6病原性球菌.

医学微生物学MedicalMicrobiology病原学教研室：王玉Tel:6222493;E-mail:[e-mail]第二部分细菌学各论•三性两法+防制–生物学特性–致病性–免疫性–微生物学检查法–免疫学检测–防治、控制各论内容的学习方法要点主要内容•病原性球菌•致病性肠道杆菌•致病性弧菌•厌氧性致病菌•致病性呼吸道细菌•四体化脓性细菌•化脓性细菌：一类能够感染人体并引起化脓性炎症的细菌。–化脓性杆菌–化脓性球菌（pyogeniccoccus）•根据革兰染色性的不同可分成–革兰阳性：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和肠球菌等–革兰阴性：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等。І病原性球菌球菌（coccus）•指个体形状呈球形或椭圆形的一大类细菌，其中对人类有致病性的称为病原性球菌（pathogeniccoccus）。•包括四个属–葡萄球菌属：G＋球菌–链球菌属：G＋球菌–肠球菌属：G＋球菌–奈瑟菌属：G–球菌（脑膜炎、淋病奈瑟菌）•化脓性球菌（pyogeniccoccus）:病原性球菌中能够感染人体并引起化脓性炎症的球菌。第一节葡萄球菌属（staphylococcus）•一群革兰阳性球菌，通常排列成不规则的葡萄串状一、金黄色葡萄球菌（S.aureus）二、凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）一、金黄色葡萄球菌（S.aureus）概述•分布广泛，种类多，包括48个种和亚种•医院内交叉感染的重要传染源–正常人群带菌率40%左右,医务人员带菌率可高达70%•所致疾病（常见、特殊）–化脓性炎症–食物中毒–烫伤样皮肤综合征–毒性休克综合征•耐药性•形态与染色–球形或椭圆形(1μm)，典型排列不规则葡萄串状–无鞭毛，无芽胞–体外培养时一般不形成荚膜，但仅在幼龄培养物或致病性葡萄球菌有荚膜可见–易被常用的碱性染料着色，革兰染色为阳性–可变为L型（Ab）一、生物学特性•培养特性–营养要求不高•普通平板、血平板最适生长温度为35℃～37℃，最适pH为7.4-7.6•肉汤培养基中，呈均匀混浊生长。–需氧或兼性厌氧，肉汤培养基中，呈均匀混浊生长；–在普通琼脂平板上孵育24~48h后，形成2～3mm圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明菌落。–菌落因种不同而出现金黄色、白色或柠檬色等脂溶性色素。–典型的排列呈葡萄串状，在脓汁或液体培养基中生长呈双球或短链状。GramstainofStaphylococcusaureusinpustularexudate•致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，于血琼脂平板上生长后，在菌落周围还可见明显完全透明溶血环（β溶血）。金黄色葡萄球菌血平板•生化反应–多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖等糖类，产酸不产气；–触酶阳性(区别于链球菌)；–致病株能分解甘露醇(高盐)、产酸；液化明胶（鉴定致病性）；–血浆凝固酶试验多阳性（鉴定致病性）；•抗原构造–葡萄球菌A蛋白（SPA）：绝大多数（≥90%）金葡菌细胞壁的表面蛋白，完全抗原；–多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁；–荚膜(体内形成)：荚膜多糖，粘附细胞或生物合成材料表面（生物膜）SPA荚膜或多糖磷壁酸肽聚糖层细胞膜凝聚因子葡萄球菌A蛋白（SPA）•存在于绝大多数（≥90%）金葡菌细胞壁的一种表面蛋白，是一种单链多肽，与肽聚糖共价结合。•可与人类、豚鼠、小鼠、犬、猪、貂等多种哺乳动物除IgG3外IgG1、IgG2、IgG4的Fc段发生非特异性结合，Fab段不受影响，仍可与特异性抗原结合。–为免疫学及实验室诊断试剂（协同凝集试验）•在体内，SPA与IgG的复合物具有抗吞噬、促细胞分裂、引起变态反应、损伤血小板等生物活性。含A蛋白的金葡菌IgG类抗体结合IgG的金葡菌抗原凝集协同凝集试验•荚膜：荚膜多糖，粘附细胞或生物合成材料表面（biofilm）；•多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁•分类–据肠毒素抗原性和等电点的不同分为9个血清型，以A、D产生肠毒素多见；–根据有无凝固酶分为凝固酶阴性菌和凝固酶阳性菌两大类；–核酸分析的遗传学分型：据DNA脉冲电泳、PCR和据16SrRNA等待基因型分类法，特异性高；•根据DNA相关性程度分为32种•根据16SrRNA分为40个种24个亚种–噬菌体分型法：将凝固酶阳性的葡萄球菌分为5个噬菌体群和26个噬菌体型；–根据色素和生化反应等的不同表型，可将葡萄球菌分为3类：•金黄色葡萄球菌(Staph.Aureus)，金黄色•表皮葡萄球菌(Staph.epidermidis)，白色•腐生葡萄球菌(Staph.saprophyticus)，白或柠檬色金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌三种葡萄球菌的主要生物学性状性状金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌菌落色素金黄色白色白色或柠檬色凝固酶+－－葡萄糖++－甘露醇+－－溶血素+－－耐热核酸酶+－－A蛋白+－－磷壁酸类型核糖醇型甘油型两者兼有噬菌体分型多数能不能不能致病性强弱无•抵抗力–葡萄球菌抵抗力为无芽胞细菌中抵抗力最强者–耐干燥(2-3月)、耐热–耐盐，能在10-15％NaCl琼脂中生长，肉汤培养基中，呈均匀混浊生长；–青霉素等药物的影响下可诱导成L型。–对碱性染料敏感(龙胆紫)–易产生耐药性•耐药性–一般对青霉素、红霉素和庆大霉素高度敏感；–有的菌株携带青霉素酶和乙酰基转移酶的质粒；–能通过转导转移耐药性；由于广泛应用抗生素，耐药（青霉素类、万古霉素）菌株增多，成为医院内感染最常见的致病菌。•基因组特征–Genomesequencing–2个毒力岛–超抗原编码重复序列–sRNA参与致病二、致病性A、致病物质B、所致疾病（一）致病物质•酶–凝固酶、纤维蛋白溶酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、脂酶等•毒素：–细胞溶素（、、、）、杀白细胞素、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1、肠毒素等•其他：结构蛋白、细菌胞壁成分–粘附素、荚膜、胞壁肽聚糖等1、凝固酶（coagulase）•概念–使经枸橼酸钠或肝素抗凝的人或兔血浆再次发生凝固的酶类物质，又分为：•游离凝固酶——试管法，激活协同因子成为凝血酶样物质，使液态的纤维蛋白原变为固态的纤维蛋白，导致血浆凝固；•结合凝固酶——玻片法，血浆纤维蛋白原的受体；•意义：鉴别有无致病性的重要指标，同时具有免疫原性。•致病机理：–抵抗吞噬细胞的吞噬–保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏–使感染局限化和形成血栓2、其他毒性酶•纤维蛋白溶酶（fibrinolysin）–即葡激酶，将血浆中的纤维蛋白酶原激活成为纤维蛋白酶，催化血浆纤维蛋白溶解，利于细菌的增殖、扩散；•耐热核酸酶（heat-stablenuclease）–能较强的降解DNA和RNA。–致病性葡萄球菌能产生该酶；–耐热，经100℃15min或60℃2h不被破坏；–耐热核酸酶可作为测定葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。•超抗原（superantigen）是一些不经过抗原递呈细胞的处理，便能与MHCII类分子结合，直接激活T细胞增殖，使其能释放细胞因子的抗原。–具类似丝裂原效应，激活的T细胞数量约为普通抗原的数千倍。3、葡萄球菌溶素（staphylolysin）•损伤宿主细胞膜的成分；按其抗原性的不同，分为、β、γ、δ等，对人类致病的主要是溶素；–溶素，对多种哺乳动物RBC有溶血作用。对白细胞、血小板、肝细胞、成纤维细胞、血管平滑肌细胞等均有损伤作用；–溶素是一种外毒素，具有良好的抗原性；经甲醛液脱毒后可制成类毒素。4、杀白细胞素（leukocidin）•只攻击中性粒细胞和巨噬细胞，在抵抵御宿主吞噬细胞，增强病菌侵袭力方面有意义；•死亡白细胞可形成脓栓，加重组织损伤；5、肠毒素（enterotoxin）•约50％临床分离的金黄色葡萄球菌可产生肠毒素–是位于染色体上的基因编码的一组热稳定、可溶性蛋白质，耐100℃30min；–抗胃肠蛋白酶的水解，与肠道神经细胞受体作用，到达中枢神经系统后刺激呕吐中枢而引起以呕吐为主要症状的急性胃肠炎，即食物中毒；–共9个血清型，同一株菌能产生两型或更多的肠毒素，但以一种为主，且多与耐热核酸酶平行存在。6、表皮剥脱毒素（exfoliativetoxin）•蛋白质类物质，有A、B两型，A耐热，B不耐热；•具有抗原性，可被甲醛液脱毒成类毒素；•表皮剥脱毒素引起的金黄色烫伤样皮肤综合征（SSSS），又称剥脱性皮炎；–多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成人；–病患皮肤呈弥漫性红斑和水疱，继以表皮上层大片脱落，但患部的炎症反应轻微。7、毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)•TSST-1可引起机体发热，增加对内毒素的敏感性；•感染产毒菌株后可引起机体多个器官系统的功能紊乱或毒性休克综合征（TSS）；•TSST-1可能不是引起TSS的唯一病因，革兰阴性杆菌内毒素、葡萄球菌肠毒素和溶素等与TSS的发病也有密切关系。•侵袭性疾病–局部皮肤化脓性感染：疖、痈、毛囊炎、伤口化脓–各种器官化脓性感染：气管炎、脓胸、中耳炎、心内膜炎、脑膜炎–全身感染：败血症、脓毒血症•毒素性疾病–食物中毒–假膜性肠炎：菌群失调症–烫伤样皮肤综合征–毒性休克综合征（二）所致疾病毛囊炎疖痈三、免疫性•人类对葡萄球菌有一定的天然免疫力；只有当皮肤黏膜受伤而宿主免疫力降低时，才易引起葡萄球菌感染；成人抵抗力强;•患病恢复后，能获得一定的免疫力，但特异免疫性不强，难阻止再次感染。四、微生物学检查法•标本–化脓性病灶取脓汁；败血症取血液；食物中毒取剩余食物或呕吐物。•直接涂片镜检•分离培养和鉴定•药敏实验•葡萄球菌肠毒素检查(食物中毒)小猫试验微生物检查法标本脓汁、血液、剩余食物、呕吐物等分离培养血浆凝固酶发酵甘露醇耐热核酸酶直接涂片镜检革兰阳性葡萄球菌生长现象色素，溶血生化反应毒素检查附1、致病性葡萄球菌的鉴定•G+球菌（+）•金黄色色素（+）•耐高渗（+）•溶血性（+）•血浆凝固酶（+）•耐热核酸酶（+）•发酵甘露醇（+）五、防治原则•消灭传染源•切断传播途径•保护易感者•个人卫生，注意消毒隔离；•皮肤创伤的及时处理，脓肿引流；•医务人员手部充分消毒，防止医源性感染；•自身菌苗疗法；•选用敏感药物、合理用药，防止耐药性产生凝固酶阴性葡萄球菌•常为寄生在人和动物体表及与外界相通的腔道中的正常菌群•确认30余种，极少数与人类感染性疾病有关，其中70%为表皮葡萄球菌引起coagulasenegativestaphylococcus，CNS所致疾病医源性感染最常见的条件致病菌菌血症或败血症尿路感染表葡菌最常见修复术或导管引起的感染心瓣膜修复术；脑脊液分流术等创伤感染外科手术或遭受贯通伤防治原则主要预防医源性感染和院内感染易产生耐药性治疗时根据药敏试验选择敏感药物第二节链球菌属（Streptococcus）•分布广泛–自然界、人及动物粪便和健康人的鼻咽部，大多数为正常菌群，不致病。–对人类致病的主要是A群链球菌和肺炎链球菌。•引起的疾病有–化脓性炎症、肺炎、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎–风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病链球菌属常用的三种分类方法•据溶血现象•据抗原结构•据对氧的需要1、据溶血现象分类•甲型溶血性链球菌：草绿色半透明溶血环称甲型溶血或α溶血；多为条件性致病菌。•乙型溶血性链球菌：、界限分明、完全透明的无色的溶血环，称为乙型溶血或β型溶血；致病力强。•丙型链球菌：不产生溶血素，无溶血环，也称为不溶血性链球菌；无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔引起感染。2、根据抗原结构的分类•按多糖抗原，可分成20群。–对人致病的链球菌菌株，90%左右属A群；–链球菌的群别与溶血性间无平行关系，但对人类致病的A群链球菌多数呈现乙型溶血；3、据对氧的需要分类•需氧链球菌：致病•兼性厌氧链球菌：致病•厌氧链球菌–前两者对人类有致病性；–第三者主为口、消化道、泌尿生殖道的正常菌群，仅在特定条件下致病。A群链球菌一、生物学性状形态与染色•单个菌体呈球形或椭圆形，多个则呈链状排列，但长短不一；•无芽胞、无鞭毛；培养早期（2~4h）形成透明质酸的荚膜；有菌毛样结构，其上含型特异的M蛋白•易被普通的碱性