1第一章实验室设备和一般技术.

第一章实验设备及培养条件第一节实验室设计第二节常用设备和器材第三节玻璃器皿的选择与清洗第一节组培实验室植物细胞工程实验室的组成在建造植物组织培养室时，应选择采光好、通风好、环境干净的地点，以利于组织培养的顺利进行和降低培养过程的污染率。洗涤室药品室称量室灭菌室缓冲室4鉴定室（观察室）3培养室5温室培养基配制室2接种室1通用实验室植物细胞工程实验室的组成1通用实验室准备室（又称化学实验室），明亮，通风。功能——洗涤室、配置室、灭菌室功能：用于玻璃器具的清洗、干燥和贮存；接种材料冲洗。配备：上下水；水槽；塑料筐；干燥箱；晾干架等。1.1洗涤室面积：根据规模，可与配置室合并，一般20m2。1.2配置室功能：用于培养基的配制、试管苗出瓶、清洗。配备：药品柜，天平，工作台，蒸馏水器，磁力搅拌器，冰箱，电炉或电饭锅，酸度计，培养箱设计要求：明亮、通风、洁净。药品柜冰箱天平磁力搅拌器恒温水浴锅酸度计电蒸馏水器水处理中心纯水器恒温培养箱电饭锅电炉人工气候室功能：完成培养基、接种工具等的高压灭菌过程。配备：高压灭菌器或微波炉，烘干箱。1.3灭菌室洗涤室药品室称量室灭菌室缓冲室4鉴定室（观察室）3培养室5温室培养基配制室2接种室1通用实验室植物细胞工程实验室的组成2接种室功能：用于植物材料的无菌分离、接种和转移培养物。结构：缓冲间+接种室配备：超净台，工作台，搁架，医用平车，细菌过滤器、解剖镜、紫外灯等。面积：一般5－7m2设计要求:地面、顶棚及墙壁平坦无缝，密闭光滑，干爽安静，清洁明亮，配置横拉门，门窗严密。接种设备--无菌超净工作台:用于培养材料的消毒及接种。使用前，将超净工作台上面的排风和杀菌按钮开启，灭菌15-30min后，关闭杀菌按钮，打开照明按钮，即可在上面进行操作。接种箱返回GoodManufacturingPractice良好作业规范优良制造标准洗涤室药品室称量室灭菌室缓冲室4鉴定室（观察室）3培养室5温室培养基配制室2接种室1通用实验室植物细胞工程实验室的组成3培养室配备：培养架边台解剖镜照明设备定时器空调器干湿温度计工作台除湿机换气扇面积：根据规模定功能：培养植物材料。4.观察室功能：观察并研究培养材料的生长分化情况及其形态发生规律；检查培养材料是否脱毒和发生变异。主要配备：生物显微镜，切片机，酶联免疫检测仪，PCR扩增仪等。要求：室内清洁、明亮、安静，设备先进。倒置显微镜体视显微镜生物显微镜荧光显微镜超低温冰箱手持式基因枪固定式基因枪高速冷冻离心机PCR仪冷冻干燥机移液器酶标仪电穿孔仪洗涤室药品室称量室灭菌室缓冲室4鉴定室（观察室）3培养室5温室培养基配制室2接种室1通用实验室植物细胞工程实验室的组成5.温室要求：能够控温调湿、控光通风。面积：据规模来定。注：室内驯化与设施下驯化均可。功能：提供组培苗炼苗的环境。空调操作台工作台黑板讲台烘箱化学实验室接种室培养室缓冲间超净工作台培养架培养架工作室药品柜推拉门摇床蒸馏水工作台灭菌锅水槽空调第一章实验设备及培养条件第一节实验室设计第二节常用设备和器材第三节玻璃器皿的选择与清洗第二节设备和器材1高压蒸气灭菌锅﹡2接种工具﹡3培养设备﹡4化学实验及分析设备﹡5培养物细胞学观察设备﹡1.高压蒸气灭菌锅用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。工作原理：在密闭的蒸锅内，0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。1.外桶2.锅盖3.安全阀4.排气阀5.气压表6.内桶7.排气软管8.支架手提式高压蒸气灭菌锅1高压蒸气灭菌锅使用方法：①首先检查灭菌锅内是否有水，而且水刚好淹住加热器，②然后放入灭菌材料，对称拧紧灭菌锅上的螺丝，关闭放气阀通电。③待压力上升到0.05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。④三次放气后，关阀再通电，压力表上升达0.1-0.15Mpa时，维持20min后，断电，⑤待压力降至零时，打开入入气阀，取出灭菌材料。•注意事项：•①对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间；•②对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20-30min；•③高压灭菌前后的培养基，其pH值下降0.2-0.3单位。因此，调pH值时，可适当调高0.1－0.3个单位。2.1镊子类：接种、转移材料或分离茎尖用，以100ml三角瓶为培养瓶，可用20cm长。2接种用具2.2剪刀类：医用剪刀，剪切割外植体或继代培养时分离材料。2.3解剖刀：切割芽、茎段、愈伤组织等，继代时分离材料，也可用于微小外植体的接种等。2.4、解剖针：转移细胞或愈伤组织，微茎尖分离及接种等。2.5.其它：周转筐搪瓷盘移液管架、玻璃棒、酒精灯、试管架等。3培养设备空调定时器温度控制器增湿机或去湿机培养架摇床或旋转床日光灯光照培养箱4化学实验及分析设备•天平•酸度计•蒸馏水器•烘箱或玻璃烘干器•电炉•药品柜•冰箱•水槽•凉干架•污物桶5培养物细胞学观察设备•显微观察设备•组织切片染色设备•照相及冲洗设备倒置显微镜体视显微镜生物显微镜荧光显微镜第三节玻璃器皿的选择和清洗•1玻璃器皿的选择•2清洗1.1对玻璃器皿要求：1）耐腐蚀；耐高温、高压；2）透明度好；3）便于接种。1选择（1）试管---适合于初代培养、用少量培养基及试验各种不同配方时选用（2）三角锥瓶—适用于各种培养（如固体培养、液体培养、大规模培养或一般培养）。（3）L形管和T形管—为专用的旋转式液体培养试管。（4）培养皿—适于作单细胞的固体平板培养、胚和花药培养和无菌发芽。（5）角形培养瓶和圆形培养瓶—适用于液体培养用，如单细胞和原生质体的浅层培养。（6）果酱瓶—常用作组培苗大量繁殖用的培养瓶。（7）兰花瓶—适于蝴蝶兰、大花蕙花等兰花的组培苗大量繁殖用的培养瓶。•三角瓶：50、100、250、500ml或用250ml罐头瓶代替，2000-3000ml。•培养皿：6、9、12cm•试管：18×180mm或20×200mm•量筒：10、50、100、500、1000ml烧杯：50、100、200、500、1000ml容量瓶：100、200、500、1000ml试剂瓶（棕色）：50、100、250、500、1000ml移液管：0.2、0.5、1.0、2、5、10ml微量移液器玻璃棒、酒精灯1.2玻璃器皿的规格：2清洗2.1.清洗玻璃器皿用的洗涤剂有肥皂、洗洁精、洗衣粉、和铬酸钾洗涤液。2.2原则：（1）清洗时先将器皿中的残渣除去，用清水洗净，再用热的肥皂水或洗洁精洗净，清水冲洗干净后用蒸馏水冲洗一次，干后备用（2）洗净的玻璃器皿应透明发亮、内外壁水膜均匀，不挂水珠。2.3新购的玻璃器皿①先用1%稀盐酸洗后用洗洁精清洗，用自来水、蒸馏水冲洗。②用重铬酸钾+浓硫酸洗液浸泡4h后，自来水彻底冲洗。2.4用过的玻璃器皿流水冲洗后，泡入洗洁精水中刷洗，用自来水蒸馏水冲洗•污染瓶清洗：•有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。洗液成份是重铬酸钾和浓流酸，能将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。复习思考题：1.你认为组培实验室在规划布局上应考虑哪些问题？并尝试设计1个组培实验室。2.按类别列举组培实验室所需设备