乳品中抗生素残留免疫学快速检测方法及研究进展

目录摘要...................................................................1关键词.................................................................1ABSTRACT.................................................................1KEYWORDS.................................................................1前言...................................................................21、乳品中抗生素残留的原因..............................................32、乳品中抗生素残留的危害..............................................33、抗生素残留现状......................................................44、抗生素残留的主要检测方法............................................44.1微生物检测法....................................................44.2理化检测方法....................................................54.3免疫学检测方法..................................................55、新型免疫学快速检测方法..............................................75.1免疫传感器......................................................75.2蛋白芯片........................................................85.3表面等离子体共振................................................85.4快速检测试纸条..................................................86、结束语..............................................................97、参考文献...........................................................108、致谢...............................................................12新乡学院专科毕业论文（设计）1摘要：近年来，随着食品工业的不断进步，各类食品层出不穷。但食品安全问题却频频发生，特别是乳品抗生素残留问题，引起了广大消费者的热切关注。如何快速检测乳品中抗生素，降低抗生素残留，消除抗生素对消费者带来的健康威胁，成为乳品企业关注的焦点问题。因此，我们要尽快开发或引进先进的抗生素检测方法，从源头杜绝抗生素，保障乳品的安全。本文归纳了抗生素残留的原因及危害，详细介绍了有关乳品抗生素残留免疫学快速检测方法，对乳品抗生素残留的前景进行了展望。关键词：乳品抗生素残留免疫学快速检测方法Abstract:Inrecentyears,alongwiththeadvanceofthefoodindustry,allkindsoffood.Butfoodsafetyproblemsoccurfrequently,especiallythemilkantibioticresidues,causedtheearnestattentionofconsumers.Howtoquicklydetectingantibioticsinmilk,reduceantibioticresidues,eliminatingantibioticthreattothehealthofconsumers,becomethefocusofthedairycompanies.Therefore,weshoulddevelopassoonaspossibleortheintroductionofadvanceddetectionmethodofantibiotics,antibioticanderadicatethesource,toensurethesafetyofdairyproducts.Thispapersummarizesthereasonsandharmsoftheantibioticresidues,detailedintroducestherelatedrapidimmunologicalmilkantibioticresiduesdetectionmethod,theprospectsofantibioticresiduesinmilkproducts.Keyword：ThedairyAntibioticresiduesimmunologyRapiddetectionmethods新乡学院专科毕业论文（设计）2前言随着经济的发展，人民生活水平的提高，乳品在人们膳食结构中所占的地位越来越重要，人均占有量已达到21.7kg[1]。乳品营养素种类齐全，除含有全部的必需氨基酸和丰富的蛋白质外，还含有部分重要的维生素和必需的微量元素，易被人体吸收。其含有的活性物质能提高人体的免疫力、增强人体体质，被公认为大自然赐予人类最理想、最接近于母乳的完美天然食品。在我国，随着乳制品工业的迅速发展，畜牧业也发展迅猛，β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、氯霉素类、磺胺二甲基嘧啶等抗生素作为饲料添加剂和动物药物，在预防和治疗动物疾病方面的广泛应用，造成乳品中抗生素的残留，给消费者健康带来了威胁，特别是近年来出现的一系列乳品安全问题，严重打击了消费者对乳品的信心，抗生素残留则是乳品安全问题中较为突出的一个，已成为公众关注的焦点[2]。因此，寻求快速、安全的抗生素残留检测技术成为近年来研究的热点问题。新乡学院专科毕业论文（设计）31、乳品中抗生素残留的原因我国的奶牛饲养主要以自营牛场模式为主，农户饲养奶牛管理意识低下以及经济条件所限，造成奶源质量低、污染物残留量高，同时，兽药管理不严格，使得奶牛乳房炎和其它感染性疾病都明显高于发达国家，因此我国的乳品的抗生素残留问题就格外严重。乳品中抗生素的来源最终要追寻到原料生产及其流通过程。其中造成乳品中抗生素残留的原因有：①美国食品和药品管理局（FDA）调查结果表明，对泌乳期奶牛用药不当是造成乳中抗生素残留的重要原因[3]。②违反国家规定，长期小剂量添加抗生素到饲料中。此类抗生素在动物体内需要一段时间才能完全排除体外，极易在动物体内蓄积，因此造成抗生素残留。③给患病奶牛使用过的挤奶工具和贮奶设备，未经彻底清洗和消毒就用于其他健康牛只，造成牛奶中抗生素的交叉污染。④个别饲养户和经营商,为了防止牛奶酸败变质而非法在其中掺入抗生素,以使牛奶通过验收而保证其经济利益。⑤利用抗生素治疗乳牛临床型、隐性型乳房炎和子宫内膜炎，其中乳管注药法就是让药物直接注入乳房，通过乳腺管进入某个已感染区进行消炎，乳牛在接受这种治疗后，乳中的药物残留期可延缓到停药3～5d后[4]。2、乳品中抗生素残留的危害虽然抗生素对人类疾病的预防和治疗以及兽医临床中发挥了巨大的作用，但长期饮用残留有抗生素的乳品，可造成药物积累，当其达到一定浓度后，就会对人体产生毒副作用。抗生素对人体会产生以下毒副作用：①长期饮用含有抗生素乳品的人易产生耐药性，一旦患者再使用同种抗生素治疗将很难奏效。②若消费者长期饮用含有抗生素的乳品，等于长期服用小剂量的抗生素。对抗生素有过敏体质的人服用残留有抗生素的牛乳后,一般会发生过敏反应。③正常人体内寄生着大量菌群，如果长期饮用含有抗生素的乳品，极易导致微生物平衡破坏，人与动物易发感染性疾病。④链霉素可引起肾损害和听力神经受损，四环素引起肝损害，氯霉素残留会对人造成致命后果，引起再生障碍性贫血等；[5]⑤一些性质稳定的抗生素被排泄到环境中会造成环境污染，破新乡学院专科毕业论文（设计）4坏生态平衡。⑥抗生素可严重影响干酪、黄油、发酵乳的起酵和后期风味的形成[6]。⑦抗生素的残留会导致乳品品质降低，降低产量和质量，给生产者带来巨大的经济损失。3、抗生素残留现状一项对我国几个大城市如西宁、南宁、广州、杭州、泉州、北京等城市乳制品质量的检测调查结果显示，在近八百份乳品采样中，抗生素残留超标居不合格项目第一位[7]。从超标的情况看，超标率达10%以上的药物有10种，超标率达20%以上的药物有8种。乳品中残留的抗生素主要为青霉素类药物和磺胺类药物[8]。我国过去对乳品中抗生素残留卫生指标无明文规定，直到2001年10月，农业部发布实施了《无公害食品生鲜牛乳行业标准》，对新食品安全鲜牛乳的卫生指标明确了抗生素不得检出[9]。但对于这一行业标准，我国目前并没有严格执行，致使乳品中抗生素残留问题一直未能得到解决，以致引起人们对乳品安全问题的担忧，并成为越来越受关注的焦点。从以上情况可以看出，我国乳品中抗生素残留现状并不乐观，有关部门应加强对乳品生产的管理，并对乳品中的抗生素等药物残留进行检测和监控，以保证人们饮用乳品的卫生和安全。4、抗生素残留的主要检测方法目前，国内外用于检测乳及乳制品中残留抗生素的方法很多，按照检测原理和使用的仪器可分为：微生物检测法，理化检测法和免疫检测法等[10]。4.1微生物检测法微生物检测法是较为广泛应用的最经典方法，测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用,对样品中抗生素残留进行定性或定量检测。其优点是操作简单，可靠，费用低，无需高级实验设备，一般实验室及养殖场都能使用。因为牵涉到微生物的培养，所以检测时间相对较长，不能实现定量检测，不能满足某些抗生新乡学院专科毕业论文（设计）5素最低限的检测。微生物检测法主要有TTC法（氯化三苯基四唑氮法）、BSDA法（嗜热脂肪芽孢杆菌纸片法）、PD法（纸片法）及STOP法（拭子法）等[11]。4.2理化检测方法理化检测方法是根据抗生素分子理化性质对其进行分离和检测的方法，如色谱法、荧光法、毛细管电泳、色谱质谱联用技术等，理化检测方法分离速度快、效率高和自动化程度高，能检测抗生素的具体含量，敏感性较高，结果准确，但待检样品需经一系列的预处理，繁琐费时，还必须有相应的价格昂贵的仪器设备。一般在大型实验室使用，适合于精确测定。4.3免疫学检测方法免疫分析法的基本原理是以抗原或半抗原和抗体特异性结合为抗原—抗体复合物的免疫反应为基础的免疫学技术。这种检测方法可以具体分析是哪种抗生素，因为抗体除了可以针对某类抗生素所共有的结构产生特异抗体外，也可以针对共有结构上的不同修饰基团而产生特异性抗体。免疫分析技术最突出的优点是操作简单、速度快、分析成本低。另外，有些抗生素，如磺胺类抗生素由于采用微生物检测方法缺乏灵敏度和特异性，所以只有用免疫法才能实现对其快速检测[12]。免疫学快速检测是基于抗原-抗体特异性反应的检测方法。其分类方法不一而足,一般可分为放射免疫分析、酶免疫分析、荧光免疫分析、发光免疫分析、胶体金免疫分析、仪器免疫分析和无标记免疫分析等。1959年建立的放射免疫分析被认为是免疫检测分析方法建立的标志,并获得了1977年的诺贝尔生理学或医学奖[13]。4.3.1放射免疫法（RIA）放射免疫法是一种应用放射性同位素的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合而成的体外微量分析方法。RIA法的优点是灵敏、特异、简便易行