人教版教学课件DNA重组技术的基本工具

1.1DNA重组技术的基本工具授课班级：高二（11班）江阴一中陶刚琴蓝色素基因三色紫罗兰玫瑰导入一、基因工程的概念目的基因受体细胞提供的材料1、一段含有三色紫罗兰蓝色素基因的DNA片段2、受体细胞-----玫瑰体细胞要实现三色紫罗兰的蓝色素基因在玫瑰体细胞内表达从而获得相应性状，我们该怎么做呢？基因工程培育蓝色妖姬的关键步骤：关键步骤一：在体外对含有三色紫罗兰蓝色素基因的DNA分子进行切割关键步骤二：三色紫罗兰蓝色素基因与质粒连接关键步骤三：三色紫罗兰蓝色素基因导入受体(玫瑰）细胞基因的剪刀——限制酶基因的针线——DNA连接酶基因的运载工具——载体提供的物品：剪刀、针线、载体--环状DNA、一种含有目的基因的DNA片段、另一种生物体的体细胞。提示：剪刀、针线无情，请小心。以大肠杆菌细胞内获得得ECOR1为例限制酶的作用：能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且准确地在每一条中特定部位的两个核苷酸之间切割。（一）限制性核酸内切酶分子手术刀二、DNA重组技术的基工具（一）限制性核酸内切酶分子手术刀ATGGCATCTTCGAA磷酸二酯键：即脱氧核糖、磷酸之间的连接中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。黏性末端平末端（一）限制性核酸内切酶分子手术刀（三）基因进入受体细胞的载体分子运输车具备哪些条件才能充当“分子运输车”？1、外源DNA片段怎样才能插入载体呢？2、插入载体的DNA片段怎样才能确保自己在受体细胞分裂时不被丢失从而稳定地存在于子细胞内？3、目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？4、如果载体对受体细胞有害将怎样？1、载体必须具备的条件：A、具有多个限制酶切点，以便与外源基因插入其中；B、具有特殊的遗传标记基因，便于进行筛选。C、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；D、对受体细胞无害（双链DNA分子、载体DNA分子大小应合适等。）（三）基因进入受体细胞的载体分子运输车（三）基因进入受体细胞的载体分子运输车能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点标记基因将来可用含青霉素的培养基鉴别。2、基因工程中通常利用质粒作为载体质粒是一种裸露的、结构简单独立于细菌染色体之外、具有自我复制能力的双链环状DNA分子。3、载体种类：除质粒外，还有入噬菌体的衍生物、动植物病毒等（三）基因进入受体细胞的载体分子运输车（二）DNA连接酶分子缝合针2、作用部位：磷酸二酯键GAATTCCTTAAGGPAP1、作用：把两条双链之间的缝隙“缝合”起来。DNA片段要实现目的基因与载体的连接则在对其切割时应选用同一种限制酶。1、用DNA连接酶连接两个相同的黏性末端要连接几个磷酸二酯键？用限制性内切酶切一个特定基因要切断几个磷酸二酯键？（二）DNA连接酶分子缝合针二、DNA重组技术的基工具根据酶的来源不同，可以将这些酶分为两类：1.从大肠杆菌中分离得到：E.coliDNA连接酶，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接。2.从T4噬菌体中分离到：T4连接酶，既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。3、分类（二）DNA连接酶分子缝合针1、请从结构分析，为什么不同生物的DNA能够重组？