5153DNA粗提取和鉴定

人教版选修1专题5DNA和蛋白质技术课题1DNA的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定一、实验原理1、血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。2、DNA和蛋白质等在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同。DNA在物质的量浓度为0.14mol／L的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。3、DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。4、DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。二、方法与过程1、制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）0.1g/mL柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心、分离或静置沉淀。2、提取DNA。①取血细胞5-10mL＋20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌。②纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。③原理：血细胞的细胞膜、核摸吸水胀破，玻璃棒快速搅拌，机械加速血细胞破裂。⑴提取血细胞核物质：⑵溶解核内的DNA：滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌。⑶析出含DNA的粘稠物：⑷滤取含DNA的粘稠物：⑸DNA粘稠物的再溶解：在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。20mL2mol/L的NaCl溶液步骤⑷含DNA的粘稠物在20mL烧杯中轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。⑹过滤含有DNA的NaCl溶液：用放有两层纱布的漏斗过滤步骤⑸所得的溶液，滤液中含有DNA。⑺提取含有杂质较少的DNA：步骤⑹所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。3、DNA的鉴定：加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。100℃DNA＋二苯胺蓝色物鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。1、共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌”2、加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”三、实验小结第一次：使血细胞吸水涨破以获得含有DNA的溶液。第二次：使NaCl溶液物质的量浓度由2mol/L变成0.14mol/L，析出DNA物质的量浓度都为2mol/L体积分数为95%，提取DNA方法步骤加入物质目的1.制备鸡血细胞液柠檬酸钠溶液①2.提取鸡血细胞细胞核物质20m1蒸馏水②3.溶解细胞核内的DNA2mo1／L的NaCI溶液40mL③4.析出含DNA的黏稠物蒸馏水④5.滤取含DNA的黏稠物⑤6.将DNA的黏稠物再溶解2mol／L的NaCl溶液20mL⑥7.过滤含DNA的NaCl溶液⑦8.提取含有杂质较少的DNA冷却的95％的酒精50mL⑧A:(1)向试管中加入2mol／L的NaCl溶液5mL(2)加入DNA(3)4mL二苯胺试剂9.DNA的鉴定B:(1)向试管中加入2mol／L的NaCl溶液5mL(2)4mL二苯胺试剂⑨防止血凝固加速血细胞破裂溶解DNA使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出.使含DNA的黏稠物被留在纱布上使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中除去含DNA的滤液中的杂质提取DNAA出现蓝色B无变化①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固②加速血细胞破裂③溶解DNA④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中⑦除去含DNA的滤液中的杂质⑧提取DNA⑨A出现蓝色B无变化2、实验中NaCl的物质的量浓度为2mol／L和0.14mol／L对DNA有何影响?1、在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是()。A.稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA答：B答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出3、DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成()A.砖红色B.橘黄色C.紫色D.蓝色4、提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液?答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。答：D人教版选修1专题5DNA和蛋白质技术课题3血红蛋白的提取和分离一、基础知识：（一）蛋白质提取和分离原理（二）蛋白质提取和分离的方法1、凝胶色谱法：又称分配色谱法2、电泳法（三）缓冲溶液蛋白质提取与分离的依据－－蛋白质的物理化学性质差异：1.分子的形状、大小2.电荷性质和多少3.溶解度4.吸附性质5.对其他分子亲和力实验操作－－实验步骤血液组成成分1.洗涤红细胞2.释放血红蛋白3.分离血红蛋白4.透析血红蛋白样品处理和粗分离纯化纯度鉴定1.凝胶色谱法1）原理：2）材料：凝胶大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。凝胶是微小的多孔性球体，如葡聚糖或琼脂糖。内部有许多贯穿的通道.根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法概念：洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。混合物上柱洗脱大分子流动快小分子流动慢收集大分子收集小分子2．凝胶电泳法：1）原理：不同蛋白质的带电性质（正电荷或负电荷）、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。2）影响蛋白质分子运动速度的因素电泳：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程思考：蛋白质为什么带有电荷？在一定的PH下，蛋白质可解离的基团会带上电荷影响蛋白质分子运动速度的因素决定运动方向电场作用力形成阻力决定运动速率电荷性质电荷量分子形状分子大小√√√√√√√3）常用电泳方法琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。由弱酸和相应的强碱弱酸盐溶解于水中。如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等缓冲溶液－－洗脱剂1）作用：2）配制：调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。抵制外界酸碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定,从而维持蛋白质空间结构。思考：如何配制不同PH值不同的缓冲液？知识总结血红蛋白的提取和分离蛋白质分子的差异性凝胶色谱法原理分离过程凝胶电泳法缓冲溶液组成作用蛋白质的提取分离样品处理粗分离纯化纯度鉴定