中药蟾皮的研究进展

中药蟾皮的研究进展[摘要]蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的干燥皮，现代药理学研究表明蟾皮提取物具有抗肿瘤、免疫调节、抗乙肝病毒等多种作用，其水溶性成分制剂华蟾素注射液临床上用于治疗各种癌症和乙型肝炎，疗效确切，在抗肿瘤方面取得了显著的效果。蟾皮所含化学成分主要有蟾蜍二烯羟酸内酯类、蟾毒色胺类以及甾醇类等。本研究综述近年来国内外学者对蟾皮的化学成分、药理作用、临床应用的研究概况。蟾皮（Coriumbofonis），又称蛤蚆皮《医方约说》，癞蟆皮《中药材手册》，蟾蜍皮、蛤蟆皮《中草药学》，为蟾蜍科动物中华大蟾蜍（BufobufogargarizansCantor）或黑眶蟾蜍（BufomelanostictusSchneider）等的干燥皮。于夏、秋季捕捉后剥下整皮，晒干而得。本品最早记载于《本经逢原》，自古至今沿用，其性味辛、凉、微毒，主入胃经，具有清热解毒，利水消胀的功效，主治痈疽、肿毒、瘰疬、肿瘤、疳积腹胀、慢性气管炎等症[1]。近年来用于多种癌肿或配合化疗、放疗治癌，不仅能提高疗效，还能减轻副作用，改善血象[2]1.特性及分布蟾蜍属两栖动物，主要生活于池塘、沼泽、农田、宅旁、路边等有水草的地方，昼伏夜出，傍晚觅食，以昆虫、螨类、鲜嫩植物为食。春夏季间产卵。它有冬眠习性．入冬后．潜入泥穴或水底越冬。中华大蟾蜍分布于东北、华北、华东、华中及陕西、甘肃、青海、四川、贵州等地。黑眶蟾蜍分布于浙江、江西、福建、台湾、湖南、广东、广西、四川、贵州、云南等地。蟾蛛科(Bufondae)有13属约300种,除蟾蛛属外,主要分布于东南亚,少数分布于非洲、南美,我国产2属12种及亚种。蟾蛛属动物有250多种,分布于世界各地。我国有近10种,主要分布的3种分别是:大蟾蛛华西亚种(BofobufoandrewsiSchmidt)、大蟾蛛中华亚种(Bufobufoga褪,rizan:Cantor)以及黑眶蟾蛛(Bufomelanostitusschneider)。蟾酥(Vene~Bufonis)一词源于《本草衍义》,属名贵中药,《中华人民共和国药典》(2005年版)明确规定本品为蟾赊科动物中华大蟾(Bufobufogargarizanscantor)或黑眶蟾蛛(Bufomelanostitu,Schneider)的干燥分泌物。对于蟾蛛属动物的化学成分的研究始于1817年。20世纪60、70年代,国内外学者对蟾蛛属的动物的研究主要集中在蟾酥和日本蟾蛛的化学成分的研究,20世纪80年代日本学者KaZutakeShimada等对黑眶蟾蛛、中华大蟾赊、绿色蟾蛛、热带蟾蛛等的化学成分进行了研究。现代药理学研究表明蟾酥具有强心、抗肿瘤、局麻、镇痛、抗炎等作用。蟾蜍的生活习性，喜陷蔽于泥穴、潮湿石下、草丛内、水沟边。皮肤易失水分，故白天多潜伏陷蔽，夜晚及黄昏出来活动。成年蟾蜍多集群在水底泥沙内或陆地潮湿土壤下越冬。停止进食，以体内贮布在肝糖来维持最低的新陈代谢，到翌年气温回升到10-20℃时，才结束冬眠。夜间捕食、活动，以甲虫，蛾类，蜗牛，蝇蛆等为食。人工饲养繁殖比其他蛙类容易[3]。繁殖技术，蟾蜍种源可从野外捕获，也可以捞取卵块或蜊蚪进行饲养。每年春末夏初，5-8月份为蟾蜍的产卵季节。在气温升至6-8℃时，蟾蜍即开始雌雄抱对，人工养殖时雌雄比例比3：1为宜，受精率可达90%以上。温度在16℃时便可产卵。每次产卵量大约在5000枚左右。一般呈双行排列在管状胶质带内，卵带可长达几米，缠绕在水生植物上。人工孵化时水温应控制在10-30℃之间，以℃为宜。并随时注意调节水温。苦遇寒流或暴雨天气，可用塑料薄膜覆盖。经过3-4天即可孵化出小蝌蚪。小蝌蚪生活在水中常成群向一个方向游动。饲养管理，建立蟾蜍饲养场要靠近水源，四周有草，可利用池塘、水沟或田埂作为饲养池。场地四周应筑围墙，墙内留有草坪、菜地，以供蟾蜍栖息及活动。池中有水草生长，稀必适宜。另外，在棉田和稻田中也可以散养。蟾蜍的蝌蚪在孵出2-3天内开始吃食，先以卵膜为食，以后吃一些植物碎屑、水中的微生物和浮游生物。蝌蚪的食物有腐殖质、猪牛粪、糠麸、蔬菜、嫩草、鱼类及畜禽类、生熟废弃物等。蝌蚪变态成幼蛙后，即以活饵为食。可以培养蚯蚓、蝇蛆等各种昆虫，也可以用诱虫灯诱引各种昆虫。供蟾蜍食用。蝌蚪池水深要保持在0.2-0.4m深，注意及时排水，水温在16-28℃时为生长发育最适温度，随着蝌蚪的生长变大，要注意及时分池，一般经过2个月后开始变态幼蛙。幼蛙饲养要注意密度不宜过大，每1m2放养30-50只为宜。要防止逃失和天敌侵害。在阳光强烈时，可以喷洒水以防皮肤干燥。在秋末即要为蟾蜍准备好越冬场所，可以在饲养池的角落处堆放干草使其越冬，北方寒冷可另建越冬温室或越冬深水池，池水应比冰冻层大1倍为宜。2.性状鉴别本品呈扁平板状，厚约0.5mm，头部略呈钝三角形。四肢屈曲向外伸出。外表面粗糙，背部灰褐色，布有大小不等的疣状突起，色较深；腹部黄白色，疣点较细小。头部较平滑，耳后腺明显，呈长卵圆形，八字状排列。内表面灰白色，与疣点相对应处有同产大小黟以浅凹点。较完整者四肢展平后，前肢趾间无蹼；后肢长而粗壮，趾间有蹼，质韧，不易折断。气微腥。味微麻[4]2.1中华大蟾蜍体长一般在10cm以上，体粗壮，头宽大于头长，吻端圆，吻棱显著；鼻孔近吻端；眼间距大于鼻间；鼓膜明显，无犁骨齿，上下颌亦无齿。前技长而粗壮，指、趾略扁，指侧微有缘膜而无蹼，指长顺序3、1、4、2，指关节下瘤多成对，常突2，外侧者大。后肢粗壮而短，胫跗关节前达肩部，左右跟部不相遇，趾侧有缘膜，蹼常发达，内跖变形长而大，外跖突小而圆。皮肤极粗糙，头顶部较平滑，两侧有大而长的耳后膜，其余部分满布大小不等的圆开瘰疣，排列较规则的为头的之瘰疣，斜行排列几与耳后腺平行。此外，沿体侧之瘰疣排列亦较规则，胫部之瘰疣更大，个别标本有不明显这跗褶，腹面皮肤不光滑，有小疣。颜色亦异颇大，生殖季节雄性背面多为黑绿色，体侧有浅色的斑纹；雌性背面色较浅，瘰疣乳黄色，有时自眼后沿体侧有斜行之黑色纵斑，腹面乳黄色，有棕色或黑色细花纹。雄性个体较小，内侧三指有黑色婚垫，无声囊。[5]2.2黑眶蟾蜍体长7-10cm，雄性略小；头高，头宽大于头长；吻端圆，吻棱明显，鼻孔近吻端，眼间距大于鼻间距，鼓膜大，无犁骨齿，上下颌均无齿，舌后端无缺刻。头部沿吻棱、眼眶上缘、鼓膜前缘及上下颌缘有十分明显的黑色骨质棱或黑色线。头顶部显然下凹，皮肤与头骨紧密相连。前肢细长；指、趾略扁，末端色黑；指长序为3、1、4、2；指关节下瘤多成对外常突大，内侧者略小，均为棕色，后肢短，胫跗关节前达肩后方，左右跟部不相遇；足短于胫；趾侧有缘膜，相连成半蹼，关节下瘤不明显；内跖突略大于外跖突。皮肤极粗糙，除头顶部无疣外，其余布满大小不等之圆形疣粒，疣粒上有黑点或刺；头两侧为长圆形之耳腺；近脊中线由头后至臀部有2纵行排列较规则的大疣粒。体大的黑眶蟾蜍腹面满布小棘。生活时体色变异较大，一般为黄棕色略具棕红色斑纹。雄性第1、2指基部内侧有黑色婚垫，有单咽下内声囊。[5]2.3皮肤组织观察雌雄中华蟾蜍的皮肤结构无差异，均由表皮和真皮组成；背侧和腹侧皮肤的形态却存在较大差异。皮下有大的淋巴间隙，易与其下的组织剥离[6]。表皮为复层上皮．含多层细胞，从外向内分为角质层、颗粒层、棘细胞层和生发层。角质层由角化的扁平细胞组成，少许角化细胞有细胞核。细胞角化均匀，相邻细胞间未见间桥。三色泫染成橘黄色，H．E呈黄褐色，并与颗粒层细胞区分明显。腹侧皮肤的角质层比背侧薄，如头腹侧厚24～6.0um，头部侧厚4.8—7.2um。背部的疣粒突起和头部骨棱处，其表皮角质化尤其明显。颗粒层有1～2层细胞，在腹侧此层细胞大部分呈颗粒状；背侧此层细胞圆形和椭圆形，具复层扁平上皮细胞特征。随着向外推移，角化形成角质层。棘细胞层有2～3层细胞。腹侧此层细胞呈多边形．直径11.5～19.1um；核大，直径5.1～8.9um，核质比036～067。随着向外推移，细胞由人的多边形逐渐变小，形成颗粒层。背侧此层细胞呈梭形，互相嵌台呈覆瓦状。生发层位于表皮最内层，有1层细胞，其基膜明显，三色法呈浅兰色，腹侧此层细胞呈立方柱形，排列紧密整齐，其长径9．6～19．2um，短径6.4—12.8um；细胞核呈圆形或椭圆形，其长径7．2～12.0um，短径3.6～7.2um，核质比0.5～0.8。背侧此层细胞呈圆形，核大。生发层细胞不断产生新的细胞，向外层推移，逐渐分化成各层细胞。真皮从外向内分为疏松层、筛层和致密层，背侧皮肤的真皮比腹侧厚。疏松层基质呈匀质胶状，紧贴于表皮之下，有大量粘液腺、纤维、血管、神经末梢等分布。胶原纤维和弹性纤维交错排列，三色法染成兰色，H.E呈浅红色。胶原纤维疏松状散布，互相交织，粗细不匀；弹性纤维较细，分支交织，断端呈卷曲状。纤维间主要有成纤维细胞．三色法染成红色，H.E呈兰色，其少许细胞的细胞膜形成星状突起．核较大，呈椭圆形，核仁明显。在真皮浅层、疏松层形成乳突状结构。突人表皮生发层。背侧疏松层中的成纤维细胞较腹侧的密集。毛细血管较多分布于疏松层的腺体周围，三色法使其管腔呈橘黄色，腔内血细胞呈红色，与周围的兰色纤维区分明显。筛层很薄，仅在头背部分布明显，其他部位未见。致密层主要由胶原纤维组成，排列紧密，胶原纤维粗细不匀，粗的排列紧密，呈平行波浪、状，和细的胶原纤维垂直交错，形成了复杂的网状结构，有人称之为“编织物”，多见于背侧皮肤。皮下层位于真皮之下，主要由疏松结缔组织、淋巴间隙及血管构成。此层与真皮交界处有发达的淋巴问隙，使皮肤易与其下的组织分离。头背部的表皮最厚，前肢腹部的最薄；头背部的真皮最厚，头腹部的最薄。腺体由分泌部和导管组成。分泌部由多个泡状的上皮细胞组成，下沉于真皮疏松层内；导管由扁平上皮组成，与表皮的细胞相连，属单管泡状腺。据分泌物性质，分为粘液腺和毒腺，前者较少，后者较多、二者在浅层相间分布。分泌部由多个细胞组成，内腔中空，细胞圆形，紧密相连，核位于基底部，由导管开口于体表。属浆液腺，内腔满布颗粒状分泌物，也称颗粒腺。毒腺主要分布在背侧的躯干部和后肢(背腹侧的毒腺之比较见表2)，形成许多疣粒，使中华蟾蜍体表显粗糙。耳后腺是最大的毒腺，分泌方式主要是顶浆分泌兼部分全浆分泌。据毒腺内部细胞结构及其形态变化的特点，将其发育过程分为早期、中期、后期。早期毒腺分泌细胞结构完整，界限清楚，周围分布疏松结缔组织；分泌细胞的核呈圆形或椭圆形，分泌物聚集在管腔中央。中期毒腺分泌细胞的界限逐渐模糊，细胞膜开始消失，有少部分细胞核脱离并散布在管腔壁周围；毒液充满于管腔。后期毒腺分泌细胞的大部分核脱离并紧贴于周围结缔组织；有些核游离到分泌物中；毒腺周围毛细血管丰富。色素层位于表皮之下，主要由黑色毒细胞组成．其不规则．形成很多粗的分支，背侧色素层比腹侧的发达，更密集，彼此交织成块状。3.成分分析蟾皮的化学成分复杂，至今研究人员已从中分离出强心甾体化合物、吲哚类生物碱和甾醇类等多种化学成分，依其理化性质可大致分为脂溶性成分、水溶性成分以及无机成分3.1.脂溶性化学成分代丽萍等从中华大蟾蜍皮石油醚萃取部分分离得到6个化合物并鉴定其结构为：胆甾醇(cholesteml)，棕榈酸胆甾烯酯(palmitaticacidcholesterylester)，蟾毒它灵(bufotalin)，沙蟾毒精(arenobufagin)，嚏根草配基(heIlebrigenin)，嚏根草配基—3—辛二酸半(hellebrigenin—3—hemisuberate)[6]。张英等分别从日本产的台湾蟾蜍(BufovulgarisformosusBoulenger)、绿蟾(B．viridisLaur)、台湾产的曼谷蟾蜍(B．bankorensisBorbour)以及国产中华大蟾蜍(B．bufogargarizansCantor)皮中分离出以琥珀酰、己二酰和庚二酰代替辛二酰的精氨酸酯类化合物及硫酸酯类化合物，而且又从北美产的蟾蜍(B．americanus)和台湾产的黑眶蟾蜍(B．Melanosti