实验二、蛋白质沉淀、变性反应

1、了解使蛋白质胶体溶液稳定的因素。2、了解蛋白质的可逆沉淀反应和不可逆沉淀反应。3、掌握蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及它们的相互关系。一、实验目的维持蛋白质胶体溶液稳定的因素：水化膜同种电荷外面的亲水基团结合一层水，形成水化膜同种蛋白质表面带有相同电荷二、实验原理破坏水化膜中和电荷使蛋白质沉淀的原理聚集体的直径＞100nm即为不稳定的粗分散系（1）盐析（2）有机试剂（3）重金属盐（4）有机酸（5）加热…………使蛋白质沉淀的方法蛋白质沉淀变性的常见方法常用方法原理常用试剂实用盐析破坏蛋白质胶体溶液的水化层和电荷层(NH4)2S04、Na2S04、Na3P04、NaCl、MgS04常用此法来分离和纯化蛋白质。有机试剂盐析脱水作用；降低水的介电常数和蛋白质溶解度；蛋白质析出乙醇、丙酮、甲醇低温乙醇提取血液中的蛋白质组分强酸、强碱沉淀破坏蛋白质分子结构发生蛋白质变性盐酸,硫酸,硝酸、氢氧化钠灭活病毒加热变性鸡蛋、肉类等加工重金属盐沉淀变性；生成不溶性盐Ag+，Hg2+，Cu2+和Pb2+临床上常用蛋清或牛乳解救误服重金属盐的病人有机酸沉淀生成不溶性盐苦味酸、鞣酸、三氯醋酸、磺基水杨酸等生物碱试剂沉淀蛋白滤液等蛋白质沉淀分类（1）可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构并未发生显著变化，基本保持原有的性质，沉淀因素除去后，能溶于原来的溶剂中。例如：盐析、乙醇低温短时作用，可用于蛋白质提纯。（2）不可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，不再溶于原溶剂。例如：加热、有机酸反应。蛋白质分子表面水化膜同种电荷稳定的亲水胶脱水，失去电荷沉淀反应可逆沉淀反应（不变性沉淀反应）如：盐析作用…不可逆沉淀反应（变性沉淀反应）如：重金属盐沉淀作用…•蛋白质溶液：取10mL鲜鸡蛋清，用蒸馏水稀释至200ml，搅拌后用2-3层纱布过滤，新鲜配制。加入少量氯化钠可加速溶解球蛋白。•试剂：饱和硫酸铵溶液，硫酸铵粉，95%乙醇，2%硝酸银，0.5%乙酸铅，1%硫酸铜，10%三氯乙酸溶液，5%磺基水杨酸。1.试剂三、实验仪器和试剂漏斗,滤纸,吸管,试管及试管架,量筒、离心机等。2.仪器1.蛋白质的可逆反应——盐析步骤现象解释结论取试管1，加入3mL蛋白质氯化钠溶液和等量的饱和硫酸铵溶液，混匀，静置10分钟观察有无蛋白质（球蛋白）的沉淀倒出上清液于试管2，取试管1中沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解往试管2中，加入硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解，直至饱和观察有无沉淀（清蛋白）析出静置，弃去上清液，取出部分清蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解四、实验操作2.蛋白质的可逆反应——乙醇步骤现象解释结论取试管1，加入1mL蛋白质氯化钠溶液和21mL95%乙醇观察有无蛋白质的沉淀静置，弃去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解试管操作现象操作现象试管1①1mL蛋白质溶液②3-4滴2%硝酸银溶液③过量的硝酸银观察有无蛋白质的沉淀弃去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解试管2①1mL蛋白质溶液②1-3滴0.5%乙酸铅③过量的乙酸铅观察有无蛋白质的沉淀弃去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解试管3①1mL蛋白质溶液②3-4滴1%硫酸铜③过量的硫酸铜观察有无蛋白质的沉淀弃去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解3.蛋白质的不可逆反应——重金属盐（3支试管）试管操作现象操作现象试管1①1mL蛋白质溶液②3滴10%三氯乙酸溶液观察有无蛋白质的沉淀弃去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解试管2①1mL蛋白质溶液②3滴5%磺基水杨酸观察有无蛋白质的沉淀弃去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解4.蛋白质的不可逆反应——有机酸（2支试管）五、结果与分析列出表格，记录相应的实验现象并对实验现象进行分析！六、实验结论哪些反应使蛋白可逆沉淀？哪些反应使蛋白不可逆沉淀？七、思考题教材p199思考题？举例说明蛋白质变性和沉淀之间的关系？