微生物实验

微生物学实验指导老师：袁洪生李兰芬臧淑萍实验一细菌的形态观察•目的要求：见实验教程P.16实验二-1•基本原理：见实验教程P.16实验二-1实验内容•1.实验室环境及体表微生物检查(检查手指、头发、钱币等携带微生物的情况4人一个培养皿)•2.记录三种细菌的菌落特征•3.绘制三种细菌个体形态图，并对革蓝氏染色结果小结•4．思考题：实验2-(一)、（二）题三种细菌的菌落特征微生物名称大小形状含水程度颜色与培养基结合程度嗅味枯草芽孢杆菌金黄色葡萄球菌大肠杆菌绘制三种细菌个体形态图，并对革蓝氏染色结果小结微生物名称革蓝氏染色总结枯草芽孢杆菌金黄色葡萄球菌大肠杆菌实验二放线菌的形态观察•目的要求：见实验教程P.24实验二-3•基本原理：见实验教程P.24实验二-3实验内容•1.记录三种放线菌的菌落特征•2.记录并绘制三种放线菌的个体形态及生殖方式图•3.思考题：在平板上如何识别细菌和放线菌的菌落？三种放线菌的菌落特征微生物名称大小含水程度菌落颜色与培养基结合程度嗅味灰色链霉菌正面背面淡紫灰链霉菌正面背面地中海诺卡氏菌正面背面绘制三种放线菌的个体形态及生殖方式图微生物名称制片法生殖方式观察灰色链霉菌印片法或直接观察法示气生菌丝、孢子丝(直)及孢子(球形)淡紫灰链霉菌印片法或直接观察法示气生菌丝、孢子丝(螺旋状)及孢子(椭圆形)地中海诺卡氏菌印片法或直接观察法示菌丝断裂、柱形或球形孢子实验三酵母菌形态观察及细胞计数•目的要求：•观察并掌握酵母菌的菌落特征、个体形态及生殖方式。基本原理：见实验教程P.26实验3-1,P.97实验8-1实验内容•1.记录两种酵母菌的菌落特征•2.记录并绘制二种酵母菌的个体形态及生殖方式图•3.(1)用血球计数板计算酵母菌悬液的细胞数(2)用显微镜测微尺测量酵母菌细胞的大小•4.思考题：在同一平板上如何识别细菌和酵母菌的菌落？两种酵母菌的菌落特征微生物名称大小含水程度菌落颜色与培养基结合程度嗅味酿酒酵母红酵母二种酵母菌的个体形态及生殖方式图微生物名称制片法生殖方式观察酿酒酵母水浸法制片示芽殖热带假丝酵母压片法制片示假菌丝实验四霉菌的形态观察目的要求：1.观察霉菌的菌落特征。2.掌握霉菌制片方法，观察霉菌个体形态及各种无性和有性孢子。基本原理：见实验教程P.29,实验三-2实验内容1.记录三种霉菌的菌落特征•2.对三种霉菌制片、观察、记录并绘制三张霉菌个体形态及生殖方式图•3.四大类微生物形态特征总结三种霉菌的菌落特征微生物名称大小表面形状颜色与培养基结合程度嗅味黑根霉(产糖化酶,酿酒)上部(孢子)下部(菌丝)产黄青霉(产青霉素)中心(孢子头)边缘(菌丝)黄曲霉(产蛋白酶,制酱油)中心(孢子头)边缘(菌丝)三种霉菌个体形态及生殖方式微生物名称菌丝结构(分化结构)孢子黑根霉示无隔菌丝、假根、匍匐枝、孢子囊梗产黄青霉示有隔菌丝、分生孢子梗、小梗黄曲霉示有隔菌丝、足细胞、顶囊、小梗实验考察(1)如何从菌落特征上识别四类菌?(2)四类菌在制片上有何特点?实验五培养基的配制与灭菌目的要求：•1.学习和掌握分离四类菌常用的培养基配制方法。•2.学会四类菌稀释分离和计数时所用物品灭菌前后的准备工作。•3.了解实验室常用的消毒灭菌方法，掌握高压蒸汽灭菌技术。基本原理：见实验5-1、5-2、5-3、5-5及附录三实验内容配制四类菌分离用培养基(注意调pH)、分装。(按卡片每三人一组配制其中一种培养基，但要求四种都会配)2.准备大小枪头、小离心管、玻璃刮刀、无菌水等，培养基的配制量及分装方法见实验台上卡片。•3.高压蒸汽灭菌，灭菌后摆放斜面。先检查高压锅内水量，关闭高压锅盖时用力要均匀，放气2-3分钟后关闭放气阀，待压力接近0.1Mpa时调节成小火并计时,保持20分钟后关火,自然冷却待压力降为0时打开放气阀后再打开高压锅。4.实验室常用消毒灭菌方法(示范)干热灭菌、紫外灭菌、过滤除菌、化学消毒法等。实验记录•1.记录你所配的培养基名称、成分、pH及配制分装方法。2.注意高压蒸汽灭菌操作过程及关键实验六土壤中微生物的分离与培养目的要求：见P.66实验6-1基本原理：见P.66实验6-1实验内容1.先按卡片配制生理生化、噬菌体效价测定用培养基，灭菌2．稀释分离：3.划线分离：取10-2菌悬液做划线分离（每人做四块平皿:三种稀释度各一块、划线分离一块）4．菌落计数：（下周做）只数可认定的菌落，三人结果取平均。5.斜面接种及培养：（下周做）每人自不同平板上分别各接一支四类菌斜面，培养后检查接种结果。6.菌种保藏(示范)：斜面转接法、低温保藏法、沙土管保藏法、冷冻干燥保藏法。稀释分离分离对象取样稀释度分离方法细菌1克土10-4、10-5、10-60．2ml菌悬液，倾注法分离放线菌1克土10-2、10-3、10-40．2ml菌悬液，倾注法分离酵母菌1克酵母粉10-5、10-6、10-70.1ml菌悬液，涂布法分离霉菌5克土10-2、10-3、10-40．2ml菌悬液，倾注法分离注意事项•分离放线菌在99ml无菌水中加10滴10%苯酚(抑制细菌生长)•分离霉菌在马丁培养基熔化冷却后加入2ml去氧胆酸钠(2%)和0.4ml链霉素(1万单位/ml)实验记录•P.73实验6-1表(二)、(三)、(五)•.思考题：P.74实验6-1（二）、（四）、(五)实验七几种细菌的生理生化反应实验目的要求：见实验教程P85,P88基本原理：见实验教程P85,P88实验内容（按下表接种）实验实验菌种实验菌种实验菌种接种方式分工淀粉水解枯草芽孢杆菌大肠杆菌产气杆菌平板划点每人一皿接两种菌油脂水解金黄色葡萄球菌大肠杆菌产气杆菌平板划线每人一皿接两种菌EMB大肠杆菌产气杆菌平板划线每人一皿接两种菌葡萄糖发酵大肠杆菌产气杆菌液体一环两人1组每人1支试管各接一种菌甘露醇发酵金黄色葡萄球菌产气杆菌半固体穿刺两人1组每人1支试管各接一种菌H2S大肠杆菌变形杆菌半固体穿刺两人1组每人1支试管各接一种菌柠檬酸盐大肠杆菌产气杆菌斜面划线两人1组每人1支试管各接一种菌M.R大肠杆菌产气杆菌液体一环两人1组每人1支试管各接一种菌V.P大肠杆菌产气杆菌液体一环两人1组每人1支试管各接一种菌吲哚大肠杆菌产气杆菌液体一环两人1组每人1支试管各接一种菌生理生化实验结果观察实验名称反应物代谢产物枯草金黄大肠产气变形淀粉水解油脂水解EMB葡萄糖发酵甘露醇发酵H2S柠檬酸盐M.RV.P吲哚实验八噬菌体效价测定目的要求：见实验教程P36基本原理：见实验教程P36实验内容培养敏感细菌T6-13至对数生长期熔化下层培养基每人倒三块平版（约10ml/块）用蛋白胨水稀释噬菌体原液（10-6pfa/ml）至10-710-810-9三个稀释度备用取0.2ml噬菌体稀释液于小离心管中加入0.2mlT6-13菌悬液混均，室温放置2-3分钟后将混合液加至倒好下层培养基的培养皿中心迅速倒入熔化好已冷却至55℃的上层培养基，快速混合均匀。待培养基彻底凝固后30℃倒置培养，16-24小时内观察结果。实验九紫外线对淀粉酶产生菌枯草芽孢杆菌的诱变效应目的要求：见p.117基本原理：见p.118实验内容枯草芽孢杆菌BF7658接种到新鲜牛肉膏培养基中活化(37℃，20hr)取1ml菌液加入装有玻璃珠的99ml无菌水的锥形瓶中，用手(或摇床)剧烈振荡，打散菌体，制成菌悬液。（取样时一定要摇均匀）（打开红光灯，避光操作）取大约10ml菌悬液至无菌平皿中(内装有磁力搅拌)紫外线照射处理（功率20w距离30cm）•0min1min2min3min稀释度10-510-610-710-410-510-610-310-410-510-210-310-4•各取0.1ml涂平板，37℃，培养48hr初筛(加碘液，测量HC值，计算存活率及致死率)（两人做一个照射时间，六人共用对照，平均每人四块平板）