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1上虞市创烨生物有限公司地址:浙江省上虞市高新技术产业园区鸿天工业园电话:0575-82578768传真:0575-82578758网址:邮箱:sales@cy-bio.com腺苷脱氨酶(ADA)测定试剂盒使用说明书【简介】用于自动生化分析仪测定血清腺苷脱氨酶(ADA)活性。肝脏病—ADA活性是反映肝损伤的敏感指标,可作为肝功能常规检查项目之一,与ALT或GGT(r-GT)等组成肝酶谱能较全面地反映肝脏病的酶学改变。血清中ADA活性的测定可①用于判断急性肝损伤及残留病变②协助诊断慢性肝病③有助于肝纤维的诊断④有助于黄疸的鉴别。腺苷脱氨酶(ADA)在良恶性难辨的滲出液鉴别诊断上有重要价值。结核性胸腹水ADA活性显著增高,癌性胸腹水不增高。此外,脑脊液ADA检测可作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标,结核性脑膜炎ADA活性显著增高,病毒性脑炎不增高,颅内肿瘤及中枢神经系统白血病稍增高。【测定方法】PNP-XTO-POD偶联连续监测法【测定原理】腺苷+H2OADA次黄苷+NH4+次黄苷+PiPNP次黄嘌呤+核糖-1-磷酸次黄嘌呤XOD尿酸+H2O2H2O2+4-AAP+酚衍生物POD红色醌衍生物+H2O动态监测红色醌衍生物的生成速率,可求得ADA活性。【试剂盒组成】规格组份浓度试剂液体双试剂,试剂Ⅰ:试剂Ⅱ=2:1缓冲液、4-AAP、PNP、XOD、POD、腺苷适量ADA校准品冻干1ml腺苷脱氨酶、稳定剂见标签ADA质控品冻干1ml腺苷脱氨酶、稳定剂见标签【样本要求】不溶血血清、胸腹水。样本中的腺苷脱氨酶在2-8℃可稳定7天,-20℃可保存30天。【测定步骤】1.本试剂为液体双试剂,可直接使用。2.测定参数:波长:550nm;光径:10mm;温度:37℃。3.测定方法:加入物空白管校准管测定管试剂Ⅰ180180180蒸馏水(uL)5--标准液(uL)-5-样本(uL)--5混刀,置37℃孵育1.5分钟试剂Ⅱ(uL)909090混刀,置37℃延滞5分钟后读取各管吸光度,每隔1分钟读1次,共读3分钟,计算平均每分钟吸光度变化率ΔA/min2上虞市创烨生物有限公司地址:浙江省上虞市高新技术产业园区鸿天工业园电话:0575-82578768传真:0575-82578758网址:邮箱:sales@cy-bio.com4.上机参数:温度37℃延迟时间300秒样本量5uL主波长550nm试剂Ⅰ180uL副波长800nm试剂Ⅱ90uL读数时间180秒5.计算:(ΔAU/min–ΔA)B/minADA活性(U/L)=×校准管活性)(ΔAS/min–ΔAB/min【性能指标】0.05,空白吸光度变化速率ΔA/min≤0.0035;1、空白吸光度A550nm2、测定试剂定标后K=2000左右。3、线性范围0-200U/L(r0.99);4、批内/分析内精密度CV≤5%;批间相对极差≤7%;5、准确性相对偏差不超过±10%。6、抗干扰性胆红素40mg/dL、TG1250mg/dL、血红蛋白500mg/dL、抗坏血酸40mg/dL时,对测定无显著影响。7、方法对照用本酶动力学测定试剂和美国DiazymeLaboratores诊断试剂公司ADA连续监测法试剂盒(AdenosineDeaminaseTestKit)测定50例血清ADA活性,结果显示相关系数r=0.994。【注意事项】1、试剂和样品可因仪器要求不同,按比例增减,计算公式不变。2、试剂请放2-8℃储存,避免冷冻、污染,否则将导致失效。3、当标本浓度超过检测范围时,应用生理盐水稀释标本后再进行检测,标本值为测定值乘以稀释倍数。4、请勿用嘴直接吸取试剂,避免接触皮肤、眼睛及粘膜,一旦接触,应即用水冲洗污染部位;5、使用使用本公司提供的校准品校准,校准周期为60天,更换试剂批号时需要重新校准。使用正常值和病理值生化质控血清进行室内质控,测定的控制值应在确定的限制范围内,若控制值失控,实验室应采取适当的纠正措施。【参考范围】成人血清4-20U/L(37℃)建议各地建立本地区的参考值范围【储存条件与有效期】未开封的试剂在2-8℃避光条件下可稳定12个月,置37℃水浴至少可稳定7天。试剂开封后,存放在分析仪试剂仓中的试剂在60天内性质稳定。【参考文献】1.KelbelC,StumptB,SchmidtW,etalRoleofSerumadenosinedeamisnaseasanimmuneparameteroftuberculosis,pneumoloqic,1995,49(12):684-6882.霍金山、程祺、郭锡仑等,血清腺苷脱氨酶活性对伤寒的诊断价值,中国实用内科杂志,1995,15(7):427-4283上虞市创烨生物有限公司地址:浙江省上虞市高新技术产业园区鸿天工业园电话:0575-82578768传真:0575-82578758网址:邮箱:sales@cy-bio.com全自动生化分析仪参数日立7020参数参数号界面内容1分析项目ADA2分析方法RateA4反应时间105测光点1306测光点2359次波长70010主波长54611样本量512R1试剂量18013R1位置#14R1瓶尺寸L15R2量9016R2位置#17R2瓶尺寸S18R3量019R3位置020R3瓶尺寸021校准模式linear23校准液Con.1024校准液pos.19925校准液Con.2c26校准液pos.2#27校准液Con.3028校准液pos.3029校准液Con.4030校准液pos.4031校准液Con.5032校准液pos.5033校准液Con.6034校准液pos.6036K1因数242044偏移吸光度值999.945离散允许吸光3200047S1ABS下限-3200048S1ABS上限3200049反应吸光度界3200050反应方向I54正常值下限455正常值上限20日立7060/7080参数TESTNAMEADAASSAYTYPERateAWavelength(2nd/primary)800/546Time10Point28-31Samplevol5ReagentR1180ReagentR290ReagentR30ReagentR40Abs.limit32000Dec/incIncCAL.TYPELinearPoint2Spanpoint2STD(1)-Conc.pos0-waterSTD(n)-Conc.pos---SDlimit999.9UnitU/LK-factor---日立7170/7180/7600参数TESTNAMEADAASSAYTYPERateAWavelength(2nd/primary)800/546Time10Point30-34Samplevol5ReagentR1180ReagentR290ReagentR30ReagentR40Abs.limit32000Dec/incIncCAL.TYPELinearPoint2Spanpoint2STD(1)-Conc.pos0-waterSTD(n)-Conc.pos---SDlimit999.9UnitU/LK-factor---4上虞市创烨生物有限公司地址:浙江省上虞市高新技术产业园区鸿天工业园电话:0575-82578768传真:0575-82578758网址:邮箱:sales@cy-bio.com全自动生化分析仪参数奥林帕斯系列TestNameADASampleVolume5R1Volume180ReagentR2Volume90Pri540Wave-LengthSec700MethodRateReactionSlope+MeasuringPoint1:First/Last23-27MeasuringPoint2:First/LastLinearity30%NoLag-TimeYesMinODMaxODL-H-2.5000-2.5000FstL-H-2.50000ReagentODLimitLstL-H2.5000DynamicRangerL-H0-200A1CalibrationFactorB0CalibrationTypeABFormulaY=AX+BBECKMAN-LX20ChemADAReactionTypeRate1ReactionDirectionPositiveUnitU/LMathModleLinearPrimaryWavelength560SecondaryWavelength700Cal.TimeLimit336HoursKFactor1FirstInjectVolA/144μlSecondaryB/72μl/-180SecThirdInjectVol/InjectTimeNone/0μl/0SecSampleVolume4μlReagentBlankStartTime-60EndRead-40Reaction1StartTime300EndRead360Reaction2StartTimeEndReadUsableResultLowerLimit0Conc输入校准品浓度UpperLimit200MBTypeFactorInitialRate99.9995上虞市创烨生物有限公司地址:浙江省上虞市高新技术产业园区鸿天工业园电话:0575-82578768传真:0575-82578758网址:邮箱:sales@cy-bio.com全自动生化分析仪参数AEROSET/C-8000/TBA120NameADAReactionmodeRateUpPrimarywavelength548Secondarywavelength804Mainreadtime30-33Flexreadtime27-30BlankreadtimeLastreadtime33Absorbancerange0.000-2.800SampleblanktypeBlankassaySamplevolume5R1reagentvolume180R1watervolume0R1DispensemodeType0R2reagentvolume90R2watervolume0R2DispensemodeType0CalibrationmethodLinearCalibrationLevel1Water0CalibrationLevel2Factor-----Blankabsorbancerange0.0000-0.5000Linearityrange0-200ResultconcentrationunitU/LResultdecimalplaces0BECKMAN-CX系列TestNameADAReactionTypeRATE1ReactionDirectiomPositiveUnitsU/LDecimalPrecisionXCalculationfactor0MathModelLinearPrimaryWavelength560SecondaryWavelength800SampleVolume4PrimaryInjectRgtA144PrimaryInjectRgtB72SecondaryInjectRgtBAddTimeBlankStartRead300EndRead316LoweAbsLimit-1.5HighAbsLimit1.5RecationStartRead300EndRead360LoweAbsLimit-1.5HighAbsLimit1.5UsableRangeLowerLimit0UppertLimit200Initial99.9DeltaAbs1.5注:本参数仅供参考,建议各实验室根据仪器的实际情况建立最佳参数。某些酶项目,不推荐使用理论K值,建议使用Roche多项校准血清或测定试剂配套校准品进行校准。
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