柑橘采后致病青霉的分离鉴定及其生物学特性研究

华中农业大学硕士学位论文柑橘采后致病青霉的分离鉴定及其生物学特性研究姓名：闵晓芳申请学位级别：硕士专业：果树学指导教师：邓伯勋20070601柑橘采后致病青霉的分离鉴定及其生物学特性研究作者：闵晓芳学位授予单位：华中农业大学相似文献(10条)1.会议论文龚国淑.邓小刚柑橘青霉菌和绿霉菌菌落的分形特征2001本文应用分形理论中的计盒法分析了柑橘青霉菌(Penicilliumitalicum)和绿霉菌(P.digitatum)两种病原真菌在不同温度下培养7天后的菌落分形维数.结果表明,菌落的发育具有明显的分形特征.两种真菌由于自身的特性不同,其分形维数不同;分形维数随温度变化而变化,温度愈适宜病菌的生长发育,其分形维数愈大,反之则愈小.在10℃、15℃、20℃、25℃和30℃下,柑橘青霉菌的分形维数分别为1.6724,1.6736,1.7530,1.8627和1.5541;绿霉菌分别为1.5588,1.7005,1.7304,1.8172和1.7700.研究结果还表明,分形维数的大小与菌落直径有关,但不完全呈正相关.在同一温度下,尽管两种菌的菌落直径很接近,但由于种类不同,其分形维数却明显不同.以上结果显示,用分形几何中的分形维数来量化菌落的特性比用菌落直径更能反映客观实际.2.学位论文侯晓丹枯草芽孢杆菌磁场诱变株对采后主要果实病害的控制效果研究2007通过枯草芽孢杆菌磁场诱变株对采后苹果炭疽病、番茄灰霉病、柑橘青霉病的控制效果试验设计，初步研究了枯草芽孢杆菌磁场诱变株对果实采后主要病害的控制效果及作用机制，同时还对枯草芽孢杆菌的生物学特性进行了研究，本论文的研究结果如下：1.高效拮抗菌筛选PDA平板拮抗测定表明，有7株磁场诱变拮抗菌的抑菌效果好于未经磁场诱变的枯草芽孢杆菌BSCK，分别是BS0.05-1，BS0.25-4，BS0.25-5，BS0.25-7，BS0.25-1，BS0.10-1，BS1.25。经过显著性分析，BS0.25-1，BS0.10-1，BS1.25，3株拮抗菌为高效拮抗菌株。25℃培养5天后，3株拮抗菌的抑菌效果分别是61.20％，61.59％和61.97％，显著地好于对照BSCK。2.高效拮抗菌对采后果实主要病害的控制效果研究2.1磁场高效拮抗菌株对苹果炭疽病的控制效果研究研究表明，20℃和10℃下各处理总体防效均呈现下降趋势，10℃下各处理防效高于20℃下各处理防效，两种储藏温度下先接种拮抗菌的处理防效高于先接种病原菌的处理；20℃时两种接种方式下，均以接种BS1.25的处理防效最高，接种后13天其防效分别为30.45％、14.16％；10℃先接种拮抗菌时，接种BS1.25的处理防效最高，接种后30天其防效为82.46％；先接种病原菌时，以接种BS0.10-1的处理防效最高，其防效达54.39％。高效拮抗菌对苹果炭疽病的总体防效在10℃、变温储藏、及20℃下依次降低，以储藏在10℃时总体防效最高，20℃时总体防效最低。说明温度在很大程度上影响了枯草芽孢杆菌对苹果炭疽病的控制效果。2.2磁场高效拮抗菌株对番茄灰霉病的控制效果研究贮藏温度明显影响拮抗菌在番茄果实上对灰霉病的控病效果。试验结果表明，贮藏在20℃下果实发病较早。先接种拮抗菌时，果实贮藏在20℃下的发病率显著较10℃的低，贮藏6天后，BS1.25在两种温度下的发病率分别是17％和100％。贮藏温度也影响果实病斑直径的发展。先接种拮抗菌的处理，贮藏在20℃下的果实，其病斑直径和防效均显著小于贮藏在10℃下的果实，20℃接种BS1.25的处理第五天其病斑直径为0cm，防效达100％，而在10℃下其病斑直径为0.93cm，防效仅为51.56％。2.3磁场高效拮抗菌株对柑橘青霉病的控制效果研究10℃时拮抗菌对青霉病的防效要高于20℃时拮抗菌对青霉病的防效，说明低温抑制了病原菌的生长；先接种拮抗菌的处理防效高于先接种病原菌的处理，可能是由于先接种拮抗菌时，拮抗菌首先抢占伤口处的营养资源，而不利于病原菌生长所致。20℃两种接种方式下，均以接种BS1.25的处理防效最高，其防效分别为44.51％、32.08％。10℃两种接种方式下，各处理防效仍以接种BS1.25的处理防效最高，其防效分别为59.79％、38.10％。3.寄主主要防御酶活性的测定研究了苹果和番茄果实分别接种炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)和灰霉菌(BotrytiscinereaPets．)后，主要防御酶过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性变化。结果表明：苹果和番茄感染病原菌或者被接种拮抗菌均能引起采后果实主要防御酶活性的升高，在贮藏中期均会出现酶活高峰。但酶活的升高是否与寄主的抗性呈正相关还有待近一步的研究。4.枯草芽孢杆菌生物学特性的研究BSCK菌株和BS1.25菌株在接种的前36小时处于对数生长期，其菌体的生物量在不断增加，在培养36小时后菌量达到峰值；随着培养液PH值由低到高，BSCK菌株和BS1.25菌株的菌体量呈现先升高再下降的趋势；BSCK菌株和BS1.25菌株在PH值为6至7.5时生长较好，BS1.25菌株在PH值等于6.5时菌体量达到峰值，而BSCK菌株在PH值为7时菌体量达到峰值；BSCK菌株和Bs1.25菌株对不同碳源的利用趋势基本相似，当以麦芽糖作为碳源时，两株菌株均生长的较好，其菌体量是其它碳源的2至5倍；而以D-果糖和D-山梨醇作为碳源却很难被两株菌株利用。两株菌株对氮源的利用以酵母粉最好，其次是胰蛋白胨和牛肉浸膏。而无机氮源的效果不理想，尿素和氯化铵作为氮源几乎不被枯草芽孢杆菌所利用。5.枯草芽孢杆菌控病机制的研究利用枯草芽孢杆菌的不同处理液抑制果实采后主要病害的发展，结果表明：拮抗菌的各处理液对果实采后主要病害有明显的抑制作用，说明枯草芽孢杆菌的活菌体以及分泌的代谢物质具有抑菌活性。拮抗菌BSCK各处理液的抑菌效果要略好于BS1.25，且拮抗菌的菌悬液的抑制效果要好于滤液和高温灭菌液；但接种高温灭菌液处理的果实病斑直径接近对照，有的甚至高于对照，其原因可能是枯草芽孢杆菌分泌的代谢物质热稳定性较差，高温高压下容易失活，而发酵液中又有一部分养分可供病原菌利用所致。3.期刊论文秦文.彭春华.蒲彪.李素清.王天佑.QINWen.PENGChun-hua.PUBiao.LISu-qing.WANGTian-you臭氧对柑橘果实青霉菌的抑菌效果-四川农业大学学报2009,27(2)以柑橘品种清见果实分离出的青霉菌Penicilliumitalium为对象,以抑菌率为指标,研究不同浓度、不同时间臭氧处理的平板抑菌效果.结果表明:臭氧处理对清见果实青霉菌具有一定的抑制作用,最大的抑菌率达到30.18%.相同臭氧浓度下,3种处理时间对青霉菌的抑制情况总的表现为:30min20min10min;而相同处理时间下,3种臭氧浓度处理对青霉菌的抑制情况表现为:200mg/m3150mg/m3100mg/m3.4.会议论文王园秀.饶志强.吴晓玉一株柑橘青霉病拮抗菌的分离筛选2009从柑橘园土壤及柑橘叶片等地分离1636株细菌，通过琼脂块进行初筛，以牛津杯法进行复筛并于柑橘接种检测，筛选出对柑橘青霉菌(PenicilliumdigitatumSacc)有强烈的抑制作用的菌株J-1。通过形态特征观察、生理生化特性测定，将分离菌株J-1初步鉴定为芽孢杆菌属。5.期刊论文王洪祥.黄振东.张利平.林荷芳.WANGHong-xiang.HUANGZhen-dong.ZHANGLi-ping.LINHe-fang乙环唑对柑橘青霉菌Penicilliumitalicum毒力的生物测定-浙江化工2005,36(11)就乙环唑对柑桔青霉病病菌的抑制毒力与万利得、扑霉灵、甲基托布津及多菌灵进行了比较测定.结果显示,9%乙环唑EC对柑橘青霉菌孢子萌发的最小抑制浓度为2.6μg/L,明显低于70%甲基托布津WP(70μg/L)和50%多菌灵WP(34μg/L),但高于50%万利得EC(0.8μg/L)和45%扑霉灵EC(1.4μg/L).9%乙环唑EC与50%万利得EC、45%扑霉灵EC混用均能够提高对柑橘青霉菌孢子萌发的抑制效力.9%乙环唑的抑菌毒力EC50=0.56μg/L,EC90=1.93μg/L,抑制效力比90%万利得EC低1.8倍左右.6.学位论文宋聪果实采后病害拮抗菌的分离筛选及其抑菌效果的研究2007柑橘青霉病和梨黑斑病是柑橘、梨果实贮藏期的主要侵染性病害，是造成腐烂损失的重要原因。长期以来，使用化学杀菌剂一直被认为是防治果实采后病害最有效的方法，但是存在着农药残留、环境污染和病原菌抗药性等诸多弊端，迫切需要新的安全的保鲜方法来取代化学杀菌剂的使用。生物防治是选择对产品以及人体不造成危害的微生物，利用微生物之间的拮抗作用，抑制病原菌生长的一种有效防治采后病害的新途径。本研究旨在分离、筛选能够抑制果实采后青霉、链格孢霉的拮抗菌株，鉴定其生物学特性，并测定所筛选出的菌株YF1，YF4和BF2及不同混配处理对柑橘青霉病和梨黑斑病的抑制效果，以及在果实伤口的定殖情况，并对其保鲜机理进行初步探讨。主要结果如下：1.拮抗菌的分离和筛选：用稀释平板法，从果实伤口、果实表面、叶片以及果园根际土壤中分离得到102个菌株。应用平板对峙法，通过初筛和复筛，离体筛选出10个菌株对青霉菌(Penicilliumitalicum)有拮抗作用，9个菌株对链格孢霉(Alternariakilcuchiana)有拮抗作用。进一步通过果实接种法，活体筛选出分别能明显抑制青霉和链格孢霉的拮抗菌YF1，YF2和：BF2，室温(约25℃)下抑菌率分别为79.12％，62.5％和66.67％。2.拮抗菌的鉴定：根据酵母菌的形态特征、营养特征和生理特性，鉴定拮抗菌YFl为假丝酵母属(Candidasp)，YF4为柠檬形克勒克酵母(Kloeckeraapieulata)。在对拮抗菌BF2的鉴定中，首先采用细菌传统的鉴定方法，对菌体的表型、生理生化特征进行了分类鉴定，结果发现，BF2符合芽孢杆菌属细菌的特征。进而采用16SrDNA分子鉴定方法，通过同源性比对及系统发育分析，鉴定拮抗菌BF2为芽孢杆菌属的蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)。3.拮抗菌的抑菌试验：当拮抗菌浓度为10'6-10'8CFU/mL时，生物防治的效果与拮抗菌的浓度成正相关；分别在接种1×10'8CFU/mL拮抗菌YF1、YF4和BF2的前48h，24h，2h，0h、后2h，24h，48h接种病菌，同时和推后病菌接种时间，都可以维持抑菌效果，但是提前接种病菌拮抗菌的抑菌力会有所降低。拮抗菌的接种时间越早防治病害的效果越明显；YF1与YF4等体积混合用于防治青霉病，果实发病率为12.50％，优于YF1和YF4单独使用的效果，差异显著;YF1，YF4和BF2两两混合使用抑制梨黑斑病，均可显著抑制梨黑斑病的发生，发病率分别为17.5％，10.00％和15.83％，低于单独使用一种拮抗菌；CaCl,2和低剂量化学杀菌剂能够明显增强拮抗菌的抑菌效果，水杨酸与拮抗菌结合使用与单独使用拮抗菌相比，对柑橘青霉病和梨黑斑病发病率的影响不大。4.拮抗菌的生长动态：拮抗酵母菌YF1和YF4在有无青霉菌和链格孢霉菌作用的情况下都能够在果实伤口迅速生长定殖。菌株YF1接种48h后，数量增加123.26倍；同时接种青霉病菌，96h后YF1的数量可增加至144.17倍，与链格孢霉同时接种，96h后YF1数量增加至178.29倍；拮抗菌YF4接种72h后，数量增加了近200倍，同时接种青霉病菌，72h后繁殖数量是起始值的344.54倍，同时接种链格孢霉，72h后繁殖数量是起始值的294.12倍。5.用1×10'8CFU/mL的酵母菌YF1和YF4浸泡柑橘果实后，柑橘果皮的PAL(苯丙氨酸解氨酶)、POD(过氧化物酶)显著升高，PPO(多酚氧化酶)显著降低；在柑橘果实的伤口处添加青霉(Pe