实验一还原性糖脂肪蛋白质的鉴定

一、实验原理可溶性还原糖＋蛋白质＋脂肪＋斐林试剂双缩脲试剂砖红色沉淀苏丹Ⅲ染液苏丹Ⅳ染液橘黄色红色紫色颜色反应二、几种重要的试剂斐林试剂甲液（0.1g/mL的NaOH溶液）乙液（0.05g/mL的CuSO4溶液）现配现用混合均匀双缩脲试剂A液（0.1g/mL的NaOH溶液）B液（0.01g/mL的CuSO4溶液）现配现用先加A液再加B液苏丹Ⅲ（Ⅳ）染液：用来鉴定脂肪的存在四、实验方法与步骤1、可溶性还原糖的鉴定(1)制备组织样液：苹果洗净、去皮、切块→取5g加少许石英砂研磨→加5mL水再研磨→漏斗垫纱布后过滤，得到样液(2)鉴定样液：取2mL样液于试管中→注入2mL刚配制的斐林试剂，振荡混合（淡蓝色）→水浴煮沸2min左右，观察溶液颜色变化（先变为棕色，再变为砖红色）制备生物组织样液取材、研磨、过滤取样取2ml组织样液注入试管注入试管中注入试剂向试管中注入2ml刚配制的斐林试剂加热和观察(将4—5滴乙液滴入2ml甲液中)2、脂肪的鉴定(1)切片制作(2)染色：在花生子叶切片上滴2～3滴苏丹Ⅲ染液→2～3min中后，吸去染液→滴体积分数为50％的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精，再滴1～2滴蒸馏水，盖上盖玻片(3)镜检鉴定：在低倍物镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处，移至视野中央→转动转换器，换用高倍物镜观察（脂肪滴:橘黄色的圆形小颗粒）制备实验材料去种皮、削平面、切片染色滴2—3滴苏丹Ⅲ染液染色2—3分钟去浮色在玻片上滴1—2滴体积分数为50%酒精溶液，洗去浮色制作临时装片放在显微镜下观察（先低倍后高倍）2、蛋白质的鉴定(1)制备组织样液：浸泡黄豆1～2d→去皮、切成薄片，加少许石英砂及5mL水研磨→漏斗垫纱布后过滤，得到样液（用蛋清要稀释10倍以上，否则实验后黏住试管壁不易洗净）(2)鉴定样液：取2mL样液于试管Ⅰ中→加入2mL双缩脲试剂A液摇匀（造成一个碱性环境）→加入双缩脲试剂B液3～4滴，摇匀，注意颜色变化（溶液变为紫色）。另取清水于试管Ⅱ中→加入摇匀→颜色变化，作为。2mL（A液、B液）无对照制备生物组织样液取材研磨过滤或制备蛋清液注入组织样液取一支试管注入黄豆组织液（或蛋清液）2ml注入试剂A加入2ml双缩尿试剂A加入双缩尿试剂B观察颜色变化五、注意事项[1]斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂甲液（0.1g/ml的NaOH溶液）和乙液（0.05g/ml的硫酸铜溶液）分别配制、储存，使用时再临时配制，将4—5滴乙液滴入2ml甲液中，配完后立即使用。[2]双缩尿试剂的使用，应先加A（0.1g/ml的NaOH溶液），造成碱性的反应环境，再加B液（0.01g/ml的硫酸铜溶液）。[5]在鉴定脂肪的实验中，若用花生作实验材料，必须提前浸泡3—4个小时，浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成型，染色时间不易过长。[4]在蛋白质的鉴定试验中，若用蛋白质作实验材料，必须稀释，以免实验后粘住试管，不易洗刷。[3]在鉴定可溶性还原糖的实验中，对试管中的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的熔液冲出试管，造成烫伤。课堂练习1、用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液颜色的变化过程是（）A、无色→砖红色（沉淀）B、浅蓝色→砖红色（沉淀）C、浅蓝色→蓝色→砖红色（沉淀）D、浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）D2、在用双缩尿试剂鉴定蛋白质实验时，正确的操作是（）A、2ml蛋白质稀释液先加0.1g/ml的NaOH，再加3—4滴0.01g/mlCuSO4溶液。B、2ml蛋白质稀释液先加3—4滴0.01g/mlCuSO4溶液，再加0.1g/ml的NaOHC、2ml蛋白质稀释液，同时加3—4滴0.01g/mlCuSO4和0.1g/ml的NaOH混合液。D、在NaOH和CuSO4混合液中加入蛋白质稀释液。A3、用苏丹Ⅲ染液对脂肪组织进行染色时，可用来冲洗浮色的药品是（）A、HCI；B、H2O；C、50%的酒精；D、无水酒精。4、下列哪个实验用到显微镜（）A、可溶性还原糖的鉴定；B、蛋白质的鉴定；C、脂肪的鉴定；D、淀粉的鉴定。CC5、下列哪种试剂在使用过程中，必须经过加热（）A、斐林试剂鉴定可溶性还原糖的过程中；B、苏丹Ⅲ在鉴定动物组织中的脂肪时；C、双缩尿试剂鉴定蛋白质时；D、碘化钾溶液鉴定淀粉时。6、下列糖中能与斐林试剂反应产生砖红色沉淀的是（）A、淀粉；B、果糖；C、蔗糖；D、纤维素。AB在蛋白质鉴定实验中，必须先加A液再加B液的原因是:为什么加入3—4滴B液而不能过量？在碱性溶液中，蛋白质容易与Cu2+发生紫色反应，否则就容易生成蓝色Cu(OH)2沉淀对实验现象有遮蔽作用加入过量的双缩尿试剂B液，CuSO4在碱性溶液中生成大量的蓝色Cu(OH)2沉淀会遮蔽所产生的紫色。