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培养基对尖孢镰刀菌281菌株产孢量的影响蓝江林1,肖荣凤1,朱育菁1,杨淑佳2,葛慈斌1,刘波1,焦会民3(1.福建省农业科学院生物技术研究所,福州350003;2.厦门大学生命科学院,厦门360012;3.福建农林大学植保学院,福州350002)摘要:选择8种培养基培养尖孢镰刀菌(FusariumoxysporumSchl.)281号菌株,培养144h,在PDA培养基上得到最大产孢量128.3×107cfu/ml,与其它培养基产孢量差异显著。VBC培养基培养,产孢量没有没有明显的增加。综合比较8种培养基,PDA培养基是较为理想的产孢培养基。关键词:培养基,尖孢镰刀菌,产孢量EffectsofMediumonSporificationofFusariumoxysporumSchl.LanJianglin1,XiaoRongfeng1,ZhuYujing1,YangShujia2,GeCibin1,LiuBo1*,JiaoHuimin3(1.BiotechnologyResearchInstitute,FujianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou350003;2.SchoolofLifeSciences,XianmenUniversity,Xiamen361005;3.PlantProtectionCollege,FujianAgricultureanForestryUniversity,Fuzhou350002)Abstract:TheresultsofeightmediemseffectonsporificationofwiltpathogenFusariumoxysporum281showedthatthenumberofsporificationis128.3×107cfu/mlinPDAmediumafter144h,SignificantdifferencewereobservedbetweenPDAmediumandothers.Keywords:medium,FusariumoxysporumSchl.,Sporification尖孢镰刀菌可以引起农作物枯萎病,是毁灭性的土传病害,造成损失平均高达20-80%。黄瓜枯萎病的防治目前主要采用以抗病品种为主的综合防治措施,但抗病种种植多年后要退化,必须不断选育新的抗病品种,因而,生物防治方法引起许多学者的注意。近年来,黄瓜枯萎病生物防治的研究取得了一些进展,但还未见在生产上有大面积推广应用的生防菌剂。真菌制剂主要是通过子实体——小孢子感染靶标有害生物,使寄主感病致死,从而达到防治目的。筛选配方简单,价格便宜,原料易得,产孢量多的培养基,是真菌微生物制剂研究中首先必须解决的问题之一。1材料与方法1.1试验材料菌株:尖孢镰刀菌(FusariumoxysporumSchl.)281号菌株[1],分离自发病植株根部土壤。福建省农业科学院生物技术研究所生物农药研究中心菌种库提供。培养基:共选择真菌培养基8种。(1)CYM培养基;(2)PDA培养基;(3)VBC培养基;(4)马铃薯牛肉膏培养基;(5)ATCC5培养基;(6)BPY培养基;(7)TYG培养基;(8)燕麦片培养收稿日期:基金项目:国家863项目(2006AA10A211);福建省自然科学基金(2006J0068);福建省发改委重点项目(闽发改投资[2006]781号)。作者简介:蓝江林(1972-),副研究员。通讯作者:刘波,从事生物技术和生物防治研究,E-mail:liubofz@163.com。基。1.2试验方法[2]1.2.1培养基配制(1)CYM培养基:蛋白胨2g、酵母膏2g、葡萄糖20g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾0.46g、磷酸氢二钾1.0g,蒸馏水加至1000ml。(2)PDA培养基:马铃薯汁1000ml、葡萄糖20g。(3)VBC培养基:KH2PO41g、KNO31g、蔗糖0.5g,维生素复B1片,维生素C1片,蒸馏水1000ml。(4)马铃薯牛肉膏培养基:麦芽糖20.0g、牛肉膏5.0g、蛋白胨3.0g、马铃薯200.0g,pH7.0-7.2。(5)ATCC5培养基:酵母膏1.0g、牛肉膏1.0g、胰蛋白胨2.0g、葡萄糖10.0g、FeSO4微量、琼脂15.0g、蒸馏水1000ml,pH7.2。(6)BPY培养基:牛肉膏5.0g、酵母膏5.0g、葡萄糖5.0g、蛋白胨10.0g、NaCl5.0g、蒸馏水1000ml,pH7.2。(7)TYG培养基:胰蛋白胨3.0g、酵母膏3.0g、葡萄糖3.0g、K2HPO41.0g、蒸馏水1000ml,pH7.4。(8)燕麦片培养基:燕麦片60.0g、蒸馏水1000ml。将燕麦片加600ml水中,制成匀浆,加热至45-50℃,然后加入400ml水,121℃灭菌90分钟。1.2.2尖孢镰刀菌281号菌株的培养采用液体培养法,250ml三角瓶,每瓶装瓶量为100ml,每种培养基接种3瓶,接种量为6.01×109cfu/ml菌液1ml,25℃、150rpm、黑暗条件下培养。每48h取样,采用血球计数板统计小孢子数量,共培养10天,取样5次。在10×40倍显微镜下用血球计数板测定小孢子浓度,作为产孢量评价指标。1.3数据处理[3]所有数据的整理和分析均用微软的Excel2000软件以及DPS数据处理软件进行(唐启义和冯明光,2002)。2结果与分析2.1尖孢镰刀菌小孢子形态尖孢镰刀菌小孢子形态见图1。图1尖孢镰刀菌小孢子形态(PDA培养基)2.2各种培养基小孢子数量达到最大的培养时间实验结果见表1、图2。在选择的培养时间内,各种培养基小孢子数量达到最大值的时间均有所不同。CYM培养基培养192h,小孢子数量达到最高47.67×107cfu/ml;PDA培养基培养至144h,小孢子数量达到最高128.3×107cfu/ml;VBC培养基在整个培养过程中小孢子的数量始终较低,培养至240h,小孢子数量达到最多,为0.87×107cfu/ml;马铃薯牛肉膏培养基培养至240h时,小孢子数量达到最高,为67.5×107cfu/ml;ATCC培养基培养至192h,小孢子数量最高达132.5×107cfu/ml;BPY培养基培养至144h,小孢子数量达到最多34.67×107cfu/ml;TYG培养基培养48h,小孢子数量最多达43.58×107cfu/ml;燕麦培养基培养至240h,小孢子数量达到最多20.3×107cfu/ml。表1尖孢镰刀菌281号菌株产孢培养基产孢数量编号培养基小孢子数量(×107cfu/ml)48h96h144h192h2401CYM9.743.8330.3247.6731.502PDA21.9229.75128.3087.5045.003VBC0.230.610.850.710.874马铃薯牛肉膏30.7543.7519.3929.3367.505ATCC2.0850.0823.83132.517.176BPY6.0015.2534.6726.8313.007TYG3.5043.5819.0035.5024.678燕麦2.926.084.987.8320.300204060801001201404896144192240时间(h)孢子数(×107cfu/ml)CYMPDAVBC马铃薯牛肉膏ATCCBPYTYG燕麦图2尖孢镰刀菌281号菌株在不同培养基上的产孢量2.3各种培养基小孢子数量的差异实验结果见表2、图3。培养至96h时,各培养基小孢子产量增长不大,且彼此间没有显著差异。培养至144h,不同培养基产生小孢子的数量出现明显差异。其中PDA产生的小孢子数量最多,达到128.30×107cfu/ml,是培养起始浓度的21.35倍,与其它培养基之间差异显著(P=0.05);其次是CYM、马铃薯牛肉膏培养基、ATCC、BPY、TYG和燕麦培养基,产生的小孢子数量较少;VBC培养基产生小孢子数量最少,仅为0.85×107cfu/ml,与其它培养基之间差异显著(P=0.05)。培养至192h时,ATCC培养基的小孢子数量达到132.5×107cfu/ml,与PDA培养基之间无显著差异(P=0.05),与CYM培养基、VBC培养基、马铃薯牛肉膏培养基、BPY培养基、TYG培养基和燕麦片培养基产孢量差异显著(P=0.05)。表2不同培养基小孢子数量编号12345678培养基CYMPDAVBC马铃薯牛肉膏ATCCBPYTYG燕麦144h小孢子数量(×107cfu/ml)30.32128.300.8519.3923.8334.6719.004.98P=0.05ababababababab196h小孢子数量(×107cfu/ml)47.6787.500.7129.33132.526.8335.507.83P=0.05bcabcbcabcbcc-20020406080100120140160CYMPDAVBC马铃薯牛肉膏ATCCBPYTYG燕麦培养基孢子浓度((×107cfu/ml))图3不同培养基小孢子数量(144h)3结论与讨论在选择的8种培养基中,PDA培养基和ATCC培养基的小孢子数量最多。PDA培养基144h达到最大小孢子量128.30×107cfu/ml,ATCC培养基在192h达到最大小孢子量132.5×107cfu/ml,均远高于其它6种培养基。综合比较来看,PDA培养基的小孢子数量略低于ATCC培养基的小孢子数量,但基本可以满足试验要求,且培养的时间较ATCC要少48h,原材料易得,配制方法简单,是真菌培养使用的传统培养基,应该是理想的选择。王拱辰[3]等研究表明,VBC固体培养基能促进多数镰刀菌产生大孢子,产孢量可达3×105cfu/ml。本试验采用的VBC液体培养基,培养至144h,小孢子数量达0.85×107cfu/ml,培养至240h,小孢子数量达到最高0.87×107cfu/ml,整个观察过程少见大孢子和菌丝出现,。在其它的培养基中生长也同样如此,说明试验所选的8种培养基较适合于小孢子的生长,产量以PDA和ATCC培养基高。参考文献[1]魏景超.真菌鉴定手册[M].上海:上海科学技术出版社,1979.581.[2]方中达.植病研究方法(第三版)[M].1998.北京:农业出版社,37—155.[3]唐启义,冯明光.实用统计分析及其DPS数据处理系统[M].2002.北京:科学出版社,174-184.[4]王拱辰,陈辉珍.促进镰刀菌产孢的培养基.植物病理学报[J].1995,25(2):165-166.
本文标题:培养基对尖孢镰刀菌281菌株产孢量的影响(
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