双向电泳-是一种将等电聚焦电泳与十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳相结合的蛋白质电泳检测方法

双向电泳-是一种将等电聚焦(isoelectricfocusing,IEF)电泳与十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectroph-oresis,SDS-PAGE)相结合的蛋白质电泳检测方法双向电泳-是一种将等电聚焦(isoelectricfocusing,IEF)电泳与十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectroph-oresis,SDS-PAGE)相结合的蛋白质电泳检测方法。其电泳凝胶经染色后蛋白呈现二维分布，水平方向反映出蛋白在等电点上的差异，而垂直方向则反映出它们在相对分子质量上的差异。该技术是快速发展的蛋白质组学分析中最流行最通用的蛋白质分离方法之一。学术术语来源——突触蛋白质组学分析中双向电泳技术的优化文章亮点：1突触蛋白质组学及适用于该组学分析的双向电泳技术在科研中应用广泛，然而，以往文献中突触蛋白双向电泳图效果不一，差别较大，如何获得高质量的突触蛋白双向电泳图谱，是顺利完成突触蛋白质组学分析首要的问题。2影响突触蛋白双向电泳效果因素中最主要的是线性固相pH梯度胶条和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳浓度的选择，而文献中对此无统一标准，作者亦未查询到相关文献研究，仅有少数相关的中文文献，也是对其他蛋白双向电泳条件的优化，并不适用于突触蛋白。3文章采用了突触蛋白双向电泳实验比较和文献综述的方法，以探讨突触蛋白线性固相pH梯度胶条和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳选择的优化策略。关键词：组织构建；组织工程；突触；双向电泳；蛋白质组学；IPG胶条；SDS-PAGE；国家自然科学基金主题词：突触；双向凝胶电泳；蛋白质组学；聚丙烯酰氨凝胶电泳；大鼠摘要背景：双向电泳是突触蛋白质组学分析中最流行最通用的蛋白质分离方法之一。但文献中突触蛋白双向电泳对线性固相pH梯度(immobilizedpHgradients，IPG)胶条和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectroph-oresis，SDS-PAGE)浓度的选择很多，尚未见统一标准。目的：对突触蛋白双向电泳的IPG胶条和SDS-PAGE凝胶浓度进行优化，以获得高质量的突触蛋白双向电泳图谱。方法：以大鼠海马突触蛋白为试材，比较pH5.0-8.0与pH3.0-10.0线性IPG胶条，线性与非线性pH3.0-10.0IPG胶条，以及单一浓度10%与12%SDS-PAGE对双向电泳的影响。此外，还使用计算机检索了1989至2013年中国知网及PubMed数据库中关于突触蛋白双向电泳的文献，对文献中选择的IPG胶条、SDS-PAGE凝胶浓度进行了统计和评价，并总结了突触蛋白在不同pH值IPG胶条和不同浓度SDS-PAGE凝胶的双向电泳图谱上的分布特征。结果与结论：结果表明，使用pH3.0-10.0的非线性胶条及单一浓度10%SDS-PAGE凝胶进行突触蛋白双向电泳较为适宜，电泳图谱质量好，实验操作便利；同时还推荐合并使用pH4.0-7.0和pH6.0-11.0的IPG胶条，以及线性梯度浓度9%-16%SDS-PAGE凝胶，也适用于突触蛋白双向电泳分析。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程