实验三-医学微生物学-精品课程

实验三物理因素、化学因素对细菌的影响和药物敏感试验目的要求1、掌握消毒、灭菌、防腐、无菌的概念。2、熟悉常用物理灭菌法的原理、方法及用途。3、熟悉化学消毒剂的基本原理、了解常用药物的作用机制。物理因素对细菌的影响（结合实物在消毒室中介绍）1.热力灭菌：（1）干热灭菌：干烤（160～170℃，2h）、焚烧（易燃、废弃物品）、烧灼（不易燃的物品，如取菌环、试管口）、红外线：0.77～1000mm电磁波,1～10mm效应最强。（2）湿热灭菌巴氏消毒法：61.1～62.8℃30min；71.7℃15～30s’，后一种方法最常用。煮沸法：100℃5min可杀死一般细菌的繁殖体，水中加入2%碳酸氢钠，沸点可达到105℃。流通蒸汽法：100℃，15～30min，可杀灭细菌的繁殖体。高压蒸汽灭菌法：高压锅---在103.4kPa（1.05kg/cm2、、15磅/英寸2）蒸汽压下，温度可达121.3℃，维持15～20min，可杀灭芽孢在内的所有微生物。干热灭菌与湿热灭菌的比较：穿透性；湿热穿透性强。潜热；由气体转变为液体时释放热量。菌体蛋白在液体中经加热易变性。2.辐射杀菌法：（1）紫外线（UV）：200～300nm（100+～380nm）;265～266nm杀菌作用最强;使一条链上相临的嘧啶形成二聚体。具有光复活作用，不能用紫外线制备灭活菌苗。紫外线穿透力差，只能用于空气和物体表面的杀菌。紫外线对人体皮肤、视网膜均有损伤。不能开着紫外线灯工作。（2）电离辐射：射线、X射线（3）微波：11000mm的电磁波3.滤过除菌法：滤菌器（filtration）薄膜滤菌器（0.25nm）、玻璃滤菌器（G1～G6）、石棉滤菌器（K、EK、EKS型）、Seitz滤菌器。适合于不耐热的液体（血清、细胞因子、抗生素、毒素等）及气体的滤过。化学因素对细菌的影响常用消毒剂：酚类、醇类、重金属盐类、氧化剂、表面活性剂、烷化剂。作用机理：1、促进菌体蛋白质变性或凝固；2、干扰细菌的酶系统和代谢；3、损伤细菌的细胞膜1%龙胆紫、2.5%碘酒、75%乙醇、0.1%新洁尔灭（红汞现在已取消）。影响消毒剂灭菌效果的因素：1、消毒剂的性质、浓度与作用时间--乙醇例外，70%乙醇消毒效果最好；2、微生物的种类与数量；3、温度；4、pH；5、有机物。消毒剂对人体毒性太大，只能外用，不能口服或注射。问题：消毒剂浓度越高杀菌效果越好？为什么？药物敏感试验材料1、菌种：大肠杆菌、葡萄球菌2、药敏纸片、接种环、镊子、酒精灯、培养箱等原理在已接种被测细菌的琼脂平板上，平贴含有一定量抗菌药物的药敏纸片，由于培养基中含大量的水分，所以抗菌药物很快溶解于培养基内，并向四周扩散，药物在琼脂中的浓度随离开纸片的距离增大而降低，当低于MIC时细菌则生长而形成抑菌环。在药物浓度恰高于该药物对该菌的最低抑菌浓度的琼脂中，该细菌的生长就受到抑制，在药物浓度低于该药物对该菌的最低抑菌浓度的琼脂中，细菌能够生长。孵育后，在含药纸片的周围形成透明的抑菌环，量取该抑菌环的直径，可测得该细菌对相应药物的敏感度。培养基：水解酪蛋白琼脂（M-H琼脂）抑菌环的直径与最低抑菌浓度（MIC）呈负相关。方法：同连续划线接种法密集接种细菌（改良的K-B法）。用无菌镊子夹取药敏制片，分别贴于平板上，各药敏纸片之间的距离应基本相等，一般每个平板贴四个药敏纸片。37℃、培养24h后测定抑菌圈，作出结果判定。敏感程度判断标准：10mm---耐药；10-15mm----中度敏感；15mm---敏感（非检验专业）质量控制：培养基（M-H琼脂）、纸片性质与直径（吸水纸、直径6mm）、每张纸片吸水，抗生素含量（青霉素、红霉素）、接种细菌的量（相当于1/20.5麦氏比浊管浓度，即0.75×108）。琼脂厚度为4mm土lmm（平板直径？9cm）。定量实验有：试管稀释法、E-试验←耐药敏感定性实验可指导临床医生使用什么药物，定量实验可指导临床医生该药物使用多少量，根据半衰期决定每天给几次药。实验成绩：不做实验报告，根据药敏试验操结果给以实验成绩（划线7分、贴纸片2分、学号标记1分）。注意事项第3章理论课没讲，在实验课上介绍一下灭菌、消毒、防腐、无菌、无菌操作的概念，消毒灭菌的方法等，对于检验专业的同学，每人做一个平板，强调质量控制的重要性。