9 2013 种子活力测定

实验九种子生活力的快速鉴定◇种子生活力是指种子发芽、生长的潜在能力或种胚具有的生活能力。◇了解种子有无生活力需测定种子的发芽率，但所需时间较长，且无法预知是否处在深休眠状态。◇利用化学反应、生理反应与物理方法的快速鉴定法，短时间获得种子是否具有生活力的结果。◇本实验学习几种种子生活力的快速鉴定方法。实验目的TTC法红墨水法荧光观察法检测种子活力实验1TTC（氯化三苯基四氮唑）法实验原理•有生活力的种子胚部，在呼吸作用过程中有氧化还原反应•当TTC渗入种胚的活细胞内，作为氢受体被脱氢辅酶（NADH·H+或NADPH·H+）上的氢还原TTC(无色)TTF(红色)氯化三苯基四氮唑三苯甲腙•无生活力的种子没有呼吸代谢活动，TTC不被还原，因而胚部不着色，来判断种子有无生活力。氧化还原反应实验材料：小麦种子实验试剂：0.5%TTC溶液实验用具：培养皿，单面刀片，恒温箱实验步骤1•浸种：待测种子在280C温箱中温水（30-350C）浸种2-6小时，以增强种胚的呼吸强度，使显色迅速。（已做）胚果毛腹沟小麦籽粒纵切面图（示胚的结构）A.籽粒纵切面；B.胚的纵切面1.胚；2.胚乳；3.果皮与种皮的愈合层；4.糊粉层；5.淀粉贮藏细胞；6.盾片；7.胚芽鞘；8.幼叶；9.胚芽生长点；10.胚轴；11.外胚叶；12.胚根；13.胚根鞘实验步骤2(显色)1.取吸涨的小麦种子30粒，每粒沿胚的中心线纵切（使胚部一分为二），分成二份，分别放在两个培养皿中；2.取其中一个培养皿（30个半粒），加入0.5%TTC溶液浸没种子，置于35℃温箱中30min。实验步骤33.倒去TTC溶液，用自来水冲洗种子一次，肉眼观察胚部着色情况；4.胚部呈玫瑰红色的种子是有生活力的种子；胚部呈淡红色的种子，生活力较弱，有的可发芽；胚部未着色的种子，不能发芽。5.统计结果，以百分率表示。TTC法注意事项1.将胚一分为二；2.显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中；3.显色温度25-350C为宜；4.显色结束后，要立即观察，因TTC光下久放会变色。实验2红墨水染色法•有生活力的种子胚细胞的原生质膜具有选择透性，有选择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不染色；•丧失生活力的种子，胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收能力，染料可以自由进出细胞使胚部染色；•根据胚部是否被染色来鉴定种子有无生活力。实验原理实验材料：小麦种子实验试剂：5％红墨水实验用具：同TTC法。实验步骤1（浸种）•浸种：同TTC法。实验步骤2（染色）1.取另外一个培养皿中30个半粒小麦种子；2.加入红墨水溶液染色10min。实验步骤33.10min后，倾去染色液并冲洗，至冲洗液无色为止，检查种子染色情况；4.胚根、胚芽、子叶都不着色或仅胚根、胚芽尖端着色而子叶大部分不着色的是活种子；以上三部分全部或大部分着色的是死种子；5.统计结果，以百分率表示。注意事项•染料的浓度要适当，染色时间不能太长，否则不易区别被染色与否。•染色法测定种子生活力，适用于禾谷类、豆类、麻类、瓜类、十字花科、棉花、果树等植物种子。TTC法红墨水法实验3荧光法（直接观察法）•植物种子中存在着许多能够在紫外线照射下产生荧光的物质，如核酸、蛋白质、黄酮类、酚类、香豆素等物质；有些种子（尤其是禾本科、松柏科、某些蔷薇科）•在衰老过程中，这些荧光物质结构和成分往往会发生变化，导致荧光丧失或荧光颜色改变；（活种子有蓝紫色荧光，死种子无荧光或荧光呈黄褐色）•具此特点的种子可用“荧光观察法”鉴定种子生活力。实验原理有些种子（尤其是十字花科植物）•衰老死亡时，荧光物质性质虽未改变，但由于细胞原生质透性加大，浸种后种子中的荧光物质很容易外渗；•可观察浸种后衰老死亡种子漏出“荧光团”的数量,确定种子生活力。实验材料：小麦干种子实验用具：单面刀片，培养皿，紫外分析仪实验步骤1.取小麦干种子15粒，用刀片沿胚的中心线将种子纵切成两半，放在培养皿中，使切面向上，放在紫外分析仪下照射并进行观察；2.有生活力的种子产生明亮的蓝色、蓝紫色或蓝绿色的荧光；死种子多半是黄色、褐色以至暗淡无光，并带有斑点；3.记录有生活力种子及丧失生活力种子的数量，计算百分率。紫外分析仪放入培养皿观察窗口30粒湿种子15粒干种子30个半粒TTC法红墨水法荧光观察30个半粒30个半粒30min恒温箱10min切面向上不同方法测定种子生活力结果方法供试粒数有生活力种子粒数无生活力种子粒数有生活力种子占供试粒数的％TTC30红墨水30荧光30思考题1、还有哪些方法、生理过程、生化原理可用来快速鉴定种子的生活力？2、试比较这几种方法的测定结果是否相同？为什么？每组清洗6套培养皿（上周实验用的）6支试管洗净后用蒸馏水冲洗下次实验（5月28日）实验十细胞（质膜）透性测定