一测多评法在中药质量控制中的研究进展

[基金项目]国家科技支撑计划：基于生物、化学、信息等多学科技术集成的中药现代化发展关键技术研究（2012BAI29B00）[通信作者]*张兰珍，研究员，主要从事中药和民族药药效物质与质量研究，Tel：[phone],Fax：[phone]，E-mail：[e-mail]；[作者简介]邵岩岩，硕士研究生，Tel：[phone]，E-mail：[e-mail]一测多评法在中药质量控制中的应用进展邵岩岩，朱丹，杨光辉，毛鑫，孙雪飞，赵海娟，夏青，吴玲芳,张晓雪,张兰珍*（北京中医药大学中药学院，北京100102）摘要:一测多评(QAMS)是近年来新兴的中药质量控制方法，能够在缺少对照品的情况下实现多成分质量控制。本文从“一测多评”法原理及其在含生物碱类、黄酮类、三萜皂苷类、苯丙素类、有机酸类及含醌类等化学成分中药中的应用研究等方面进行探讨，为中药质量控制提供参考。关键词:一测多评法；中药化学成分；质量控制；应用现状Applicationsituationofmulti-componentsquantitationbyonemarkernewmethodforqualityevaluationofChineseherbalmedicineSHAOYanyan,ZHUDan,YANGGuanghui,MAOXin,SUNXuefei,ZHAOHaijuan,XIAQing,WULingfang,ZHANGXiaoxue,ZHANGLanzhen*(SchoolofChineseMateriaMedica,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)Abstract:Themulti-componentsquantitationbyonemarker(QAMS)isanemergingnewmethodforqualityevaluationofChineseherbalmedicineinrecentyears,toachievethesynchronousmonitoringofthemultiplecomponentsinlackofthestandardreferencesubstance.Thearticleistosumtheprogressandapplicationofquantitativeanalysisofmulti-componentsbyQAMSintheanalysisofcomponentsofpharmaceuticalchemistrycontainingalkaloids,flavonoids,triterpenesaponins,phenylpropanoids,organicacidsandcontainingquinoneswerediscussed,andprovidesreferenceforthequalitycontroloftraditionalChinesemedicine.Keywords:Multi-componentsquantitationbyonemarker;ComponentoftraditionalChinesemedicine;Qualitycontrol;Applicationsituation中药的化学成分具有多样性与复杂性的特点，其有效成分有多种，且各成分之间具有相互协同作用。中药具有多成分、多靶点的特点，单一成分难以表达中药的质量优劣，由此提出了多成分质量控制的理念。由于多指标的质量评价模式，必需有足够量的化学对照品，而中药化学对照品分离难度大或单体不稳定难以供应或供应成本高等因素，致使对照品的供应和使用不足。鉴于此，王智民等[1]利用中药有效成分间存在的内在函数和比例关系，提出了“一测多评”的想法，即只测定1个成分（对照品可以得到者），来实现对多个成分（对照品没有或难以供应）的同步监控。其原理是以药材中某一典型组分（有对照品供者）为内标，建立该组分与其他组分之间的相对校正因子，通过校正因子计算他组分的含量。这种测定一个成分，实现对多个成分定量的方法命名为一测多评法[2]。近年来，“一测多评”法已在中药材多指标性成分含量测定中得到应用。中国药典2010年版[3]中，已经收录利用该方法测定黄连小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀、药根碱等成分的含量。本文主要通过探讨一测多评法在含生物碱类、黄酮类、三萜皂苷类、苯丙素类、有机酸类及含醌类等中药化学成分的中药材及复方制剂中的应用研究进行综述，阐述该法在中药质量检测和评价研究中的应用，为“一测多评”法在适合中药特点多指标质量评价的新模式下的中药质量评价研究提供科学参考。1“一测多评法”原理在一定的范围内（线性范围内）成分的量（质量或浓度）与检测器响应成正比，即：W=fA。在多指标质量评价时，以药材中某一典型组分(有对照品供应者)为内标，建立该组分与其他组分之间的相对校正因子，通过校正因子计算其他组分的含量。假设某样品中含有i个组分Wi/Ai=fi(i=1,2,…k,…,m)①式中Ai为组分峰面积；Wi为组分浓度。选取其中一组分k为内标，建立组分k与其他组分m之间的相对校正因子。fkm=fk/fm=Wk×Am/Wm×Ak②由此，可导出定量计算公式Wm=Wk×Am/Wkm×Ak③式中为Ak内标物峰面积，Wk为内标物浓度。Am为其他组分m峰面积；Wm为其他组分m浓度[1,4]。2“一测多评”法在中药质量控制中的应用2.1在生物碱类中药成分中的应用陈静等[5]利用一测多评法测定苦参中5种生物碱的含量，以苦参为研究对象，氧化苦参碱为对照，建立氧化苦参碱与槐果碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱的相对校正因子，并利用相对校正因子计算这四种成分的含量，同时采用外标法测定该5种生物碱的含量，结果显示采用校正因子计算的含量值与外标法实测值之间没有明显差异，表明该法的准确性和科学性。吴珊珊等[6]以黄柏为研究对象，主要成分小檗碱为对照，建立小檗碱与木兰花碱、黄柏碱、药根碱、巴马汀的相对校正因子，并用该校正因子计算这四种成分的量，同时利用标准曲线法和一测多评法同时测定30批黄柏药材和饮片中5种生物碱的量，结果显示采用一测多评法计算的含量值与标准曲线实测值之间没有明显差异，表明一测多评法的准确性和可行性。陈晓斌等[7]以热痹消颗粒为研究对象，建立小檗碱与黄柏碱、药根碱、巴马汀的相对校正因子，并将该因子用于这4种生物碱的含量测定，同时采用外标法测定4种生物碱的含量，结果显示一测多评法对不同的色谱柱和仪器的计算值与外标法实测值之间没有明显差异。2.2在黄酮类中药成分中的应用朱晶晶等[8]以黄芩药材中典型成分黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素为指标,在一定的线性范围内,建立黄芩苷与后3种成分间的相对校正因子,并测定黄芩苷的含量,用该校正因子测定其他3个成分的含量,同时采用外标法测定27批药材中该4种成分的含量,结果显示建立的校正因子重现性良好，该药材中采用校正因子计算的值与外标法实测值间没有显著性差异。许晶晶等[9]建立以橙皮苷为对照品的相对校正因子方法，测定薄荷药材中橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷4种主要成分的含量，同时采用外标法测定薄荷药材中4种成分的含量，并通过SPSS17.0软件分析一测多评法测定值与外标法的实测值之间的差异性，验证所建方法的准确性、适用性和重复性。另有徐娜等[10]以芹菜籽中主要成分芹菜甲素、芹菜乙素和新蛇床内酯为指标，在一定范围内，建立芹菜甲素与芹菜乙素、新蛇床内酯的校正因子，用该校正因子测定芹菜乙素和新蛇床内酯的含量，同时采用外标法测定6批不同批次中3个成分的含量，结果显示建立的校正因子重现性良好，原料药中采用校正因子计算的值与外标法实测值间没有显著性差异。2.3在三萜皂苷类中药成分中的应用黄帅等[11]以柴胡皂苷a为对照品，建立药材中该成分与柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的相对校正因子，利用校正因子计算柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的含量，同时用外标法测定药材中3种成分的绝对含量，并通过对不同色谱系统、不同色谱柱和不同实验室进行考察相差不大，表明重现性良好。以统计学t-检验法对相对校正因子的计算值与外标法实测值进行比较没有显著性差异，为柴胡药材的多指标质量评价及控制提供了科学依据。朱晶晶等[12]以人参皂苷Rb1为内参物，建立了人参皂苷Rb1与其他8种皂苷（Rg1、Re、Rf、Rh1、Rc、Rb2、Rb3、Rd）间的紫外相对校正因子(RCF)，通过对不同实验室、不同色谱系统和不同色谱柱的考察偏差不大，表明重现性良好。含量测定结果与常规法进行t检验比较，结果可信。说明在定量用人参对照品缺乏的情况下,能通过一测多评法实现药材多成分的同步含量测定。实现了只用一个对照品同时测定三七和人参中多个人参皂苷类成分的含量，实验还证明对于紫外吸收特征相似的同类化合物开展一测多评研究是可行的。2.4在苯丙素类中药成分中的应用窦志华[13]等以五味子醇甲为内参物，建立五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素与内参物的相对校对因子，并进行含量测定，实现一测多评。同时采用外标法测定12批五味子中6个成分的含量，比较计算值与实测值的差异，验证所建立方法的准确性。结果表明所建立的相对校正因子重现性良好，采用校正因子计算的含量值与实测值之间无显著性差异。杨芳等[14]采用一测多评法测定川白芷药材中3种香豆素成分的含量，实验以欧前胡素对照品为内参物，在一定的线性范围内采用HPLC-DAD建立其与异欧前胡素、氧化前胡素的相对校正因子，并用该校正因子进行异欧前胡素、氧化前胡素的含量计算实现一测多评，同时采用外标法测定药材中这3种香豆素的含量，并比较计算值与实测值的差异，结果显示20批药材中3种香豆素含量的计算值与实测值无显著性差异(RSD5%）。2.5在有机酸类中药成分中的应用王小平等[15]以丹参素钠为内参物，建立丹参水溶性提取物中紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B与丹参素钠的相对校正因子。通过相对校正因子计算其他3个成分的量，并将计算结果与外标法测定结果进行比较。结果表明各成分的相对校正因子重现性良好，一测多评法与外标法测定结果无显著性差异。何冰等[16]以没食子酸为内参物，采用没食子酸和最后一个易辨认峰两点校正推导校正方程，结合紫外吸收光谱进行色谱峰定位。利用一测多评法对6种浓度的双清咽喉片中其他9种成分（异绿原酸B、柠檬酸、新绿原酸、异绿原酸A、绿原酸、隐绿原酸、甘草酸、异绿原酸C及蒿酮）同时进行了测定，得到f平均值分别为0.571，0.015,0.418,0.518,0.420,0.418,0.096,0.516,和0.641，RSD分别为0.83%，0.99%，0.38%，0.30%，0.63%,1.10%,1.28%,0.69%和0.50%，均5%。采用多点校正法、定量因子和斜率校正3种校正方法分别建立各成分与没食子酸的相对校正因子，实现了一测多评法在含有机酸药材质量控制中的应用。2.6在含醌类成分中药中的应用王钰莹等[17]以三黄片为研究对象，利用一测多评法测定三黄片中大黄蒽醌类成分，建立了以内参物大黄素与大黄酚、大黄素甲醚和大黄酸间的相对校正因子。分别采用外标法和一测多评法测定三黄片中4种蒽醌类成分的含量，并将一测多评法的计算值与外标法实测值用相对误差进行评价，结果表明各相对校正因子间重复性良好。张锴镔等[18]采用一测多评法和外标法对新清宁片中几种成分进行了测定,实验结果与外标法所得结果之间无显著性差异，为含蒽醌类中成药的含量测定提供了新的质量评价模式。“一测多评”法在其他成分的质量控制应用中也有一定的进展，林芳等[19]以绿原酸为参照物,通过相对校正因子对松脂醇绿原酸、京尼平苷酸、二葡萄糖苷进行含量测定，实现了不同类型化合物间的一测多评。李岑等[20]以藏药当佐为研究对象，通过建立胡椒碱与其他3个指标成分间的相对校正因（RCF），并利用校正因子对没食子酸、羟基红花黄色素-