南医大药物分析第06章-芳酸类非甾体抗炎药物的分析-2015

芳酸类非甾体抗炎药物的分析第六章学习要求•1、掌握：芳酸类非甾体抗炎药物的结构和性质；典型药物的鉴别、含量测定方法与原理；•2、熟悉：典型药物的杂质种类、检查方法与含量限度；•3、了解：影响本类药物稳定性的因素。结构与性质1鉴别试验2特殊杂质检查3含量测定4本章内容芳酸COOH芳酸，既有芳环又有羧酸,绝大多数直接与苯环相连第一节结构与性质COOHHOCH3OR'RNROHCH3OR'SNOOOHNHROCH3OROOHR'HNROOHHNROR'O水杨酸类邻氨基苯甲酸类苯并噻嗪甲酸类邻氨基苯乙酸类芳基丙酸类吲哚乙酸类一、典型药物的结构特点OROOHR'1、水杨酸类阿司匹林COOHOCOCH3OHCOOH水杨酸OOHOOOHFFOHOOH双水扬酯二氟尼柳HNROOH2、邻氨基苯甲酸类HNROR'O3、邻氨基苯乙酸类HNOOHCH3CH3HNONaOOClCl甲酚那酸双氯芬酸钠HOCH3OR'R4、芳基丙酸类HOCH3OCH3CH3HOCH3OOHOCH3OOCH3布洛芬酮洛芬萘普生NROHCH3OR'SNOOOHNHROCH35、吲哚乙酸类6、苯并噻嗪甲酸类NOHCH3OOOClH3CSNOOOHNHOCH3NSNOOOHNHOCH3SNCH3吲哚美辛吡罗昔康美洛昔康其他非甾体抗炎药HNOCH3CH3SCH3OONO2HOHNCH3O尼美舒利对乙酰氨基酚•结构分析：•包括：芳酸、芳酸酯、芳酸盐、酰胺•共同点：苯环、羧基（或成酯、酰胺）•不同点：不同的取代基（如酚羟基、芳氨基，苯基等）二、理化性质（一）物理性质均为固体，具有一定的熔点。除芳酸碱金属盐易溶于水外，多数药物在水中微溶或不溶，能溶于沸水、有机溶剂如乙醇、乙醚和氯仿等。（二）、化学性质1、酸性芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKa在3～6之间，属中等强度的酸或弱酸。COOHRCOO-R+H+①、—CH3、—NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱;②、—X、—NO2、—OH等吸电子取代基存在使酸性增强;③、邻位取代间位、对位取代，尤其是邻位取代酚羟基，由于形成分子内氢健，酸性大为增强OHOCOH水杨酸酸性顺序：OHOCOHOOCOHCOOCOH水杨酸阿司匹林苯甲酸3.吸收光谱特性本类药物分子结构中具有苯环和特征取代基，均具有紫外和红外特征光谱，应用于鉴别，制剂均匀度，溶出度或释放度的检查，和含量测定。2.水解性存在酯键，酰胺键均可发生水解。芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别；利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。4.基团或元素特性取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测定。如具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别；具芳伯氨基的药物可用重氮化—偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量；酮洛芬的二苯甲酮可与苯肼缩合显色等.第二节、鉴别试验1、FeCl3反应①、水杨酸反应+FeCl3+3HClOHOOHOOOFeOHpH=4-6紫堇色配合物适用于：水杨酸或水解后产生水杨酸如：阿司匹林、双水杨酯、二氟尼柳直接：水杨酸、二氟尼柳水杨酸（Ch.P2010）[鉴别]（1）取本品的水溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。间接：阿司匹林、双水杨酯阿司匹林（Ch.P2010）[鉴别]（1）取本品约0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。阿司匹林水杨酸②、酚羟基反应适用于：具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物蓝紫色配位化合物FeClOHAr3OHRNHCOCH3OH3+FeCl3NHCOCH3O-Fe+3HCl3吡罗昔康美洛昔康烯醇式羟基HOCH3OONHNO2NO2NH2+HOCH3ONNHO2NNO2H2SO42、缩合反应酮洛芬鉴别（Ch.P2010）二苯甲酮与二硝基苯肼缩合橙色沉淀3、重氮化—偶合反应芳香第一胺类鉴别反应：具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物HONH2.HClHON+N.HClNOHNOHHClNaNO2OHHONHCOCH3对乙酰氨基酚鉴别（Ch.P2010）红色偶氮化物4、氧化反应甲酚那酸（Ch.P2010）吲哚美辛（Ch.P2010）5、水解反应23NaCO硫酸阿司匹林水杨酸钠醋酸钠水杨酸（白色）醋酸臭气COOHOCOCH3COONaOHCOOHOH阿司匹林（Ch.P2010）可溶于醋酸铵（测定熔点），水杨酸白色双水杨酯稀盐酸NaOH6、特征元素反应1、氯元素2、硫元素美洛昔康（Ch.P2010）双氯芬酸钠（Ch.P2010）7、光谱方法1.最大吸收波长双氯芬酸钠276nm2.最大与最小吸收波长布洛芬：最大：265nm，273nm最小：245nm，271nm3.吸光度法甲芬那酸4.吸光度比值法二氟尼柳（1）、紫外（2）、红外(自学)阿司匹林布洛芬8、色谱法①、薄层色谱二氟尼柳胶囊（Ch.P2010）8、色谱法②、高效液相色谱阿司匹林片（Ch.P2010）大量用于制剂分析的含量测定项阿司匹林、甲芬那酸、双氯芬酸钠、布洛芬、萘普生、吲哚美辛、对乙酰氨基酚等制剂才用含量测定项下色谱图与对照品比较保留时间。第三节、特殊杂质检查一、Aspirin及双水杨酯中水杨酸与有关杂质的检查*1.水杨酸的检查:•来源:•原料残存（生产过程中乙酰化不完全）•水解产生（贮存过程中水解产生）ONaCO2加压，ONaCOONaOHCOOHH+生产工艺：COOHOCOCH3(CH3CO)2OH2SO4,70~75C。(CH3CO)2OOCOCH3贮藏水解：COOHOCOCH3(CH3CO)2OH2SO4,70~75C。OCOCH3ONaCO2加压，ONaCOONaOHCOOHH+ONaCO2加压，ONaCOONaOHCOOHH+OOCOOHOHH2O[O][O]1、游离水杨酸红棕到深棕色一、阿司匹林的特殊杂质检查2、其他有关物质原料阿司匹林无游离酚羟基，不与Fe3+作用，而水杨酸则可与之反应生成紫堇色，可检出1μg的游离水杨酸。水杨酸对照液阿司匹林↓硫酸铁铵对照液颜色供试液颜色比色法：合格+Fe3++H2OFeOH紫堇色2005版药典游离水杨酸检查限量:原料：0.1%；阿司匹林片：0.3%；阿司匹林肠溶片：1.5%；阿司匹林栓：3.0%（HPLC法）阿司匹林泡腾片：3.0%（HPLC法）色谱柱:C18流动相：乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20:5:5:70）检测波长：303nm供试液：10mg/ml水杨酸对照：10μg/ml定量方法：外标法游离水杨酸和有关物质检测色谱条件色谱柱:C18流动相：A:乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20:5:5:70）B：乙腈梯度洗脱检测波长：276nm供试液：10mg/ml对照液：供试液200倍稀释灵敏度试验：2000倍稀释定量方法：自身稀释对照法2010版药典采用高效液相色谱法主成分自身对照法样品液稀释对照液样品液溶剂峰样品峰(CV)L(%)=100S(CV)=100(CV)C=100AACk,KCL==C对照样品对照样品对照对照品样品样品对照样品（进样量一样，）若样品杂质峰面积为对照品的峰面积的倍数则：CL(%)=100C0.05100100.5对照样品供试液：10mg/ml对照液：50g/ml二、甲芬那酸中的2,3-二甲基苯胺原料的2,3-二甲基苯胺容易发生残留，药典要求采用GC法检查，限度要求为~~GC法柱：毛细管柱，固定液：聚乙二醇（PEG-20M)供试液：25mg/ml对照品：2.5g/ml杂质峰A不得大于对照品的峰A限量：？0.01%！合成过程中可能产生多种苯或联苯类中间体及副产物，以及其他有关物质。Ch.P2010采用TLC和HPLC法对照溶液一定量供试品溶液供试品溶液稀释溶剂溶解S三、二氟尼柳中有关物质的检查供试品自身稀释对照法：1.TLC高低浓度对比法方法：对照溶液一定量供试品溶液供试品溶液稀释溶剂溶解S供试品溶液：10mg/ml对照品溶液：供试品溶液稀释50g/ml供试品对照品判断：②供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）①控制杂质斑点个数2.HPLC有关物质B•检测λ：254nm•条件：C18（250mmХ4.6mm)•流动相：H2O-MeOH-乙腈-冰醋酸（55：23：30：2）•供试品溶液：10mg/ml•对照品溶液：50μg/ml调灵敏度：对照品进样5μl,主峰高为满量程的25%测定：进对照品和供试品各5μl，记录谱图的保留时间是主成分出峰时间的3倍，供试品各杂质峰的面积的和不得大于对照品溶液主峰的面积。问题：如果存在杂质对照品和其它有关物质，不仅需要控制单个杂质的限量，又需要控制有关物质的总杂质限量，该如何进行特殊杂质的测定？四、萘普生中6-甲氧基-2-萘乙酮等有关物质检查供试液：0.5mg/ml6-甲氧基-2-萘乙酮对照：50μg/ml对照溶液：2.5μg/ml萘+0.5μg/ml杂质色谱柱:C18流动相：甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾（75:25）检测波长：240nm五、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺的检查条件：C8(辛烷基)流动相：磷酸盐缓冲液-MeOH（90：10）检测λ：245nm供试品溶液：20mg/ml对照品溶液：1μg/ml对氨基酚，20μg/ml对乙酰氨基酚的混合溶液条件：C8(辛烷基)流动相：磷酸盐缓冲液-MeOH（60：40）检测λ：245nm理论塔板数：不低于2000供试品溶液：20mg/ml对照品溶液：1μg/ml对氯乙酰胺对照溶液，进样20μl,调节灵敏度，对氨基酚峰高为满量程的10%测定：进对照品和供试品各20μl，记录谱图的保留时间是主成分出峰时间的4倍，按外标法峰面积计算，对氨基酚不得大于0.005%；其他杂质峰面积不得大于对照品溶液对乙酰氨基酚的峰面积（0.1%）；杂质总量不得过乙酰氨基酚面积的5倍（0.5%）。本类药物含量测定：原料药：主要用酸碱滴定法制剂：检查性定性如溶出度、含量均一度-UV法制剂含量的测定：UV法、HPLC法第四节、含量测定1、酸碱滴定法（1）、直接滴定法pKa3～6NaOH中性乙醇滴定酚酞供试品溶液终点应用：阿司匹林、苯甲酸、丙磺舒、水杨酸、二氟尼柳、双水杨酯、尼美舒利、萘普生和布洛芬等COOHOCOCH3NaOHCOONaOCOCH3例：阿司匹林+阿司匹林ChP取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，溶解后，加酚酞指示液3滴，用0.1mo1/L氢氧化钠滴定液滴定。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。①中性乙醇溶解阿司匹林且防止酯键水解。“中性”是对中和法所用的指示剂而言②优点：简便、快速缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）酸性杂质干扰（如水杨酸）③适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定【阿司匹林】ChP（2010）取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）滴定。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。2.剩余量滴定法返（回）滴定法：应用：美洛昔康具备烯醇式羟基，显一元酸性，由于其甲醇、乙醇及水溶性欠佳，采用回滴法测定。0SBBBAV-VFT%=100%W（）含量（）•本品约0.4g加入过量、定量的NaOH（A)已知浓度的HCl(B)回滴过量NaOH溴麝香草酚蓝变色范围pH6.0(黄)～7.6(蓝)溴麝香草酚蓝：酸碱指示剂同法空白校正实验SNOHNHOOCH3ONSCH3NaOHOOCH3NSCH3SNNHONaO0SBBBAV-VFT%=100%W（）含量（）3.水解后剩余滴定法阿司匹林酯类供试品加入过量、定量的NaOH已知浓度的酸回滴过量NaOH2NaOH（过量）＋H2SO4＝Na2SO4＋2H2OOCOCH3COOH2N