双根口服液质量标准提高的研究

双根口服液质量标准提高的研究［摘要］目的：该文是双根口服液质量提高研究。方法：分别考证大黄、板蓝根、芦根、僵蚕、射干、鱼腥草、蝉蜕、甘草、姜黄淡豆豉十味中药，单位药的来源、本草考证、化学成分、定量定性等多个方面进行总结归纳，及复方的历史追溯、功效、功能主治、及以往的质量标准制定等方面进行论述。结果：提出目前质量标准存在的问题,及解决方法。结论：双根口服液的质量标准制定。［关键词］双根口服液；成分分析；质量标准[Abstract]Objective:Thisistheprescriptionfordouble-rootoralliquidqualityimprovementresearch.Methods:composedofradixetrhizomarhei,radixisatidis,phragmitescommunis,batryticatedsilkworm,rhizomabelamcandae,cordatehouttuynia,cicada,liquorice,turmerictentastetraditionalChinesemedicinepreparation,SSPunitmedicinesource,literatures,chemicalcompositionandquantitativequalitative,etc.Thispapersummarizesseveralaspects.Andthehistoricaltraceofthecompound,efficacy,attendingfunctions,and,theessaydiscussesthequalitystandardsofthepast.Results:Soastoputforwardtheproblemsexistingincurrentqualitystandard，andsolutions.Conclusions:Qualitystandarddouble-rootoralformulation.[Keywords]Double-rootoral;Compositionanalysis;Qualitystandard在中药制剂过程中，现多用乙醇作为澄清剂，以去除醇不溶性成分而达到澄清目的，这样极易造成有效成分丢失而影响疗效。应了解复方从中寻找解决方法。1历史来源升降散最早见于明代医家张鹤腾所著《伤暑全书》，此书收集了历代医家的治暑良方，升降散是其中之一。张鹤腾说：“凡患瘟疫，未曾服他药，或一二日，或七八日或至月余未愈者”皆可用升降散治疗[7]。彭怀仁曰“升降散，方源《伤暑全书》卷下，炼蜜为丸，名太极丸”[8]。由僵蚕、蝉蜕、姜黄、大黄、黄洒、蜂蜜组成为治暑良方。升降散原主治温热，瘟疫所为之病。其辨证要点为：外感郁热者多有感受外邪或动辄感冒病史，常见发热或阵发性“烘热”；杂病火郁多见心烦急躁，夜寐多梦等症。然不论外感或杂病火郁毕竟是火热为患，故均多见咽干，便秘，尿黄，舌红少津，脉沉而数[9]。后得清代医家杨栗山的发挥，载于《伤寒温疫条辨》一书中，杨栗山明确写道：升降散“是方不知始自何氏，《二分晰义》改分量变服法，名为赔赈散，用治温病，服者皆愈，以为当随赈济而赔之也”[10]。可见升降散并非杨氏创制，而是由于受到杨栗山的推崇而倍受医家的重视。杨栗山强调了升降散的重要性和实用性，将其推为治疗瘟疫的首要方剂，表里轻重皆可用之，为治疗瘟疫提供了思路和方法。升降散以僵蚕清热解郁、除湿化痰，蝉衣祛风胜湿、涤热解毒，姜黄行气散郁，大黄泄热排毒。药虽四味，然配伍精当，深合《内经》风淫、热淫、湿淫所胜，治以辛凉、成寒、苦辛，佐以甘缓、淡泄之旨。四药相合，寒温并用，升降同施，有通里达表、升清降浊、调达气血、宣郁散火、驱风胜湿、镇惊止痉等作用，故可用治内伤外感之多种病症。杨氏谓方中“僵蚕、蝉蜕升阳中之清阳，姜黄、大黄降阴中之浊阴”，并谓：“一升一降，内外通和，而杂气之流毒顿消矣.名升降，亦双解之义”，故升降散愈病的机理就在于“升降”二字。盖“升降”系指气化功能而言，经谓“百病生于气”，“气乱则病”，“气治则安”。因此，不论是湿热疫毒还是内伤杂病的某些阶段，予以疏动气机、调节升降，均十分重要。气机升降恢复正常，其病自愈。他认为：“瘟病总计十五方……而升降散，其总方也，轻重皆可酌用。”近代著名中医专家蒲辅周认为升降散是治疗传染病的常用方剂，与治疗温病的名方-吴鞠通的银翘散一样重要，提出“瘟疫之升降散，犹如四时温病之银翘散。”由于升降散组方精当，疗效显著，临床广泛应用，治疗咽喉炎、皮肤瘙痒症、外感郁热和低热、呃逆、便秘，疗效满意。也是中医药治疗SARS初期的常用方。光明中医函授大学主编的《方剂讲解》收在解表剂中[10]。双根口服液是根据军事医学科学院附属医院的经验处方，是根据古方升降散加减而成，由大黄、板蓝根、芦根、僵蚕、射干等10味中药制备而成，具清热解毒、解表平疫之功效，治疗病毒性感冒引起的高热持续不退，伴有全身肌肉酸痛、乏力、头疼、咳嗽等症，收到了较好的临床疗效。2处方组成双根口服液由僵蚕、蝉蜕、淡豆豉、大黄、射干、鱼腥草、片姜黄、芦根、板蓝根、甘草组成。2.1僵蚕僵蚕Bombyxbatrycatus是蚕蛾科Bombycidae昆虫家蚕BombyxmoriLinnaeus4～5龄的幼虫感染（或人工接种)白僵菌Beauveriabassiana(Bals)Vuillan而致死的干燥全虫。本品原名白僵蚕，始载于《神农本草经》，列为中品。本品略呈圆柱形，多弯曲皱缩。长2～5cm，直径0.5～0.7cm。表面灰黄色，被有白色粉霜状的气生菌丝和分生孢子。头部较圆，足8对，体节明显，尾部略呈二分歧状。质硬而脆，易折断，断面平坦，外层白色，中间有亮棕色或亮黑色的丝腺环4个。气微腥。味微咸。别名天虫、姜蚕、白僵蚕。2.1.1化学成分僵蚕的化学成分主要是草酸铵、蛋白质、酶、游离氨基酸、白僵菌素、桷皮素、山萘酚、核苷、多糖、挥发油等物质。2.1.1.1草酸铵草酸铵被认为是抗惊厥和抗凝作用的主要活性物质，较多文献以草酸铵为指标成分对僵蚕的质量进行了研究。采用HPLC法测定了僵蚕中草酸铵的含量，色谱条件：色谱柱SineChromODS—BP(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为磷酸氢二铵水溶液(pH2.5)；流速0.5mL/min；柱温25℃；检测波长214nm。结果表明草酸铵在15.0～150.0g/mL范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，r=0.995(n=6)，平均回收率为96.5%，RSD为1.5(n=5)，样品平均含量为5.08%，RSD=1.8(n=3)[13]。2.1.1.2蛋白质文献报道僵蚕中的主要成分为蛋白质，且僵蚕中的蛋白质、多肽类和氨基酸可能与抗凝作用有关。采用了HPLC法测定僵蚕活性提取液与抗凝活性部位中氨基酸的含量，样品用5.7moV/LHC1水解后OPA试剂衍生化，色谱条件：色谱柱C1R(150mm×4.6mm，5μm)；流动相为A：50mmoL/L醋酸钠(pH6.8)-甲醇-四氢呋喃(82：17：1)，B：50mmoV/L醋酸钠(pH6.8)-甲醇-四氢呋喃(22：77：1)，梯度洗脱；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；荧光检测器：338Bill，425BE。结果表明僵蚕提取液和抗凝活性部位均含有所测的15种氨基酸残基，含量为38.98%～48.70%[13]。2.1.1.3黄酮类用RP-HPLC法同时分析僵蚕中槲皮素、山萘酚的含量，色谱条件为色谱柱ZORBAXSB-C18(150mm×4.6mm，5μm)；柱温30℃；甲醇-0.2%磷酸(45：55)为流动相；流速1.0mL/min；检测波长360nm。结果表明僵蚕中有槲皮素和山萘酚两种黄酮类成分，含量分别为0.22和0.64mg/g。2.1.1.4多糖类采用了蒽酮一硫酸比色法测定了僵蚕中多糖的含量。结果为甲醇提取法多糖含量11.21%，热水提取法为10.14%，微波辅助法为11.51%。2.1.1.5其他物质采用HPLC法测定了核苷、碱基等成分的含量，结果为尿嘧啶0.0116%、次黄嘌呤0.0088%，尿苷0.00889%，黄嘌呤0.0070%。采用GC／MS法测定了僵蚕中挥发油成分，结果僵蚕含有170种化学物质，5，6一二氢2，4，6-三甲基-4H-1，3，5-二噻含量最高。文献还测定僵蚕中白僵菌素、脂肪,l.及微量元素等的含量，白僵菌素的含量为0.0316～0.6259mg/g，脂肪约4%，含有18种元素中，Al、Fe、Zn、La、Mn含量较高[13]。2.2蝉蜕蝉蜕，以蚱蝉之名始载于《神农本草经》,列为中品。性寒，味咸。蝉蜕（cicadaeperiostracum）为蝉科昆虫黑蚱(cryptotympanapustulataFabricius)的若虫羽化时蜕落的皮壳，夏秋二季收集全形似蝉而中空，稍弯曲。长约4cm，宽约2cm。表面黄棕色，半透明，有光泽。头部有丝状触角1对，多已断落，复眼突出，颈部先端突出，口吻发达，上唇宽短，下唇伸长成管状。胸部背面呈十字形裂片，裂口向内卷曲，脊背两旁具有小翅2对；腹面有足3对，被黄棕色细毛。腹部钝圆，共9节。体轻,中空,易碎。无臭，味淡[26]。化学成分为蝉蜕中含有12种游离氨基酸；17种水解氨基酸，其中以蛋氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、酪氨酸的含量为高,总氨基酸量为53.35%;含微量元素24种，基中铝的含量最高，其次是铁(Fe)、钙(Ca)、镁、锰()、锌(Zn)、磷(P)；同时还具有大量的甲壳质(Chitin)及其降解产物壳聚糖(Chitosan)及盐酸氨基葡萄糖等[25]。2.3淡豆豉淡豆豉是由豆科植物大豆[Glycinemax(L.)merr.]的成熟种子和青蒿、桑叶等中药经发酵加工而成的制品，作为常用中药。《本草汇言》曰“淡豆豉，治天行时疾，疫疠瘟瘴之药也。”《伤寒论》也有记载。《本草纲目》曰“黑豆性平，作豉则温。既经蒸署，故能升能散；得葱则发汗，得盐则能吐，得酒则治风，得薤则治痢，得蒜则止血；炒熟则又能止汗，亦麻黄根节之义也。”历版《中国药典》均有记载。干燥品呈椭圆形，略扁，长0.5～1厘米，宽3～6毫米。外皮黑色，微有纵横不整的皱折，上有黄灰色膜状物。外皮多松泡，有的已脱落，露出棕色种仁。质脆，易破碎，断面色较浅。有霉臭，昧甘。以色黑、附有膜状物者为佳。性凉，味苦、辛。化学成分为种子含蛋白质、脂肪、胆碱、黄嘌呤（xanthine）、次黄嘌呤（hypoxanthine）、胡萝卜素、维生素B1、B2、烟酸、天冬酰胺、甘氨酸、笨丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等。2.3.1木素和大豆苷元色谱条件：AgilentHC-C18色谱柱(250×4.6mm，5.0μm)；甲醇-1％冰醋酸(50：50)为流动相；流速为1mL/min；检测波长261nm；柱温30℃，进样量10止。理论塔板数以染料木素峰计算应不低于3000，大豆苷元和染料木素色谱峰的分离度均1.5。色谱实验结果根据保留时间定性、峰面积定量，根据标准曲线计算样品染料木素和大豆苷元的含量。2.3.2异黄酮UV条件：以染料木素为对照品，在其最大吸收波长261nm处测定供试品B溶液吸光度。根据标准曲线计算样品总异黄酮的含量[32]。2.4大黄大黄（radixetrhizomarhei)为蓼科植物掌叶大黄RheumpalmatumL.、唐古特大黄RheumtanguticumMa-xim.ExBalf.或药用大黄RheumofficinaleBaill.的干燥根及根茎。秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖，除去细根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。大黄载于《神农本草经》，列为下品。李当之名为“将军”[21]。该药材的商品主流为掌叶大黄，此外，唐古特大黄和药用大黄亦有少量生产，以上为药材的正品。另外，还混杂一些次大黄，如藏边大黄、河套大黄、华北大黄、天山大黄等，其泻下作用很差。大黄呈类圆柱形、圆锥形、卵圆形或不规则块状，长3～17cm,直径3～10cm。除