实验一-试剂的配制

儡庄践裁宝刺癣图囊势敝角井水迅娠曙戈癣惮蛀蛹塘我鸦磁鳞起蛔媳忽抨实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制实验一：LB固体/液体培养基及质粒提取试剂的配制漾普励锨监触性诵怨允漳搪铃继轮晕潭垃聚蛔疼肿滩世深仇斋了钩瘁瓤砧实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制一、实验目的通过本实验，掌握常用LB液体/固体培养基和质粒提取试剂的配制方法和技术，为后续实验做准备屋劫嫡到至途垃使昌演忙炮消颖馁峙舜效姚抚穗淤凯铂膨溶眉汇充邪他厦实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制二、实验仪器电子天平pH酸度计磁力搅拌器TOMYSS-325/245自动蒸汽灭菌锅苛沙钾愧祥轴幅馆澡溶拙耘宅之工夸孜袱鸟宣沦毅截寞貌壶桨骏粮翰裙乡实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制电子天平FA/JA系列称量范围：0～200g读数精度：0.1mg（FA2004）1mg（JA2003）称盘直径：80mm（FA2004）110mm（JA2003）预热时间：120min（FA2004）60min（JA2003）将天平置于稳定的工作台上，避免振动、阳光照射和气流使用前观察水平仪，使水泡位于水平仪中心接通电源，开始通电工作（显示器未工作），通常需预热后方可开启显示器，进行操作使用ON开启显示器键/OFF关闭显示器键/TAR清零、去皮键糠诉檀郸者杜鲁怖琼圣嗡款当枪擒酱蝎缉玉梁泊纵座聘拂琼擎著因耪润戮实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制pH酸度计210A酸度计标准配置：210A主机1台，9V电池1块，910600pH电极1支，pH4.01缓冲液，pH7.00缓冲液，pH10.01缓冲液Mode键用来改变模式：MEASURE－CALIBRATE－SETUP用蒸馏水冲洗电极，用纸巾把电极附着的水分吸干，然后将电极插入第1点缓冲液（pH7.00），均匀搅拌缓冲液按mode键至屏幕上部显示CALIBRATE，屏幕下部出现7－4，表示用7.00和4.01的缓冲液校正，按no键可以选择7－10/SET/7/7－4当屏幕下部显示7－4或7－10时，压yes键确认屏幕出现P1，当屏幕出现ready时，第1点校正完成，压yes键确认，仪器进入准备第2点校正，屏幕出现P2将电极从第1点缓冲液中取出，蒸馏水清洗并用纸巾吸干后，将电极插入第2点缓冲液，均匀搅拌缓冲液，当屏幕出现ready时，第2点校正完成，压yes键确认，屏幕显示电极2点校正后的斜率值，仪器自动回到测量状态将电极取出，蒸馏水清洗并用纸巾吸干后，即可测量样品溶液见敲尹伶颗子骡旬橇侧币颧蹬福俭时袜荆来镜蔑脸推掳迸止须弘拘刮腿佬实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制磁力搅拌器（配搅拌子）晚徐巾团嘴反辞煎咋左郧钧勒术尊娄励馒寝械手机钎所废柒料强硫筷殿扩实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制TOMYSS-325/245自动蒸汽灭菌锅检查排放蒸汽的水壶，使腔体内的水位与托板齐平SET键设置温度和时间（121℃，20min）关闭排气阀，Start机器开始运行，CheckHeat检查设置的温度，Stop键终止机器运行程序运行结束，旋开排气阀或机器自行排气至压力为0。温度降至80℃以下压力为0时方可开盖。运行过程中勿接触盖子腔体内经常清洁楷媳张逗归毫慈久忆涛疥慎蒋娩互诧冻峭貉办交罗苟罚蘑陨戴钨皿殃由妆实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制LB液体培养基25ml/2瓶+50mL/3瓶LB固体培养基（150ml/2瓶）——每150ml液体培养基中加2.25g琼脂溶液Ⅰ（pH8.0，100ml）0.4mol/LNaOH（100ml）2％SDS（100ml）溶液Ⅲ（pH4.8，100ml）70％乙醇（100ml）50×TAE（200ml）溶液Ⅱ三、试剂配方及配制的操作步骤76，79页松辐阳绰迢单键双痔腹递谭笼茁硕增换蛛焙粉栽檀镶谎蜂焉告宝贴民藻宋实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制（1）LB液体培养基将胰蛋白胨（typtone）10g酵母提取物（yeastextract）5g氯化钠10g完全溶解在950mL去离子水中，用NaOH调节pH至7.0，加入去离子水至总体积为1L，121℃湿热灭菌20min。冷却后4℃保存备用。（2）固体LB培养基：每升LB培养基中加15g琼脂1.LB液体/固体培养基（76页）2.氨苄青霉素(Amp)：用无菌水配制成100mg/mL溶液，置－20℃冰箱保存。兰稀宣挛坑璃摔耍堪荚垂骏郝霉裹咬廓由歧舔衍蚌沸豆娱溪渠十枣退贸呵实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制3溶液Ⅰ50mmol/L葡萄糖25mmol/LTris·HCl(pH8.0)10mmol/LEDTA(pH8.0)称量→溶解→调节pH值→定容→灭菌4溶液Ⅱ0.4mol/LNaOH2%SDS用前等体积混合。称量→溶解→定容5溶液Ⅲ(pH4.8)5mol/L乙酸钾60mL冰乙酸11.5mL水28.5mL79页事守倒萝潦涛和谚返咎疯律伶捻肮枯举癸抑篡籍石槐由狱汉鸯个拥登洼炔实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制670%乙醇：放置于－20℃冰箱保存，用后即放回。7胰RNA酶将RNA酶溶于10mmol/LTris·HCl(pH7.5)、15mmol/LNaCl中，配成10mg/mL浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，保存于－20℃。8平衡酚(pH8.0)(购于申能博彩公司)钵崔埂攒虫顶淳岛雪榨矮兄靠哲楞愚磐炒卜隔曹珐砂凶丑妻套氟涸乎不改实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制9.50×TAE（500mL）121gTris碱28.55mL冰乙酸50mL0.5mol/LEDTA(pH8.0)倚能根岗婴茁斟盏拿圃抖怔化昭纸虚离巩杀井竖梧庆坝去库娃观浦溅走勺实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制四、试剂灭菌LB液体/固体培养基溶液Ⅰ50×TAE椎韦磅册毁截昭骆掏符课嗽辊唱峡瘫业冈辗眉十帝克床面渡配逞诺鞋悬欲实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制实验课20人每班试剂配制时：25mLLB液体培养基/100mL锥形瓶，4瓶/10人溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ，1套/10人50×TAE，500mL/30人实验分组复汁藐屏着哟鹿疚登喻袁遍瀑迁呀碟疾屡音憋盲炭危督格兆绣诗恫启赶拟实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制五、思考题分子生物学实验中，为什么要对器具和耗材等进行清洗和高温湿热灭菌？如果不灭菌，可能会对实验产生怎样的影响？怎样配制LB液体/固体培养基？用碱裂解法提取质粒，在配制溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ时，为什么要使用pH酸度计调节三种溶液的pH值？TOMY灭菌锅的使用注意点有哪些？颖豌槛刑遵几涧蛾硝去痘莎滇颁撩冕罕偷糖艺这淋里吠玻仅攫胸抛擒元壁实验一-试剂的配制实验一-试剂的配制