalianTLR9intherecognitionofCpGoligodeoxynucleotides.MolecularImmunology46:3163–3170[2]KeestraAM,deZoeteMR,BouwmanLI,vanPuttenJP.ChickenTLR21isaninnateCpGDNAreceptordistinctfrommammalianTLR9.JImmunol2010;185(1):460–467[3]TokunagaT，YamamotoH，SuganumaT，eta1．AntitumoractivityofdeoxyribonucleicacidfractionfromMycobacteri—umbovisBCG．I[J]．Isolation，physicochemicaicharacter—ization，andantitumoractivity[J]．JNCI，1984，72：955～962．[4]YamamotoS，YamamotoT，TokunagaT，eta1．DNAfrombacteriabutnotfromvetebratesinducesinterferons。activatesnaturalkillercellsandinhibitstumorgrowth[J]．MicrobiolImmunol，1992，36(9)j983～997．[5]LeonardJP，LinkBK，EmmanouilidesC，etal．PhaseItrialoftoll-Likereceptor9agonistPF-3512676withandfollowingrituximabinpatientswithrecurrentindolentandaggressivenonhodgkin’slymphoma[J]．ClinCancerRes，2007，13(20)：6168—6174．[6]CooperCL.DavisHL，MorrisML，etal．CPG7909，animmunostimulatoryTLR9agonistoligodeoxynueleotide,asadjuvanttoEngerix-BHBVvaccineinhealthyadults：adouble-blindphaseI/IIstudy[J]．JClinlmmunol，2004，24(6)：693-701．[7]SuZ,TamM-F,JankovicD,StevensonMM.Vaccinationwithnovelimmunostimulatoryadjuvantsagainstblood-stagemalariainmice.InfectImmun2003;71(9):5178–87.[8]VleugelsB,VerverkenC,GoddeerisBM.StimulatoryeffectofCpGsequencesonhumoralresponseinchickens.PoultSci2002;81(9):1317–21.[9]GomisS,BabiukL,GodsonDL,AllanB,ThrushT,TownsendH,etal.ProtectionofchickensagainstEscherichiacoliinfectionsbyDNAcontainingCpGmotifs.InfectImmun2003;71(2):857–63.[10]HeH,GenoveseKJ,SwaggertyCL,NisbetDJ,KogutMH.InvivoprimingheterophilinnateimmunefunctionsandincreasingresistancetoSalmonellaenteritidisinfectioninneonatalchickensbyimmunestimulatoryCpGoligodeoxynucleotides.VetImmunolImmunopathol2007;117(3–4):275–83.[11]HeH,LowryVK,SwaggertyCL,FerroPJ,KogutMH.InvitroactivationofchickenleukocytesandinvivoprotectionagainstSalmonellaenteritidisorganinvasionandperitonealS.enteritidisinfection-inducedmortalityinneonatalchickensbyimmunostimulatoryCpGoligodeoxynucleotide.FEMSImmunolMedMicrobiol2005;43(1):81–9.[12]MackinnonKM,HeH,SwaggertyCL,McReynoldsJL,GenoveseKJ,DukeSE,etal.InovotreatmentwithCpGoligodeoxynucleotidesdecreasescolonizationofSalmonellaenteriditisinbroilerchickens.VetImmunolImmunopathol2009;127(3–4):371–5.[13]WangX,JiangP,DeenS,WuJ,LiuX,XuJ.EfficacyofDNAvaccinesagainstinfectiousbursaldiseasevirusinchickensenhancedbycoadministrationwithCpGoligodeoxynucleotide.AvianDis2003;47(4):1305–12.[14]MahmoodMS,SiddiqueM,HussainI,KhanA,MansoorMK.Protectioncapabilityofr