3-Methyladenine

生物活性产品描述3-Methyladenine(3-MA)是一种选择性PI3K抑制剂，作用于Vps34和PI3Kγ，在HeLa细胞中IC50分别为25μM和60μM；永久性抑制I型PI3K，但对III型PI3K的抑制是短暂的，也会阻断自噬体的形成。靶点Vps34[1]PI3Kγ[1]IC5025μM60μM体外研究3-MA对Vps34轻微的偏向性可能是由于Vps34中某个特异性的疏水环形结构可以环绕在3-MA的3-甲基基团外面造成的[1]。据报道对于正常培养和饥饿处理的癌细胞3-MA都能引起细胞死亡。3-MA还可以不通过抑制自吞噬来抑制细胞迁移和入侵，这表明3-MA除了抑制自吞噬之外还有其它生物功能。3-MA可以造成半胱天冬酶依赖的细胞死亡，这一功能与它对自吞噬的抑制无关。用5mM3-MA处理葡萄糖饥饿Hela细胞可降低gfp-lc3阳性细胞比例至23%。3-MA处理细胞12到48小时内LC3-I的水平上升而LC3-II水平下降。LC3-I转为为LC3-II的过程被3-MA抑制了。2.5mM或5mM3-MA处理HeLa细胞一天并不影响细胞存活率,而10mM3-MA处理一天会造成细胞存活率下降25.0%。2.5,5或10mM3-MA处理细胞两天分别使细胞存活率下降11.5%,38.0%和79.4%。3-MA降低细胞存活率的作用具有时间和剂量依赖特性。3-MA明显缩短nocodazole诱导的前中期阻断时间[2]。3-MA通过抑制自吞噬来抑制SU11274诱导的细胞死亡[3]。在野生型MEF细胞中延长3-MA处理时间(最多9小时)明显造成LC3I到II转换。延长3-MA处理时间会明显增加GFP-LC3的聚集而wortmannin不具有此功能。3-MA介导的LC3转换和游离GFP释放是ATG7依赖的。3-MA处理会导致p62蛋白水平明显升高。即使在Atg5−/−的MEF细胞中3-MA也会使p62水平升高，就像在DOX介导的ATG5缺失的细胞中一样。3-MA以不同方式抑制I型和III型PI3K。与野生型细胞相比，在Tsc2−/−细胞中3-MA诱导的LC3I到LC3II转换过程大幅下降。3-MA会破坏mTOR复合物1的拮抗自吞噬功能[4]。体内研究3-Methyladenine(3-MA)可以通过对磷酸肌醇3磷酸激酶(PI3K)的作用来阻断自吞噬,而PI3K的活性对于自噬体形成早期膜池的成核和组装是必须的。与SAH处理组相比3-MA并不会改变出血的程度。与SAH+对照成分组相比经过3-MA预处理后会明显加重神经病学症状。3-MA处理会减少自吞噬发生[5]。相反地,在SAH+3-MA组里断裂的半胱天冬酶表达量明显上调，与此一致的是与SAH+对照成分组相比，SAH+3-MA组中右脑皮层里原位末端标记阳性细胞数量明显增多[5]。特征推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)激酶实验:[4]ProteindegradationassayHeLacellsareradiolabeledfor24hourswith0.05mCi/mLl-[U-14C]valine.Attheendofthelabelingperiod,cellsarerinsedthreetimeswithPBS.CellsareincubatedforthedesignatedtimesineitherfullmediumorEBSSwithorwithoutthepresenceof10mM3-Methyladenine.细胞试验:[2]细胞系HeLa细胞系浓度1-10mM处理时间3分钟方法用台盼蓝染色法分析细胞存活率（如HeLa细胞）。简言之,经过3-MA处理后将贴壁的与漂浮的细胞都用PBS(pH7.4)重悬，密度控制在每毫升1-2×106。加入等体积的0.4%台盼蓝并彻底混匀。室温孵育3分钟后用血细胞计数器对细胞计数分析。动物实验:[5]动物模型体重300-350g的成年雄性Sprague–Dawley大鼠配制生理盐水配制剂量400nM给药处理脑室给药不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（数据来源于FDA指南）小鼠大鼠兔豚鼠仓鼠狗猴狒狒重量(kg)0.020.151.80.40.0810312体表面积(m2)0.0070.0250.150.050.020.50.240.6Km系数361285201220动物A(mg/kg)=动物B(mg/kg)×动物B的Km系数动物A的Km系数例如，依据体表面积折算法，将白藜芦醇用于小鼠的剂量22.4mg/kg换算成大鼠的剂量，需要将22.4mg/kg乘以小鼠的Km系数（3），再除以大鼠的Km系数（6），得到白藜芦醇用于大鼠的等效剂量为11.2mg/kg。大鼠剂量(mg/kg)=小鼠剂量(22.4mg/kg)×小鼠的Km系数(3)=11.2mg/kg大鼠的Km系数(6)1参考文献[1]MillerS,etal.Autophagy.2010,6(6),805-807.[2]HouH,etal.PLoSOne.2012,7(4),e35665.viewmore化学数据点击下载3-Methyladenine(3-MA)(SDF格式文件)分子量149.15化学式C6H7N5CAS号5142-23-4稳定性3年-20℃粉状6个月-80℃溶于溶剂别名NSC66389溶解性(25°C)*体外EMEM:Eagle'sminimalessentialmedium25mg/mLwarmed(167.61mM)乙醇4mg/mL(26.81mM)DMSO3mg/mLwarmed(20.11mM)体内30%propyleneglycol,5%Tween80,65%D5W30mg/mL*1mg/ml指产品微溶或不溶*溶解度检测是由Selleck技术部门检测的，可能会和文献中提供的溶解度有所差异，这是由于生产工艺和批次不同产生的正常现象。ChemicalName3-methyl-3H-purin-6-amine制备储备液1mg5mg10mg1mM6.7047mL33.5233mL67.0466mL5mM1.3409mL6.7047mL13.4093mL10mM0.6705mL3.3523mL6.7047mL50mM0.1341mL0.6705mL1.3409mL摩尔浓度计算器稀释计算器分子量计算器客户使用Selleck产品的实验数据(1)点击放大Be(2)-Chumanneuroblastomacellsweretreatedfor6,24and48hwith40μMsulforaphane(SFN)and/or10mM3-methyladenine(3MA).评级数据来源于2013,MałgorzataDurbasfromJagiellonianUniversityPoland.3-Methyladenine(3-MA)购于Selleck方法Westernblot细胞系Be(2)-Chumanneuroblastomacells浓度10mM处理时间6/24/48h结果客户使用Selleck产品发表的文献(2)DramaticantitumoreffectsofthedualmTORC1andmTORC2inhibitorAZD2014inhepatocellularcarcinoma.[LiaoH,etal.AmJCancerRes2015;5(1):125-139]Autophagosome-MediatedEGFRDown-RegulationInducedbytheCK2InhibitorEnhancestheEfficacyofEGFR-TKIonEGFR-MutantLungCancerCellswithResistancebyT790M.[SoKS,etal.PLoSOne2014;9(12):e114000]3-Methyladenine(3-MA)（NSC66389）,99%【同义名】：(3-MA)（NSC66389）【中文名】：3-甲基腺嘌呤订购信息：（原装进口，常备现货）货号名称CAS号规格目录价IPA1009-0010MG3-Methyladenine(3-MA,NSC66389）3-甲基腺嘌呤5142-23-410MG¥379IPA1009-0050MG5142-23-450MG¥569IPA1009-0100MG5142-23-4100MG¥1049产品描述：3-Methyladenine(3-MA,NSC66389)是一种广泛应用的细胞自噬抑制剂，可以抑制PI3K活性，具有限制性抑制作用，对PI3KVps34的抑制作用强于PI3Kγ，IC50分别为25μM，60μM[1]。3-Methyladenine以时间和剂量依赖的方式降低细胞活力，其作用caspase-3的活化相关。在正常和饥饿条件下，3-MA都可以引起癌症细胞死亡，并抑制细胞迁移和侵袭，该作用与其抑制细胞自噬的能力无关[2]。3-MA阻断自噬体的形成，有效抑制细胞内蛋白降解，但是，对细胞内蛋白酶活性没有影响，抑制烟草细胞的细胞自噬反应[3]。产品结构：基本特性：CAS号：5142-23-4，分子式：C6H7N5，分子量：149.15溶解与保存：粉末直接保存于-20ºC，有效期2年。DMSO溶解配制储存液（50mM）。建议分装后-20ºC避光保存，避免反复冻存，至少可存放6个月。使用浓度：3-Methyladenine(3-MA)的具体使用浓度请参考相关文献，并根据自身实验条件（如实验目的，细胞种类，培养特性等）进行摸索和优化。应用实例（仅作参考）：(1)为检测3-Methyladenine(3-MA)对细胞自我吞噬的抑制作用，用5mM3-Methyladenine处理HeLa细胞，结果显示，3-MA可以抑制无葡萄糖条件和正常条件下的HeLa细胞。为检测3-MA对HeLa细胞活力的作用，分别用0,2.5,5和10mM3-MA处理HeLa细胞，发现用2.5mM或5mM3-MA处理HeLa细胞1天后不会影响细胞的活力，而用10mM3-MA处理1天后，细胞活力降低25.0%。另外，用2.5,5和10mM3-MA处理2天后，细胞活力分别降低11.5%，38.0%，79.4%[3]。注意事项：♦本产品为化学试剂对人体可能有害，请做好安全防护工作，避免直接接触皮肤。♦本产品仅用于科研用途，禁止用于人身上。其他相关产品：1）Rapamycin雷帕霉素货号：IPA1021-0100MG