分枝杆菌

1/22/2020分枝杆菌属病原生物学与免疫学教研室（Mycobacterium）1/22/2020知识点要求掌握结核分枝杆菌的生物学特性、致病性、免疫性、微生物学检查法。熟悉结核菌素实验的方法、结果及意义。结核杆菌的防治原则。了解麻风分枝杆菌和非结核分枝杆菌。1/22/2020分枝杆菌属(Mycobacterium):是一类细长略弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而得名。特性：a.胞壁中含有大量脂质。b.无鞭毛、无芽胞、无内外毒素和侵袭性酶类。c.致病性和非致病性两大类，引起人类疾病的主要有结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、麻风分枝杆菌。d.感染多为慢性过程，并伴有肉芽肿，有破坏性的组织病变。概述1/22/2020第一节结核分枝杆菌结核杆菌引起结核病。对人类致病的有人型结核杆菌和牛型结核杆菌。结核病是一种古老的疾病。从新石器时代人类的遗骨和古代木乃伊的骨关节的病理组织中，已发现人类在史前时代已患过结核病。1/22/2020中国医史中，结核病最早记载于《内经》并形容为“虚痨”之症。古代文献有提及肺痨为痨虫于肺所致，但未能确定致病的成因。德国科学家RobertKoch在1882年发现了一种特殊的微生物——结核杆菌，结核病的致病细菌。他还证明了这种微生物是可以在培养基里培养出来的。这一发现使得结核的实验研究成为现实。结核病及结核分枝杆菌的发现1/22/2020自发现MTB以来，全球约有2亿人死于TB，且疫情发展日趋严重。WHO已将TB作为重点控制的传染病之一，并于1995年起将每年的3月24日定为“世界防治结核病日”，以提醒公众加深对TB的认识。世界结核病防治现状1/22/2020据WHO预计，目前全球约20亿人已感染了MTB。全球现有TB病人2000万。大约三分之一的世界人口有潜伏性结核。TB的死亡将达历史最高水平，全球每天有8000人死于TB，每年约300万人死于TB。特别是在发展中国家，TB的形势尤其严峻，全球98％的TB死亡和95％的新发TB都是在发展中国家。世界结核病防治现状结核病是仅次于艾滋病毒/艾滋病之后，在全世界由单一传染性病原体引起的最大杀手。1/22/2020我国结核病流行现状中国是全球22个结核病高负担国家之一，结核病人数居世界第二位，仅次于印度,占全球病例数的17%。我国治愈率较高(96%)，但发现率较低(27%)。2005年我国实际报告肺结核患者1259308名，因结核病死亡人数为6713人，两者均居全部报告传染病之首，且耐药趋势严重，严重地制约着社会经济的发展。1/22/2020我国属于全球22个TB高负担国家之一，TB的患病人数在世界各国中居于第2位。我国TB的流行具有“五多一高”的特点：MTB感染人数多。现患肺TB病人多。TB死亡人数多。耐药TB人多。农村TB人多。传染性肺TB患者疫情居高不下。我国结核病流行现状1/22/20202012年全国法定乙类传染病发病构成1/22/20202012年全国法定乙类传染病死亡构成1/22/202015岁到35岁的青少年是结核病的高发年龄。潜伏期4-8周。80%的结核病发生在肺部，其他部位（颈淋巴、脑膜、腹膜、肠、皮肤、骨骼）也可继发感染。什么是结核病？结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病。中国医史中，结核病最早记载于《内经》并形容为“虚痨”之症。简称痨病。结核菌可能侵入人体全身各种器官，但主要侵犯肺脏，称为肺结核病。1/22/2020一、生物学性状1.***形态与染色结核杆菌细长略弯曲，端极钝园，大小约1～4×0.4μm，呈单个或分枝状排列，无鞭毛、无芽胞。抗酸染色（Ziehl-Neelsen）显示痰标本中染为红色的特异性抗酸细菌。1/22/20201.形态及染色染色：主要采用抗酸染色染色性：阳性结果：结核杆菌染成红色其他菌和背景呈蓝色1/22/20201.形态及染色组织标本中人工培养后1/22/20201.形态及染色荧光染色扫描电镜照片1/22/20201.形态及染色Ｌ型细菌1/22/20201.形态及染色痰标本消化前痰标本消化后1/22/20202.培养特性专性需氧菌***营养要求高：在含有蛋黄、马铃薯、甘油和天门冬酰胺等的固体培养基上才能生长（酸性罗氏培养基）。最适pH为6.5~6.8，最适温度为37℃。1/22/20202.培养特性馋懒丑营养条件高：蛋黄、马铃薯、甘油——酸性罗氏培养基；专性需氧；最适pH为6.5~6.8；适温度为37℃生长缓慢：18~24h繁殖一代，接种后3～4周才出现肉眼可见的菌落。菌落粗糙、结节、边缘不规则，似菜花状1/22/2020菌落1/22/20203.生化反应结核分枝杆菌不发酵糖类。热触酶试验对区别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌有重要意义。1/22/20204.***主要菌体成分及其作用脂质：含量与毒力相关。蛋白质：结核菌素核酸：刺激机体产生特异性细胞免疫荚膜：保护作用。1/22/20204.***主要菌体成分及其作用结核分枝杆菌无内毒素，也不产生外毒素和侵袭性酶类，其致病作用主要靠菌体成分，特别是胞壁中所含的大量脂质。脂质含量与结核分枝杆菌的毒力呈平行关系，含量愈高毒力愈强。1/22/2020（1）脂质（Lipid）：占菌体干重20-40%，占胞壁干重60%。①磷脂：形成结核结节和干酪样坏死。②脂肪酸：与分枝杆菌抗酸性有关。破坏线粒体膜，抑制中性粒细胞游走和吞噬，引起慢性肉芽肿。促使结核杆菌在液体培养基中黏成索状，故称索状因子。③蜡质D：能引起迟发型超敏反应，并具有佐剂作用。④硫酸脑苷脂和硫酸多酰基化海藻糖：能抑制吞噬细胞中的吞噬体与溶酶体融合，使结核分枝杆菌在细胞内存活。4.***主要菌体成分及其作用1/22/2020（2）蛋白质结核菌素与蜡质D结合，能引起较强的迟发型超敏反应。（3）多糖主要有半乳糖、甘露醇、阿拉伯糖。使中性粒细胞增多，引起局部病灶细胞浸润。（4）核酸能刺激机体产生特异性细胞免疫。（5）荚膜①与吞噬细胞的CR3结合，有助于对宿主细胞的粘附、入侵；②荚膜中多种酶可降解宿主的大分子物质，为自身提供营养；③防止有害物质进入细菌。4.***主要菌体成分及其作用1/22/20205.***抵抗力较强耐干燥耐酸碱易产生耐药性1/22/20205.***抵抗力紫外线弱点湿热脂溶性消毒剂1/22/20205.***变异性卡介苗：（BacillusCalmette-Guérin，BCG，1908）牛型变异株，用于制备减毒活疫苗，通过人工自动免疫接种预防结核病。L型菌耐药菌株1/22/2020要点回顾抗酸染色阳性。罗氏培养基，生长缓慢。胞壁中的脂质是主要致病物质抵抗力：较强。抗酸碱，抗干燥。耐药性变异常见1/22/2020二、致病性与免疫性（一）肺部感染1.原发感染多见于儿童。随飞沫和尘埃通过呼吸道进入肺泡。原发综合征：极少数免疫力低下者经淋巴、血流扩散至全身，导致全身粟粒性结核或结核性脑膜炎。肺部原发病灶、淋巴管炎和肺门淋巴结结核1/22/20202.原发后感染多见于成年人。多为内源性感染，极少由外源性感染所致。继发感染的特点是病灶局限，一般不累及邻近的淋巴结，主要表现为慢性肉芽肿性炎症，形成结核结节，发生纤维化或干酪样坏死。病变常发生在肺尖部位1/22/2020（二）肺外感染免疫力低下患者常见于脑、肾、骨、关节、生殖系统；少数形成全身粟粒性结核或播散性结核。1/22/2020（二）肺外感染骨结核1/22/2020（二）肺外感染脑结核1/22/2020（二）肺外感染淋巴结核1/22/2020肺结核病人主要临床表现？咳嗽、咳痰咯血发热、胸痛、盗汗典型的全身症状有疲劳、食欲减退、消瘦、低烧、盗汗、月经不调等。少数急性发展的肺结核可有高热。1/22/20201/22/2020免疫性与超敏反应1.免疫性抗结核免疫力的持久性依赖于结核分枝杆菌在机体内的存活，一旦体内结核分枝杆菌消亡，抗结核免疫力也随之消失，这种免疫称为有菌免疫或传染性免疫。***抗结核免疫主要是细胞免疫，包括致敏T淋巴细胞和Mφ。1/22/20202.超敏反应机体获得对结核杆菌免疫力的同时，结核分枝杆菌的蛋白质与蜡质D共同刺激T淋巴细胞，形成迟发型超敏反应状态。体内致敏的T淋巴细胞再次遇到结核分枝杆菌时，即释放出淋巴因子，引起强烈的迟发型超敏反应，形成以单核细胞浸润为主的炎症反应，容易发生干酷样坏死，甚至液化形成空洞。1/22/20203.**结核菌素试验将一定量结核菌素注入皮内，如受试者曾感染结核杆菌，则在注射部位出现迟发型超敏反应炎症，判为阳性，未感染者则为阴性。此法可用于检测可疑患者曾否感染过结核菌、接种卡介苗后是否阳转以及检测机体细胞免疫功能。1/22/2020结核菌素试剂有两种：旧结核菌素（oldtuberculin，OT）：含结核分枝杆菌的甘油肉汤培养物加热过滤液，主要成分是结核蛋白。纯蛋白衍生物（purifiedproteinderivative,PPD）：OT经三氯醋酸沉淀后的纯化物。1/22/2020结核菌素试验方法：目前多用PPD法。取PPD-C和BCG-PPD各5单位分别注入两前臂皮内，48～72h后，红肿硬结小于5mm者为阴性反应；超过5mm者为阳性；≥15mm为强阳性。1/22/2020**结果分析：阳性反应表明机体已感染过结核枝杆菌或卡介苗接种成功。强阳性反应则表明可能有活动性结核病，尤其是婴儿。阴性反应表明未感染过结核分枝杆菌或未接种过卡介苗。原发感染早期、正患严重结核病或其他严重疾病致细胞免疫功能低下者（如用过免疫抑制者）也可能出现阴性反应。1/22/2020**应用范围①诊断婴幼儿的结核病；②测定接种卡介苗后免疫效果；③在未接种卡介苗的人群作结核分枝杆菌感染的流行病学调查；④用于测定肿瘤患者的细胞免疫功能。1/22/2020***结核病是如何传播的？呼吸道传播是本病传染的主要方式。其次:消化道、皮肤和子宫。1/22/2020***结核病是如何传播的？传统的观点偏重于尘埃带菌传染，即肺结核排菌病人随地吐痰，干燥后细菌随尘土飞扬，被他人吸入而引起感染发病。因此过去在结核病防治措施中，特别强调肺结核病人痰的消毒。现代研究关于呼吸道传播的机理认为，排菌病人平时大声谈笑、唱歌、咳嗽、打喷嚏把带传染性的唾沫飞沫散播于空气中，可以直接通过呼吸道进入肺泡引起感染。此外，也强调病人要和健康人隔离，可分床或分头睡，注意病人的食具消毒，防止消化道传染。1/22/2020***结核病是如何传播的？消化道对结核菌有较大的抵抗力。消化道结核多数是由于饮用未经煮沸的牛奶引起。1/22/2020***结核病是如何传播的？由于肺脏与外界相通，在肺结核病发展、恶化或形成空洞时，病变中的结核菌大量繁殖，通过支气管排出体外，造成结核菌传播。一个未经治疗的传染性肺结核病人一年中可能传染10-15名健康易感者。1/22/2020三、微生物学检查法1.***直接涂片染色——抗酸染色法咳痰、无菌采取的脑脊液、导尿或中段尿。2.***分离培养——罗氏培养基3.动物试验：豚鼠或地鼠4.结核分枝杆菌核酸及抗体检测：PCR、ELISA肺结核病的早期诊断若能早期发现肺结核，既可早期治疗，彻底治愈，又可减少社会传染源。结核病的临床症状主要有：一咳二血三发热，消瘦、盗汗也常见肺结核病的早期诊断胸部X线检查是诊断肺结核的重要方法之一，尤其胸部透视简便易行。1/22/2020四、防治原则预防：接种卡介苗卡介苗接种的主要对象是新生婴幼儿。卡介苗接种被称为“出生第一针”。1/22/2020四、防治原则结核病的治疗原则早期联合适量规范全程1/22/2020DOTSWorldTBDay24March2001DOTS-TBcureforAll1/22/2020DOTSDOTS：DirectlyObservedTreatmentShort-course.中文称为“全程监督短程化疗”，是当今全世界公认的防治结核病最有效的方法。1/22/2020DOTSStopTB,FightP