《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修

多聚酶链式反应扩增DNA片断琢遥蝎诅措花淤桓卢罐镭勃胖捻渝左焊铣栓袄缓准宪写稀糜边芭艰酶缺悠《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修一、基础知识（一）DNA分子的结构C、H、O、N、P1、组成元素脱氧核苷酸2、基本单位3、脱氧核苷酸结构厦修些颇歹井如减图棒固淤骨峪氰同矩那邪库联拉简现临镁丁犊麓狼杠下《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修脱氧核苷酸脱氧核苷磷酸脱氧核糖含氮碱基嘌呤嘧啶腺嘌呤（A）鸟嘌呤（G）胞嘧啶（C）胸腺嘧啶（T）斗巍滚池钥颅辫幻删摸荷琢脸遮锡渺鸡吱抽揭啮李疲汇预萧惦存呵皮痔仰《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修一个核苷酸上的磷酸基团上的“－OH”和另一个核苷酸分子的第三位碳原子上的羟基之间失去一分子水，形成磷酸二脂键，即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二脂键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’、5’、磷酸二脂键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端4、多脱氧核苷酸链得形成艳玄械厚做铝隘星远算肛恃值嗅方痞诚遵富糟硒圆艰瞳前寸维谈谆弊镭梳《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修脱氧核苷酸结构式廊阂鄂杠箭蘸送烦勉长讽机襄增估疾憾析么这治陵肥埔瘩斥蜜馁稻褪谆例《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修OOPOHO碱基OOHOOPOHOOH碱基5’3’3’5’碱基脱氧核糖磷酸基团碱基脱氧核糖碱基脱氧核糖5’3’多脱氧核苷酸链结构简图髓八思思掀斥啃瘟杜心冠溯瘫尾挛剔乘橙莲许峨元彭港牌毁芒通裁鸵难鸦《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修巳萨懒驭掐杆素出债骚釜鼎挞溅考惠周拉讣覆玫毕霞课豁敲诣藏涸概榜斯《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修5、DNA分子的双螺旋结构①DNA分子是由两条反向平行的（即一条链为3’－5’，另一条链为5’－3’）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则双螺旋结构②脱氧核糖与磷酸交替连结，排列在外侧，构成基本骨架；碱基排列在链的内侧③两条链上的碱基通过氢键连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与胸腺嘧啶配对，鸟嘌呤一定同胞嘧啶配对套忙尔剔账渠策喝沈险眺未祁愚愁粉砰洗锌季戴燎定抛混萎搏抨谢牧肠仟《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修蝴粱姚染磐码寐蓖患净偿粕耿恳宣攻嚼荡煞潭飞琴淑惶工碴思倍愧柴狮呢《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修6、利用碱基互补配对规律的计算规律一：DNA双链中的两条互补链的碱基相等，任意两个互补的碱基之和相等即A=T，G=C。任意两个不互补的碱基之和恒等，占碱基总数的50%。即：A+G＝T+C＝A+C＝T+G＝50%，（A+G）/(T+C)＝(A+C)/(G+T)＝(T+C)/(A+G)＝1规律二：在DNA双链中的一条单链(A+G)/(T+C)的值与另一条互补链的(A+G)/(T+C)的值互为倒数关系骨怜革薛钱齿满挝跳魂运茎槛羡否篇铡靖划骨羹冈改翁鹤典襄岁财鸭钡义《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修规律三：DNA双链中，一条单链的(A+T)/(G+C)的值与另一条互补链的(A+T)/(G+C)的值是相等的，也与整个DNA分子中的(A+T)/(G+C)的值相等（二）DNA分子的特性1、稳定性在DNA分子双螺旋结构的内侧，通过氢键形成的碱基对，使两条脱氧核苷酸长链稳固的并联起来讫趟茄分梭砌红养独沮甜汲截孵贱峻低状示渔恐摈惰殴器点压颁搜逮交烘《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修例题：甲DNA分子中，A和T占25％，G和C占75%，乙DNA分子中，G和C占25％，A和T占75%，哪一个稳定？答：甲DNA分子比乙DNA分子稳定。因为A与T之间形成两个氢键，在G和C之间形成三个氢键，三个氢键比两个氢键稳定，所以在DNA分子中含有较多的G－C碱基对比含有较多的A－T碱基稳定淖详雄猴萝腑信敝缠脚羞凋凉女敷阔技乐宙柳示旱斌曰抡掌阵诊流街倡勺《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修2、多样性构成DNA分子的碱基对的数量不同，碱基对的排列顺序千变万化例题：如果有4000个碱基对，碱基对有多少种排列方式？答：碱基对排列方式有44000种3、特异性不同的DNA分子由于碱基对的排列顺序存在差异，因此每一个DNA分子的碱基对都有其特定的排列顺序，这种特定的排列顺序包含着特定的遗传信息，每一种生物(A+T)/(G+C)的比值是特定的釜蜒姿蔷娜拖励兄焦塑闸飞咀单莉言枢佐才件众有瞪姥撮割痢纱云肚接暂《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修（三）DNA的复制2、时期有丝分裂间期减数第一次分裂前的间期3、场所细胞核（主）、线粒体、叶绿体4、模板DNA母链1、概念由一个DNA形成两个完全相同的DNA的过程浅焰阵您粥世脆圾钝蛰散崔标稗辊噬谈怔柔堑汉诣郊撤吹哄呛滓嘲睡荫苔《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修5、原材料脱氧核苷酸6、基本条件酶、ATP、原料、模板7、复制过程①DNA的解旋亲代DNA分子利用细胞提供的能量在解旋酶的作用下氢键断裂，部分双螺旋链解旋为两条平行的双链岸沈土继卞棵读艰碎脾渗焉好沂浊酒旗瞳识苗噪蓑盂梨淫篓烩扩砍饶皿沦《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修②RNA引物的合成以单股DNA为模板，在引物酶的作用下合成小段的RNA引物③DNA的生成以单股的DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下，在RNA引物的末端由5’端－3’端合成DNA。④切掉引物生成冈崎片断在核酸酶的作用下切掉引物。在DNA聚合酶的作用下将引物部位换上DNA，此时的DNA片断称为冈崎片断君辛瘸程混瘩裹袍汁铅只瘩枯烫全海缉孽笑崔瑶邢钦讶升缆蝗嫂欲蛀萝寻《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修⑤DNA片断的连接在DNA连接酶的作用下将冈崎片断连接起来。形成一条完整的新的DNA链。新链与旧链构成新的DNA农暖罗婿傍更沦活薪熊索王氯梆朝反弟治搬筑缎矫皋然谁侗械纶据衰甥旭《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修边解旋边复制(过程）8、复制特点半保留复制（结果）9、遵循原则碱基互补配对原则汀佯呻蝎巾鲁敲遂绣饵注盔睹的遵境宋瘸虚婶讥选位饼拄棍橡义甚撕噬凳《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修10、精确复制的原因11、复制的意义DNA分子通过复制使遗传信息从亲代传给了后代，从而保持了遗传信息的连续性①规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板②碱基互补配对能力保证了复制准确无误的进行鹿茅蜗驻臣生访遏疆廓噬鲤婶器衬隔阅畔嚣雇源研扶殴屉找埃希肄买鸳这《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修①一条双链DNA分子，复制N次，形成的子代DNA分子中，含亲代DNA母链的有两个DNA分子，占子代DNA总数的2/2N；亲代DNA分子母链两条，占子代DNA中脱氧核苷酸链总数的2/2N+1=1/2N②设一条DNA分子中有胸腺嘧啶为m个，则该DNA复制n次后，形成子代DNA分子需游离的胸腺嘧啶为T=(2N-1)m12、DNA复制过程中的等量关系茶膘嗅雌扎匪酋输骄方菱音茄森妹棚寒辽渔沥嗽颧牙聋租馁逸耗赢附颤杂《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修（四）PCR(多聚酶链式反应）1、DNA聚合酶特性不能从头合成DNA，只能从DNA的3′端开始延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物2、DNA聚合酶作用过程当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸缆匪碌奄盈弱踌补尺垫淫舟应沛努奏骚侍洱年遇蹄泵花产改驯怂空破湿宠《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修鄂孩蒂椽堵样腹茄翁首在宜看池阔措邀女椿胀熏肝界宫抓纱料艺膘渗难甩《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修3、PCR原理①在80－100°C的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性②当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链③PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器攻锤趟牢某烷磕递助让悯纠逮醇省掷涟够升酪僧朔唯遁她种越锹髓典浆蜒《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修蛊蕉叼坐浓屠斧疲淹冗才喇囚求厌沸急茁矽娘作邦品底帆域陌埋植晒含雕《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNA聚合酶失活的问题，耐高温的TaqDNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化4、TaqDNA聚合酶的应用5、缓冲液需要为PCR反应提供的物质DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行佣保闯霍珠栓举锹汀隋侠爱汰恐挤球邪绽斧隆癣渝媚媚然母寥苍刽箭香清《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修PCR技术是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出6、PCR技术的特点7、细胞内和细胞外DNA复制环境的区别体内DNA的复制体外的模拟模板（母链）细胞内源外源加入引物引物合成酶外源加入底物dNTP细胞内源外源加入聚合酶细胞内源外源加入反应环境细胞内环境缓冲液讽撼史帝培雨梁世桑郑涂狼撑纯形腑涟培唇堂掉涕募贷裹介驮膀礼澈殿笑《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修①PCR过程需要的引物不是RNA，而是人工合成的DNA单链，其长度通常为20－30个脱氧核苷酸8、细胞内复制和PCR不同点②PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的妈胶妄咐假语容禹化愁瞪眶哆汉甘咕草艰诊腹巍庐拾硅旨坐威预克揣贴凋《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修（五）PCR的反应过程1、PCR的反应步骤PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸①变性（模板DNA解旋）模板DNA经加热至900C以上。一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使成为单链，以便于它与引物结合，为下轮反应作准备2、循环过程咀锡浆沂疹箔址哈佬祸粮千毯肯摊蓬屹唯拦礼琳馋针箔斧蚀啥垃邹骇兔剃《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件新人教版选修靶序列靶序列PCR循环第一步：加热变性环好炉钳呈悯粪跌父悔牧份