微生物的培养与应用(2课时)

微生物的培养与应用考点1.微生物的分离与培养2.测定某种微生物的数量3.研究培养基对微生物的选择作用4.探讨微生物的利用主要技术：1.培养基的制备2.高压蒸汽灭菌和干热灭菌3.倒平板操作4.平板划线操作和稀释涂布平板法5.应用选择培养基分离某种特定的微生物微生物包括哪五类：病毒细菌放线菌真菌原生动物特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基础知识归纳：自养型生物有什么共同特点？营养物质是指维持机体生命活动，保证发育、生殖所需的外源物质。人及动物的营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。植物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类。微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。什么是营养物质？选择培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:分离杂交瘤细胞4.无菌技术消毒方法：（1）日常生活经常用到的是消毒法；（2）对一些不耐高温的液体，则使用消毒法（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒等溶液以增强消毒效果，然后使用进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用进行消毒；（5）饮水水源用进行消毒。煮沸巴氏石炭酸或煤酚皂紫外线酒精氯气灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用法，所用器械是；（3）培养基、无菌水等使用灭菌法，所用器械是。（4）表面灭菌和空气灭菌等使用灭菌法，所用器械是。灼烧干热灭菌箱干热灭菌高压蒸汽高压蒸汽灭菌锅紫外线紫外灯小结：微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存5.菌种的保存①临时保藏方法将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3～6个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。②长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。-20℃下保存（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是__________________________________________________________________________________。（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。将未接种的培养基(接种无菌水）在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生.灭菌测定微生物数量的方法：1)直接计数法：最常用的显微镜直接计数。优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。缺点：不能区分死菌和活菌；难以计数微小的细菌。一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。6.统计菌落数目2）间接计数法：最常用稀释涂布平板计数法应用：统计样品中活菌的数目①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。（注意）：一般选择菌落数在30-300的平板进行记数。（一）筛选菌株自然界筛选：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。(如耐高温的TaqDNA聚合酶)实验室筛选：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。1.原理：尿素是一种重要的农业氮肥，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。尿素细菌能合成脲酶，在脲酶的作用下尿素被分解成氨。CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3脲酶（2）实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。（3）实验流程：土壤取样样品系列稀释涂布平板与培养观察并记录结果菌落计数（1）对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助的方法。(2)在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的将尿素分解成了。氨会使培养基的碱性，pH。因此，我们可以通过检测培养基变化来判断该化学反应是否发生。(3)在以为唯一氮源的培养基中加入指示剂。培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变，说明该细菌能够。三、结果分析与评价生物化学脲酶氨增强升高pH尿素酚红红分解尿素（4）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线（如图2）。从图2可知SP1菌在____________培养条件下最早停止生长，其原因是____________。20mg/L氯苯氯苯最早耗尽10.(09湛江一模)生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶解→酵母发酵→蒸馏→成品。(1)纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化生产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤取样--选择培养--梯度稀释--鉴别培养。①最好选择怎样的环境采集土样?选择纤维素丰富的土壤环境②以下是一种培养基配方：纤维素粉5g、NaN031g、Na2HP04·7H201.2g、KH2P04O.9g、MgS04·7H20O.5g、KCl0.5g、酵母膏0.5g、水解酵素0.5g(蒸馏水定容到1.0mL)。该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是。培养基中纤维素是主要碳源，有利于纤维素分解菌生长，同时抑制其他微生物生长③为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入染液，将筛选获得的菌液稀释后用法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生的菌落作为菌种进行扩大培养。④纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量如何呢，可设计实验进行检测，请写出实验思路：刚果红涂布平板法透明圈向定量纤维素分解菌培养液中加入定量纤维素，定时测定葡萄糖产量的变化D