3-样品的采集与管理

山东省疾病预防控制中心苏生利电话：0531-826795092012年12月6日于济南依据•《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》中华人民共和国卫生行业标准WS293-2008•《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南（试行）》（中国疾病预防控制中心，2006年2月）•《HIV-1病毒载量测定及质量保证指南（试行）》（中国疾病预防控制中心，2008年2月）•《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》，卫生部第45号令2006年2月1日•《病原微生物实验室生物安全管理条例》中华人民共和国国务院令（第424号）2004年•《全国艾滋病检测技术规范》2009年修订版全国艾滋病检测技术规范4.1.1样品的编码和记录4.1.2应制定样品编码的标准操作程序（SOP），规定样品编码的原则和方法，为样品制定唯一性编码（编号），保证其唯一性。第一章样品的采集和处理样本样品种类及相应的用途1、全血、血清、血浆、唾液、尿液以及DBS样品可用于HIV抗体检测。2、抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定。3、血浆可用于HIV-1病毒载量、基因型及耐药检测。DBS样品可用于HIV-1基因型及耐药检测。4、全血、血浆、淋巴细胞富集液、外周血淋巴细胞（PBMC）及DBS样品可用于HIV核酸的定性检测。5、PBMC、全血、淋巴细胞富集液等可用于HIV-1分离培养。要求1、如何采集合格的血样？2、用什么容器收集血样？3、采用何种方式运输？4、运输容器要求？5、如何储存？安排实验采集血样将样品运输到实验室在实验室接收样品制备试验用样品将样品运输到开展实验的地点分析前期的透视图样本这有关系吗？•70-85%的临床决策均以实验室检验结果为依据•欠佳的实验室流程会影响检测结果的准确性•不准确的检验结果会影响卫生机构为患者提供最佳临床疗效的能力实验室误差会对患者、临床医生、实验室和您的卫生保健体系造成影响样本样本采集前准备物品操作程序（采集血液样品)1.辨认静脉血管：a)使用非扎针采血的手的食指b)用“按压－释放”的动作分辨血管或结缔组织c)确定柔软而有弹性的静脉血管的位置2.触摸检查静脉血管：a)同样使用非扎针采血的两根手指，一般用食指和中指b)从不同侧面触摸检查静脉血管c)估定血管滑动的程度3.消毒皮肤：a)用70%乙醇擦拭皮肤b)让皮肤在空气中干燥4.取组合器械：a)戴上两只新手套b)用拇指、食指和中指握住针头固定器的上部c)用无名指和小指拿住采血管d)握住针头固定器，保持水平状态e)针头的斜面必须向上5.牵拉皮肤：a)用拇指紧紧地向下拉皮肤以固定血管。b)拇指应该放置在扎针部位下方1～3英寸处。c)紧紧地向下拉皮肤可以把血管固定在适当的部位。6.把针头插入血管并采血7.血液采集：当血液采集到相应的血液采集管（一支或多支）中后：a)从针头上取下血液采集管b)把干棉球放到采血的穿刺部位c)从皮肤中抽出针头d)紧紧地压住采血的穿刺部位e)轻轻的摇动血液采集管f)把已污染的针头扔到锐器容纳器中g)摘除并扔掉手套h)在研究对象面前标记血液采集管i)标记实验室采样表格j)洗手采集病原微生物样本应当具备下列条件(一)具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全防护水平相适应的设备；(二)具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员(三)具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施(四)具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段。(五)采集高致病性病原微生物样本的工作人员在采集过程中应当防止病原微生物扩散和感染，并对样本的来源、采集过程和方法等作详细记录。《病原微生物实验室生物安全管理条例》静脉血的采集抽血过程中注意事项①避免溶血。器皿不清洁，不干燥；凝血时间长；损伤组织过多；抽血太快；注血时未取下针头或产生大量气泡；过分振荡；离心速度过高均可导致。②抽血前应检查针头是否锋利或带钩，是否接牢，有无阻塞和漏气。③抽血时进针不要过深，以免造成皮下血肿。④抽血时，只能外抽不能内推，以免形成气栓，造成严重后果。⑤采血后发生眩晕，可让其平卧休息片刻即可恢复，也可拇指掐人中和合谷穴。⑥吸取血清时必须用一次性吸管，否则易发生交叉污染。⑦用于HIV抗体筛查和确认试验送检的血清量以１～2ml为宜，最低不应少于100ul，否则无法进行正常检测。采集样本的注意事项•保障工作人员、病人和环境的安全•保证样品的质量（避免溶血、及时分离血清、合理的存放）•样本的正确标示（编号与登记表一致）•职业暴露的预防针头处理针头收集器正确的取针头方式错误的取针头方式血液标本采集过程中的注意事项:止血带结扎过久静脉持续高压1分钟：开始升高3-5分钟：升高5%10-15分钟：升高15%总蛋白、胆固醇、铁浓度升高也可使纤维蛋白溶解活性增强，而影响凝血指标的结果样本压力增加引起的血流阻塞水及小分子从毛细管壁渗出蛋白，酶等大分子浓度错误升高样本抽血时病人攥拳的影响•肌肉组织是代谢最活跃的组织，病人握拳加速钾从细胞溢出的速率•握拳一分钟，血清钾浓度增加1～1.5毫摩尔/升，可由正常的血清钾浓度（如4.0毫摩尔/升）升高到5.5毫摩尔/升为高钾血症。样本最好使血液达到试管的填充线处•确保保持正确的血液:抗凝剂比例•+/-10%填充量的差异是可接受的1完成试管填充样本抗凝剂对实验结果的影响•当血液与EDTA-Na2抗凝剂的比例为1∶4以上时不影响,•当血液与EDTA-Na2抗凝剂的比例不恰当时对抗-HIVELISA实验结果影响颇大.提示EDTA-Na2抗凝剂可促使OD值读数升高,其中可能原因是抗凝剂中的枸橼酸钠或EDTA-Na2与酶结合物的Fe络合的结果样本抗凝剂对实验结果的影响•抗凝剂又与纤维蛋白中的Ca结合,这样导致结合的大分子(酶-Fe-抗凝剂-Ca+-纤维蛋白)与微板结合力增强,导致检测OD数值升高•当EDTA浓度达2.5毫克/毫升，嗜中性粒细胞肿胀，核分叶溶解，影响细胞的分析；血小板肿胀、崩解、产生正常血小板大小的碎片，使血小板计数假性升高。•建议尽量不用肝素抗凝剂样本血液凝固原因①血流不畅，造成血液在血管内或注射器内凝固②抗凝剂量不够或失效，血液和抗凝剂比例要适宜③血样和抗凝剂没有完全混合好（尤其是固体抗凝剂），或工作人员工作失误忘记混合，应缓慢颠倒混合几次，不可用力震荡④止血带使用时间过长，加速凝血因子凝固活性。样本某医院样本常见错误（n=350样本/天）•溶血：2%•血量不足：10%•错贴标签：2%•试管不适当2%•样品凝固：6%•运输延迟：10%•样品遗失：2%•医嘱录录入不当11%•缺少请求：2%•样本制备不当：4%样本错误的样本导致错误的结果！案例•某病人血糖检测结果：10mg/dl(0.56mmol/L),医生投诉，病人生命正常，没有昏迷，检验科做错了。•措施：从新采样-检测-血糖正常•原因：标本前1天采集，第2天送检•解决方案：添加采样时间、接收时间；添加氟化钠、草酸钾-抑制糖酵解应用单位可采取的编码原则及编码顺序•例如:有些单位还可以有样品编号规则：（1）年月+科室编号+组别编号+流水号；（2）固定字符+科室编号+组别编号+流水号；（3）年+科室编号+组别编号+流水号；（4）样品类别+年+月+日+流水号；（5）年月日+样品条形码+流水号；等等。•总结:一个编号可以由5个部分组成：固定字段、独立可变字段、受控固定字段、受控可变字段、顺序码字段五类。唯一性编码•“P20030609A2P1001”，•“P”代表样品类型•“2003”代表年份•“0609”代表日期•“A”表示轮换位置•“2”：表示类型•“P1”代表样品采集地点•“001”序列号。样本省疾控采用的唯一性编码样品号：2008A02500011、2008-年代标示2、A样本状态标示3、025检测项目编号4、0001样品序列号----要有技术文件规范支持唯一性编号！！样本样本选择合适的容器样本条码机样本实现病人安全目标:必须要做的?更应该做好!这不是一根管子的问题，面对的是对病患的责任！Specimen样本例：第一次HIV抗体检测结果2002年5月23日ELISA快速法WB何××，大学生，男22岁（+）（+）gp160,gp120,p66,p51,gp41,p24,p17曹××，教师，男40岁（+）（+）gp160,gp120(±）p66(±),p51(±),p24魏××，中专生，女18岁（+）（+）gp160(±),p24,p17(±)样本第2次HIV抗体检测结果2002年5月26日ELISA快速法WB诊断何××（+）（+）gp160,gp120,p66,p51,gp41,p24,p17抗HIV-1（+）曹××（-）（-）抗HIV（-）魏××（-）（-）抗HIV（-）样本送检单的要求（1）2人填写（2）项目填全（3）微机打印（4）格式要统一送检单送检单常见问题1、手写不清晰9、标示一致2、空项太多3、乡、镇、村分不清4、未盖章5、未填联系方式6、未填第几次送检（2次应注明确证单位和时间）7、接收单位填错8、样本与送检单混放样品的运送1、应符合生物安全要求；要获得相应部门批准并由具有资质的人员专程护送。2、应采用三层容器对样品进行包装，随样品应附有与样品唯一性编码相对应的送检单。送检单应标明受检者姓名、样品种类等信息，并应放置在第二层和第三层容器之间。样品的运送3、第一层容器：直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的唯一性编码或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。4、第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。5、第三层容器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签，注明数量、收样和发件人及联系方式，同时要注明“小心轻放、防止日晒、小心水浸、防止重压”等字样，还应易于消毒。6、用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下（18～25℃）或4℃（特殊要求时）运送。用于病毒载量检测的样品应在-20℃以下运输。DBS样品应在室温下（18～25℃）运送。每一件包装的体积以不超过50mL为宜。样品的运送7、运送样品必须有记录。8、特殊情况下经有关部门批准可以用特快专递邮寄样品，但必须按三层包装，将样品管包扎好，严禁使用玻璃容器。样品的运送样本的包装送检单应与样品分开放置样品的运送中华人民共和国卫生部令第45号《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》已于2005年11月24日经卫生部部务会议讨论通过，现予以发布，自2006年2月1日起施行。部长高强二○○五年十二月二十八日可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输包装标识1.高致病性病原微生物危险标签高致病性病原微生物制冷剂：请勿自行打开如有破损、渗漏或遗失请立即通知当地卫生行政部门联系人：联系电话：2.高致病性病原微生物运输登记表3.外包装放置方向标识•安全运送：无损坏，不倾倒，无泄漏。•及时运送：按时送到，不失时效•必要条件：保证适宜温度，不受污染，•无失误：无地址人名不清，造成错送或延误。感染性样本的运输要求CD4淋巴细胞检测样本一定要常温送检！注意样品的接收1、样品包裹必须在具有处理感染性材料能力的实验室内、由经过培训的、穿戴防护衣、戴口罩、防护眼镜的工作人员在生物安全柜中打开，用后的包裹应及时进行消毒。2、核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告实验室负责人和上一级实验室技术人员。样品的接收3、检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，应将样品安全废弃。并将样品情况立即通知送样人。4、接收样品时应填写样品接收单。5、不合格样本可拒收。接收样本的设备个人防护1.手套的选择：生物安全实验室一般使用乳胶橡胶或聚腈类或聚氯乙烯手套用于对强酸、强碱、有机溶剂和生物危害物质的防护2.手套的