不同方法炮制的黄精中多糖含量的比较

不同方法炮制的黄精中多糖含量的比较喻雄华1，张大舜2（1.湖北省仙桃市中医院，湖北仙桃433000；2.湖北省仙桃市药检所，湖北仙桃433000）[摘要]目的：分析不同方法炮制的黄精中多糖含量变化情况，探索便于规模化生产的黄精炮制新方法。方法：比色法。结果：在120℃6h蒸汽加热条件下加工的黄精与传统方法加工的多糖含量基本一致，且性状相同。结论：在120℃6h蒸汽加热条件下加工，有可能成为黄精炮制的新方法，但还需进行更深入的研究。[关键词]黄精；炮制；多糖。[中图分类号]R283．3；R284．1[文献标识码]A[文章编号]1001—5213（2006）10-1306-2中药黄精为百合科植物滇黄精PolygonatumkingianumColl.etHemsl.、黄精PolygonatumsibiricumRed.或多花黄精PolygonatumcyrtonemaHua的干燥根茎[1]。自古以来，黄精蒸制方法复杂，耗时较长。为了提高生产效率，减轻劳动强度，本试验尝试采用现代炮制方法对黄精进行炮制,并对不同方法炮制的黄精中的多糖含量进行了比较。1实验材料样品：湖北郧阳产黄精（武汉市药材公司，经仙桃市药检所所鉴定）。仪器：721分光光度计（上海第三分析仪器厂）；EA1104电子天平（上海精天电子仪器厂）；F-320型电子恒温不锈钢水浴锅（上海宏兴机械仪器实业制造公司）；ZFQ85A型旋转蒸发器（上海申生科技有限公司）；ZK-82A型真空干燥箱（上海实验仪器总厂）；LJX-Ⅱ型离心沉淀机（上海医用分析仪器厂）。试剂：葡萄糖（北京益利精细化学品有限公司，批号：020903）；蒽酮（北京化学试剂二厂，批号：980726）；其它试剂均为分析纯。2样品的制备2.1生品取净黄精切片,80℃干燥５h即得样品1。2.2润—蒸—闷法[2]取净黄精，加水拌匀使之湿润，旺火蒸2h，淋水1次，使所有黄精都淋到水，再蒸24h熄火，闷一夜，取出切片，80℃干燥10h即得样品2。2.3高温湿热蒸汽法取净黄精，加水拌匀后装入高压蒸汽消毒柜，在120℃、0.2Mpa条件下，分别蒸制2h、4h、6h.取出切片，80℃干燥10h即得样品3、4、5。3方法与结果3.1黄精多糖的提取与纯化取已干燥的黄精粉碎成粗粉，按文献方法[3]制得黄精多糖。以生黄精30g制得黄精多糖4.2451g，得率为14.15%,留待备用。3.2标准曲线绘制[4]3.2.1对照品溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品0.2692g，置于250mL量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，配成1.0768g·L－1的对照品溶液，精确移取此溶液取2.5，5，10，15，20mL分别置于100mL量瓶中稀释到刻度，摇匀，配成系列标准溶液。3.2.2蒽酮-硫酸试液的配制称取0.33g蒽酮，加100mL硫酸，置于棕色瓶中，混合摇匀置于冰箱中（现配现用）。3.2.3标准曲线的制备分别准确移取1mL系列标准溶液于具塞试管中，以1mL纯化水作空白，每管再加入4mL蒽酮-硫酸试液，立即摇匀，置于冰水浴中，然后一起置于沸水浴中加热7min，之后用流动自来水迅速冷却至室温，放置10min后，于620nm处测定吸光度，以吸光度(A)对葡萄糖浓度(C)作回归处理，得回归方程：C=0.00555+0.266A，r=0.9993。3.2.4换算因子的测定精密称取55℃真空干燥至恒重的黄精多糖20mg，置于50mL量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，制得黄精多糖贮备液，蒽酮-硫酸比色法测定其吸光度(A)，由回归方程求出此黄精多糖贮备液中葡萄糖浓度，测得其葡萄糖含量，按下式计算换算因子。f=W/(C·D)(1-1)式中：W为称取多糖的重量mg，C为黄精多糖贮备液中葡萄糖浓度g·L－1，D为多糖的稀释因素mL。按“3.1”项下的方法制得多糖透析液真空浓缩后，取等量20mL浓缩液2份，经醇沉洗涤后，一份直接加纯化水溶解（复水性稍好），定容，比色；另一份真空干燥至恒重，称得黄精多糖的干重，测得一个换算因子f1。同时取真空干燥的多糖溶于水，再测得一个换算因子f2。则此样品的平均换算因子f=(f1+f2)/2各种炮制条件下的样品制得多糖的平均换算因子分别为：样品1为2.038；样品2为1.956；样品3为1.9889；样品4为1.9570；样品5为1.9499。3.2.5样品中黄精多糖含量的测定⑴样品溶液的制备精密称取黄精样品5g，加入80%乙醇100mL，95℃水浴回流1h，趁热抽滤，滤渣用80%热乙醇洗2次（60mL×2），再重复1次。挥干溶剂后，滤渣连同滤纸置于烧杯中，加100mL纯化水60℃水浴温浸1h，提取5次，合并滤液，离心分离(4000r·min－1，10min)，上清液置于500mL量瓶中，用少量纯化水洗涤残渣，洗液与上清液合并以蒸馏水定容至刻度，用移液管移取10mL溶液置于50mL量瓶中，以纯化水定容至刻度，摇匀备用。⑵样品中多糖含量的测定精密吸取“3.2.5.1”项所得样品溶液1mL于具塞试管中，按照“3.2.3”项下的方法测定吸收度(A)，由回归方程计算供试液中葡萄糖浓度(C)，按下式计算样品中黄精多糖的含量。样品中黄精多糖的含量(%)=C·D·f/W×100（1-2）式中C为供试液中葡萄糖浓度(mg·mL－1)，D为多糖的稀释因素，f为平均换算因子，W为供试黄精的质量(mg)。3.2.6重复性实验精密称取5份黄精各5g，按照“3.2.5.1”项下的方法同时制备5份样品溶液，精密移取各样品溶液各1mL，分别置于具塞试管中，按照“3.2.3”下的测定方法测定吸收度(A)，计算黄精多糖的含量，检验此测定方法的重现性，结果黄精多糖含量的平均值为14.148%，RSD为2.38%(n=5)。3.2.7稳定性试验精密吸取按“3.2.5.1”中样品溶液制备方法制备的生黄精提取液1mL于具塞试管中，按照“3.2.3”项下的测定方法测定吸光度(A)，每隔2h时测定1次，连续8h考察其稳定性。结果提取液显色后吸收度在8h内无明显变化，其吸收度平均值为0.4998，RSD为1.64%。3.2.8加样回收率试验精密称取5份生品黄精各2.5g，加入黄精多糖约200mg，按照“3.2.5.1”项下样品溶液的制备和“3.2.3”项下的测定方法操作，测定吸收度(A),计算回收率，结果见表1表1加样回收率试验结果（n=3）Tab1Resultofrecoverytest(n=3)取样量/g原含量/g加样量/g测得量/g回收率/%平均值/%RSD/%2.50312.49762.51182.50972.49190.35490.35330.35530.35510.35260.20160.20470.20330.20290.20040.54040.59340.55020.53960.535397.199.998.596.796.897.81.413.2.9不同样品的黄精中多糖含量的比较精密称取黄精样品各3份，按“3.2.5.1”项下样品溶液的制备和“3.2.3”项下的测定方法操作，测定收度(A)，从回归方程中计算供试液中葡萄糖浓度(C)，据式(1-1)和式(1-2)计算出样品中多糖的含量，结果见表2。表25种黄精炮制品中多糖含量的比较（n=3）Table2ComparisonofpolysaccharidescontentoffiveprocessedRhizomaPolygonati(n=3)样品编号加工条件含量/%RSD%12345净选干燥蒸26h，闷一夜120℃2h120℃4h120℃6h14.158.2513.3310.658.201.932.251.842.262.044讨论多糖含量的测定有多种方法。本实验是利用多糖在浓硫酸作用下水解生成单糖，并迅速脱水生成羟甲基糠醛，羟甲基糠醛与蒽酮缩合成蓝色化合物，该化合物颜色深浅与糖的浓度成正比。实验表明此法简便，且供试液在8h内显色稳定，重复性较好。但实验前必须先用80%乙醇回流提取，除去样品中的单糖、双糖、低聚糖、苷类、生物碱及醇溶性蛋白等干扰性成分。测定结果表明生品黄精中多糖含量较高，不同条件下加工炮制后，各样品含量均有降低，这是因为多糖大量水解成低聚糖、单糖，这有利于有效成份的煎出及药效的充分发挥[5]。实验中还发现：在120℃6h条件下加工的黄精与传统制法相比，其多糖含量基本相当，且性状相同（内外均为滋润黑色，味甜）。提示此法有可能成为黄精炮制方法中省工省时、饮片受热均匀且便于规模化生产的新方法。但加工后黄精中游离氨基酸的含量及个数变化，水、醇浸出物的增加值、还原糖增加比例等还有待进一步研究。参考文献：[1]中国药典[S].一部.2005.215.[2]金世元，王琦.中药饮片炮制研究与临床应用[M].北京：化学工业出版社，2004.616.[3]李炎.复合多糖的制备技术与药理研究[M].西安：陕西师范大学出版社，1986.105.[4]张惟杰.糖复合物生化研究技术[M].第二版.杭州：浙江大学出版社，1998.12.[5]林开中等，黄精炮制前后某些化学成份的变化[J].药学通报.1998，23（1）：47.