地榆中总黄酮超声提取工艺的研究-结题报告-修改

地榆中总黄酮超声提取工艺的研究-结题报告申请人：高爱国指导教师：程鹏第一部分：[课题提出的背景及意义]地榆为蔷薇科植物地榆SanguisorbaofficinalisL.或长叶地榆SanguisorbaofficinalisL.var.longifolia(Bert.)YüetLi的干燥根。地榆始载于《神农本草经》。味苦、酸，性微寒。有凉血止血、清热解毒、生肌敛疮的功能。用于便血、血痢、痔疮出血、尿血、崩漏、痈肿疮毒、烧伤、烫伤。地榆历史悠久，疗效确切，价格低廉，药源丰富，全国各地均有大量分布。地榆所含成分是三萜及其甙类，黄酮类，鞣质类，糖类等。黄酮类化合物是地榆的有效药理活性成分，本研究拟根据黄酮类化合物的超声波提取，利用正交实验法对超声提取的影响因素进行考察，探索超声提取地榆总黄酮的最佳工艺条件，为进一步开发利用地榆资源提供了一定科学依据。第二部分：[研究的主要内容和目标]建立地榆总黄酮超声提取工艺。第三部分：[研究方法]采用超声提取，设计正交试验，确定提取工艺的参数；采用大孔吸附树脂纯化地榆总黄酮。第四部分：[研究工作的组织与实施]曹纬国老师作为指导，本研究小组讨论提出研究方案，通过预实验确定了地榆中总黄酮的含量，经过修改完善，确定研究方案。研究的阶段分为实验准备阶段，地榆样品的采集，地榆总黄酮含量测定方法的研究，地榆总黄酮提取工艺的研究，地榆总黄酮纯化工艺的研究四个阶段。第五部分：[研究结论与成果]本研究首先确定了地榆总黄酮的含量测定方法，然后根据黄酮类化合物的提取规律，采用有机溶剂提取法，建立地榆中总黄酮的提取工艺，并应用大孔树脂对地榆总黄酮的分离纯化工艺进行研究，建立系统的地榆总黄酮的提取分离工艺。该工艺稳定可靠，具有一定的应用价值，可用于地榆资源的开发。第六部分：[质量与效果分析]对研究结果进行分析：通过合理的实验设计，正确的实验操作，根据黄酮类化合物的提取规律，采用有机溶剂提取法，建立地榆中总黄酮的提取工艺，并应用大孔树脂对地榆总黄酮的分离纯化工艺进行研究，建立系统的地榆总黄酮的提取分离工艺，基本完成研究目标；为地榆资源的开发利用提供了基本数据。研究的自我评价：地榆为蔷薇科植物地榆SanguisorbaofficinalisL.或长叶地榆SanguisorbaofficinalisL.var.longifolia(Bert.)YüetLi的干燥根。有凉血止血、清热解毒、生肌敛疮的功能。地榆始载于《神农本草经》。地榆历史悠久，疗效确切，价格低廉，药源丰富，全国各地均有大量分布。据文献报道黄酮类化合物是地榆的有效药理活性成分，本实验采用超声提取提，设计了正交试验，采用了大孔树脂等手段提取分离地榆总黄酮，技术较为先进。收获与体会：通过这个研究同学们学习了中药提取物的基本提取方法，以及提取的试验设计，学习了利用大孔树脂分离纯化黄酮物质的基本手段。第七部分：[进一步要研究的问题]已知地榆根总黄酮中含有山奈素-3,7-二鼠李糖甙，槲皮素-3-半乳糖-7-葡萄糖甙。茎，叶，花中已分离出山奈素，槲皮素，矢车菊甙，矢车菊双甙，杨梅甙，花青甙，无色花青甙，黄酮醇以及儿茶素等。但是各类成分的比例不清楚，地榆茎，叶，花中总黄酮的提取纯化工艺尚需进一步研究。附：研究论文或实验报告等。1.器材与实验方法1.1材料与试剂地榆购自重庆中药材市场，粉碎后过60目筛后，密封置阴暗处冷冻保存；芦丁标准品购自中检所；其他试剂如乙醇、乙酸乙酯、NaNO2、Al（NO3）3、NaOH等均购自国药。1.2仪器烧杯、圆底烧瓶、三角瓶、电子天平、量筒：超声波清洗器：分光光度计：抽滤机。1.3实验方法1.3.1测定波长的确定精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2mL,分别置于25mL容量瓶中,加50%乙醇8mL,加5%亚硝酸钠溶液1mL,摇匀,放置6min后加10%硝酸铝溶液1mL,摇匀,放置6min后再加入氢氧化钠试液10mL,加蒸馏水至刻度,摇匀。放置15min后,在190～800nm波长范围内进行扫描。结果,对照品溶液与供试品溶液在503nm处均有较强吸收,选择测定波长为503nm。1.3.2标准曲线的绘制精密称取P2O5干燥24h的芦丁对照品9.00mg,置50mL容量瓶中,加入95%乙醇40mL,置温水中加热使溶解,放冷,加95%乙醇定容,摇匀,即得0.18mg/ml对照品溶液。精密吸取对照品溶液1、2、4、6、8mL,置25mL容量瓶中,按“1.2.1”项方法显色,测定吸光度。以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线:y=16.07385x-0.01107,R=0.99988线性范围为16.06278～128.57873mg/ml。1.3.3地榆总黄酮的提取将地榆药材粉碎过60目筛,精密称取地榆粉末2g,加入一定量的乙醇溶液,超声提取,提取液抽滤后减压回收成浸膏,加50mL水溶解,全部移入分液漏斗中,用乙酸乙酯萃取至无色,合并后减压蒸干,残渣用95%乙醇溶解并定容到500mL容量瓶中,即得样品溶液。精密吸取2mL样品溶液置于25mL容量瓶中,按“1.2.1”项方法显色,测定吸光度,根据标准曲线方程计算总黄酮得率。1.3.4正交试验本实验确定以超声功率、超声时间、乙醇浓度、液料比4个因素进行正交实验,以总黄酮得率为考察指标,确定提取地榆总黄酮的最佳工艺条件。1.3.5提取工艺的验证为进一步考察最佳工艺的稳定性和合理性,按优化的最佳工艺条件进行重复性试验3次,分别测定地榆总黄酮的含量。2.结果与分析2.1标准曲线0.000.010.020.030.040.050.060.00.20.40.60.81.0吸光度（A）标准溶液浓度（mg/ml）标准曲线线性拟合y=16.07385x-0.01107,R=0.99988图1芦丁的标准曲线2.2正交试验由于各因素之间的相互影响，因此要全面考虑超声提取法的工艺参数。根据有关资料，本实验确定以乙醇浓度、超声时间、超声功率、液料比四种因素进行正交试验设计，见表1。表1L9(34)正交实验因素水平设计表水平因素A乙醇浓度（％）B料液比C超声功率(%)D提取时间（min）1235070901：201：301：406080100203040表2正交实验结果与分析实验序号ABCD提取率乙醇浓度%料液比超声功率%超声时间/s111116.125212225.542313336.786421236.884522315.950623126.728731326.106832135.076933216.417K16.1516.3725.9766.164K26.5215.5236.2816.125K35.8666.6446.2816.249极差R0.6551.1210.3050.124影响因素BACD最优条件B3A2C3D3正交优化试验结果表明:影响地榆总黄酮提取率的主要因素为料液比,其次是乙醇浓度,超声功率，超声时间。最佳提取工艺条件为：料液比1:40，乙醇浓度70%,超声功率100%,超声时间40min。点评：1、各部分有点简单。2、实验数据列表分析。3、缺实验的讨论、缺乏参考文献。4、完成论文并投稿。