消毒与灭菌技术

第三章清洁、消毒与灭菌技术一、基本概念二、物品清洁法三、物理方法四、化学方法一基本概念清洁是清除物品上的一切污迹,如尘埃,油脂等消毒清除或杀灭物品上的病原微生物灭菌清除或杀灭物品上的一切微生物,以杀灭芽孢为准防腐抑制微生物的生长与繁殖概念的鉴别消毒——相对的，不一定达到无菌的要求灭菌——绝对的，一定达到无菌的要求。二物品清洁法常用的清洁方法水洗机械去污去污剂去污清洁方法用于衣被、家具、地面、墙壁及医疗器械等物体表面的处理或物品消毒、灭菌前的处理常用去污法碘酊乙醇甲紫乙醇或草酸溶液陈旧血渍过氧化氢溶液高锰酸钾维生素c或过氧乙酸墨水稀盐酸或草酸也可用氨水或过氧化氢铁锈1%热草酸溶液，也可用热醋酸擦拭法高压蒸汽灭菌法常用消毒灭菌的方法物理法化学法浸泡法熏蒸法喷雾法热力灭菌法其他法辐射灭菌法燃烧法烤箱法煮沸法干热法湿热法日光曝晒法紫外线灯照射法电子灭菌灯法电离辐射法三、物理消毒灭菌法（physicaldisinfectionsterilization）利用热力或光照等物理作用，使微生物的蛋白质及酶变性或凝固，以达到消毒灭菌的目的常用的有热力、光照、辐射、过滤除菌等方法。（一）热力消毒灭菌法(heatdisinfectionsterilization)主要利用热力破坏微生物的蛋白质、核酸、细胞壁和细胞膜，从而导致其死亡效果可靠、经济方便，使用广泛1、干热消毒灭菌法干热是指相对湿度在20%以下的高热，由空气导热，传热较慢，干热消毒灭菌常用的方法焚烧----最彻底的灭菌方法烧灼----直接用火焰灭菌方法如接种环、试管口、三角瓶口干烤----加热160-170℃2h玻璃器皿、陶瓷红外线----热效应，与干烤类似灭菌效果：可杀死营养体和芽胞干热消毒灭菌法方法要求使用范围注意事项焚烧灭菌法将物品直接投入点燃的焚烧炉内焚烧无保留价值的污染物品，如污染的纸张、特殊感染的敷料等注意安全，远离易燃、易爆物品燃烧灭菌法用乙醇燃烧的火焰进行灭菌①急用的某些金属器械、盆的灭菌②微生物实验室接种环的灭菌①在燃烧过程中不能添加乙醇等易燃料②贵重器械及锐利刀剪禁用燃烧法干烤消毒灭菌法消毒：箱温120℃时间：10～20min灭菌：箱温180℃时间：20～30min用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品，如油剂、粉剂、玻璃器具、金属制品等注意根据不同的物品及烤箱类型来确定消毒灭菌的温度与时间微波消毒灭菌法根据不同的物品来确定消毒与灭菌的时间①用于食品及餐具的消毒②医疗药品及耐热非金属材料物品的消毒灭菌禁用于金属材料物品的灭菌湿热由空气和水蒸气导热，传热快，穿透力强，湿热消毒灭菌常用的方法：高压蒸汽灭菌法121℃15-20mim（杀芽胞)煮沸消毒法水煮100℃5mim(杀繁殖体)-2h(杀芽胞)流通蒸汽消毒法水蒸汽100℃15-30mim(杀繁殖体)间歇蒸汽灭菌法反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌(杀芽胞）巴氏消毒法61℃30mim/71℃30s（杀致病菌）2、湿热消毒灭菌法原理适用方法是热力消毒灭菌中效果最好的一种方法利用高压及饱和蒸汽的高热所释放的潜热灭菌，潜热是指当1g100℃的水蒸汽变成1g100℃的水时所释放的热能（2，255J）临床广泛应用于耐高温、高压、潮湿物品的灭菌，如各类器械、敷料、搪瓷、橡胶、玻璃制品及溶液等是热力消毒灭菌中效果最好的一种根据排放冷空气的方式和程度的不同，分为下排气式压力蒸汽灭菌和预真空压力蒸汽灭菌。高压蒸汽灭菌法高采用高压饱和蒸汽杀灭微生物，是最有效的灭菌方法–115℃,70.91kPa,30min–121℃，103.1kPa,15-20’培养基注射液手提式灭菌锅灭菌箱高压蒸汽灭菌温度/℃压力/kPa(kg/cm2)时间/min11040.52(0.4)4011570.91(0.7)30120101.3(1.0)20125141.82(1.4)15130182.34(1,8)10热压灭菌所需温度与相当压力及时间高压蒸汽灭菌常用设备软包装灭菌器高压蒸汽灭菌器手提式热压灭菌器高压蒸汽灭菌的效果监测物理监测法生物监测法化学监测法监测灭菌效果物理监测法用150℃或200℃的留点温度计。使用前将温度计汞柱甩至50℃以下，放入包裹内，灭菌后检查其读数是否达到灭菌温度化学监测法主要是通过化学指示剂的化学反应，灭菌后呈现的颜色变化来辨别是否达到灭菌的要求。临床常用的化学指示卡与化学指示胶带，化学指示卡放在包的中央，化学指示胶带粘贴在包的外面。监测灭菌效果生物监测法是最可靠的监测法，利用对热耐受力较强的非致病性嗜热脂肪杆菌芽孢作为指示剂，制成每片含106个嗜热脂肪杆菌芽孢的菌纸片,使用时将10片菌纸片分别放于灭菌器四角及中央，待灭菌完毕，用无菌镊取出后．再放人培养基内，在56℃温箱中培养48h至1周，若全部菌纸片无细菌生长则表示灭菌合格。煮沸消毒法（boilingsterilization）要求适用方法经5～10分钟可杀灭繁殖体，达到消毒效果。将碳酸氢钠加入水中，配成1%～2%的浓度时，可提高沸点达105℃，增强杀菌作用，还可去污、防锈。适用于耐湿、耐高温的物品如金属、搪瓷、玻璃和橡胶类等将物品刷洗干净，全部浸没在水中，然后加热煮沸消毒时间从水沸后计算如中途加入物品，则在第二次水沸后重新计时注意煮前煮时煮后应将物品刷洗干净有轴节的器械或带盖的容器应将轴节或盖打开再放入水中空腔导管须先在腔内灌水物品不宜放置过多，大小相同的碗、盆不能重叠，要保证物品各面都与水相接触根据物品性质决定放入水的时间及消毒时间玻璃器皿应用纱布包裹好后，从冷水或温水中放入，消毒时间为10～15min橡胶制品用纱布包好，待水沸后放入，时间为5～10min金属及搪瓷类物品，消毒时间为10～15min；水的沸点受气压影响，海拔高的地区气压低，水的沸点也低，需适当延长消毒时间；海拔每增高300m，消毒时间延长2min；应用无菌器械将物品及时取出置于无菌容器内流通蒸汽消毒法水蒸汽100℃30-60’(杀繁殖体)适用对象：不需杀死芽孢的物体的消毒。适用于一些注射剂生产，尤其是1－2ml注射剂及不耐高热的品种。若在药液中加入抑菌剂（0.1%~0.5%苯酚等），可杀死芽孢此法不能保证杀灭芽孢，因此制备过程要避免污染。低温间歇灭菌法将灭菌物体置于60~80℃，1h后，置于20~25℃，24h。反复三次(杀芽胞）不宜高压灭菌的培养基不耐热的药物和营养物发酵车间的管道等中药注射剂常用该法适用对象缺点：时间长、功效低，消灭芽孢效果差巴氏消毒法巴氏消毒法（杀致病菌）61℃30’或71℃15’’82℃处理4秒适用对象：奶制、果汁、酒、糖浆等食品消毒。1、紫外线消毒法概念紫外线消毒法是利用紫外线照射，使菌体蛋白发生光解、变性，菌体内的核酸、酶遭到破坏而死亡的一种消毒方法。紫外线的杀菌力与其波长密切相关，最佳杀菌波长为250～270nm.适应范围紫外线消毒适用于空气消毒与物品表面的消毒。（二）辐射灭菌法特点：紫外线穿透力较弱紫外线可杀灭多种微生物，包括杆菌、病毒、真菌、细菌繁殖体等。杀灭繁殖体需3~5s；杀灭芽孢需10min以上。杀菌机制使菌体DNA失去转换能力而死亡；破坏菌体蛋白质中的氨基酸，使菌体蛋白光解变性；降低菌体内氧化酶的活性，使氧化能力丧失；使空气中的氧电离产生具有极强杀菌作用的臭氧。方法空气消毒物品消毒消毒前做好室内清洁卫生，关闭门窗，停止走动每10m2安装30W紫外线灯管一支有效距离不超过2m照射时间30～60分钟消毒时应将物品全部暴露避免遮挡有效距离为25㎝～60cm照射时间为20～30分钟。注意事项(1)保持紫外线灯管清洁，每2周用95％乙醇棉球擦拭灯管表面一次。(2)紫外线对眼睛和皮肤有刺激作用，照射过程中产生的臭氧对人亦有危害，故一般不在有人的环境中使用，必要时应戴防护镜和穿防护衣。(3)消毒物品时应定时翻动物品，使其表面受到直接照射。(4)为保证消毒效果，应定时检测灯管照射强度(一般每3～6个月测定一次)，如灯管强度低于70μW/cm2时应更换，或建立使用时间登记本，凡使用时间超过1000h需更换灯管。(5)定期进行空气培养，以监测灭菌效果。紫外线消毒法2、电离辐射包括：β射线（电子束灭菌，适用薄、密度低的物料）60Co－γ射线（同位素辐射灭菌法）杀菌机理：产生游离基,破坏DNA。特点：射线穿透力强、被灭菌物体温度变化小适用范围：一次性医用塑料制品的消毒、食品的消毒-不破坏其营养成分电离辐射灭菌法特点适用于热敏性药物的灭菌；γ射线穿透力强,特别适用于已包装密封的药品消毒灭菌可防二次污染；杀菌作用可靠，广泛适用于固、液、半固体物料。有可能使药效活性降低，使用中注意安全保护。微波是频率在30-300000MHz，波长在0．001～1m左右的电磁波。微波可以杀灭各种微生物，包括细菌繁殖体、真菌、病毒和细菌芽孢、真菌孢子等常用于食物及餐具的消毒、医疗药品及耐热的非金属材料器械的消毒灭菌。3、微波消毒灭菌法4、光照消毒法又称辐射消毒，主要利用紫外线的杀菌作用，使菌体蛋白质发生光解、变性而致细菌死亡。其特点对杆菌杀菌能力强，对球菌较弱，对生长期细菌敏感，对芽孢敏感性差。原理适用方法由于日光具有热、干燥和紫外线的作用有一定的杀菌力常用于床垫毛毯衣服书籍等物品的消毒方法是将物品放在直射阳光下曝晒6h，定时翻动，使物品各面均能受到日光照射。日光暴晒法臭氧消毒法臭氧在常温下为强氧化剂，稳定性极差，易爆炸，主要依靠强大的氧化作用杀菌可杀灭细菌繁殖体、病毒、芽孢、真菌，并可破坏肉毒杆菌毒素。床单位臭氧消毒（三）过滤除菌法指药液通过无菌滤器，除去活的和死的微生物而得到无菌滤液的方法。特点：（1)适用于很不耐热的药物溶液的除菌（2)必须无菌操作（滤球、容器、药液、环境无菌等过程）。杀菌机理：含有微细小孔0.22μm,只允许液体或气体及孔径0.22μm的颗粒通过，细菌不能滤过。不能除病毒、支原体适用范围：血清、毒素、输液、生物制品、抗生素以及空气等的除菌。紫外线灭菌200-300nm，254nm最强用于空气灭菌和表面灭菌，效果与微生物敏感性有关，对酵母菌和霉菌力弱微波灭菌2450MHz，3-6min强热效应，快速高效，适于热不稳定者辐射灭菌γ射线60Co穿透力强不升高温度，设备费用高，辐射能引起一些药物pH值、含量、活性等改变，某些制品不宜选用β射线由电子加速器产生，穿透力弱，灭菌效果差物理灭菌各种方法的比较紫外线灭菌200-300nm，254nm最强用于空气灭菌和表面灭菌，效果与微生物敏感性有关，对酵母菌和霉菌力弱微波灭菌2450MHz，3-6min强热效应，快速高效，适于热不稳定者辐射灭菌γ射线60Co穿透力强不升高温度，设备费用高，辐射能引起一些药物pH值、含量、活性等改变，某些制品不宜选用β射线由电子加速器产生，穿透力弱，灭菌效果差四、化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法是利用化学药物渗透细菌体内，使菌体蛋白凝固变性，干扰细菌酶的活性，抑制细菌代谢和生长或损害细菌膜的结构，改变其渗透性，破坏其生理机能等，从而达到消毒灭菌目的。（一）化学消毒剂的使用原则(1)根据物品的性能及微生物的特性，选择合适的消毒剂。(2)严格掌握消毒剂的有效浓度、消毒时间及使用方法。(3)消毒剂应定期更换，易挥发的消毒剂要加盖，并定期检测，调整其浓度。(4)浸泡前将物品洗净擦干，浸没在消毒液内的物品应注意打开轴节或套盖，管腔内应注满消毒液。(5)在使用前用无菌生理盐水冲净消毒后的物品，避免消毒剂刺激人体组织（二）化学消毒剂的分类高效消毒剂高效消毒剂可杀灭一切微生物，包括芽孢(碘酊、福尔马林等)中效消毒剂中效消毒剂可杀灭细菌繁殖体，不能杀灭芽孢(乙醇、碘伏等)低效消毒剂低效消毒剂可杀灭细菌繁殖体，不能杀灭结核杆菌、亲水性病毒或芽孢(苯扎溴铵、氯己定等)（三）化学消毒剂的使用方法浸泡法侵泡法是将物品洗净、擦干后，浸没在消毒液中进行消毒灭菌的方法