第六章环境三致物的生物检测

环境三致物的生物检测环境三致物：指能致畸、致癌、致突变的物质DNA基因染色体的作用检测DNA损伤，DNA损伤修复等检测三致物对基因突变，包括正向突变和回复突变染色体畸变试验；微核试验；SCE试验特点：时间短、成本低、结果可靠项目九蚕豆根尖微核监测技术一、蚕豆根尖微核技术的原理让我们复习一下细胞有丝分裂的过程吧有丝分裂各时期植物细胞的有丝分裂有丝分列各期图像项目九蚕豆根尖微核监测技术一、蚕豆根尖微核技术的原理蚕豆根尖细胞在进行有丝分裂过程中，染色体经常发生断裂，但一般情况下，断裂可以自行愈合，如果受到有害因子的攻击，染色体就不能愈合，甚至增加断裂，形成染色体片段，这些染色体片段由于缺乏着丝点而不能到达细胞的两极，而留在细胞质中，一旦新细胞核形成，这些片段就形成大小不同的小核，即微核。因此，我们可以根据微核率的高低说明诱变物的强弱。项目九蚕豆根尖微核监测技术二、受试生物材料松滋青皮豆，或其他蚕豆品种1.蚕豆浸种催芽25℃，浸泡26～30h浸种催芽：用纱布松松包裹吸涨的种子置解剖盘内，保持湿度，在25℃的温箱中催芽12～30h。待种子初生根露出2～3mm，再选取发芽良好的种子，放入铺满薄层湿脱脂棉的解剖盘内，仍在25℃下催芽36～48h，当大部分种子的初生根长至2～3cm时，即可用于处理三、试验步骤项目九蚕豆根尖微核监测技术2.处理根尖每一处理选取6～8粒初生根生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，让被测液浸泡住根尖即可，用自来水（或蒸馏水）作对照处理，方法相同。处理时间为4～6h。3.根尖细胞恢复培养将处理后的种子，用自来水（或蒸馏水）浸洗3次，每次2～3min，然后把洗净的种子再放入湿脱脂棉盘中，按前述培养条件恢复培养22～24h项目九蚕豆根尖微核监测技术4.根尖细胞的固定将恢复后的种子，从根尖顶端切下lcm长幼根放入青霉素空瓶中，加卡诺氏液固定24h5.孚尔根（Feulgen）染色(1)固定好的幼根，在青霉素瓶中用蒸馏水浸洗2次，每次5min(2)吸净残水，再加5mol/LHCI将幼根泡住，连瓶放入28℃水浴锅中水解幼根25min左右，至幼根被软化即可(3)用蒸馏水浸洗幼根2次，每次5min项目九蚕豆根尖微核监测技术(4)在暗室或遮光的条件下加席夫（Schiff）试剂，染色1～4h(5)除去染液，用SO2洗涤液浸洗幼根2次，每次5min(6)用蒸馏水浸洗1次，5min(7)将幼根放入新换的蒸馏水中，置4℃的冰箱内保存，可供随时制片之用。6.制片45%醋酸压片法项目九蚕豆根尖微核监测技术7.镜检及微核识别标准◆大小是主核大小的1/3以下，并与主核分离；◆形状为圆形、椭圆形或不规则形；◆着色与主核相当或稍浅每一处理观察3个根尖，每个根尖随机计数1000个细胞中的微核数项目九蚕豆根尖微核监测技术五、实验数据的统计处理和污染程度的划分（一）数据处理1.按以下公式计算各测试样品（包括对照组）的微核千分率（MCN‰）MCN‰=某测试点（或对照组）观察到的MCN数某测试点（或对照组）观察到的细胞数×100％2.如果被监测的样品不多，可直接用各样品MCN率平均值与对照比较（t检验），从差异的显著性判断水质污染与否项目九蚕豆根尖微核监测技术3.如果被检测的样品较多，可先用方差分析（F检验）看各样品的MCN‰平均值与对照的差异显著性。（二）结果评价1.利用“MCN‰”进行评价10‰无污染10‰～18‰轻污染18‰～30‰中污染30‰重污染项目九蚕豆根尖微核监测技术2.利用“污染指数”进行评价PI值越高，说明污染越重。0～1.5基本没有污染1.5～2轻污染2～3.5中污染3.5重污染（三）结果报告平均值对照组平均值处理组污染指数000000)(MCNMCNPI