姜黄素对H202损伤HK-2细胞的修改

1姜黄素对H202损伤的HK-2细胞的保护作用导师纪玉莲硕士洪汉利2研究背景•急性肾功能衰竭是临床常见的综合征,其死亡率一直居高不下。•各种病因导致的ARF均有肾小管上皮细胞,包括近端小管(HK-2细胞)等受到严重受损或死亡的显著特点。•A•越来越多的资料表明,肾小管上皮细胞过度凋亡在ARF的发病机制中起了重要作用。3研究背景•近年来的研究证明，在肾缺血或中毒性ARF中,细胞凋亡明显增加。•肾缺血与缺血后再灌注均可使氧自由基与活性氧增多,大量氧自由基生成又是造成缺血再灌注损伤的重要介质。45研究背景•各种氧化剂(如过氧化氢)可以直接诱导细胞凋亡。•a•抑制aSOD的活性也可以诱导细胞凋亡。•a•使用抗氧化剂(如:VitE等)可以阻断氧化应激诱导的细胞凋亡。6研究背景•姜黄素(Curcumin,Cur)是从姜黄中提取的酚性色素,为姜黄的主要有效成分,体内外实验证明它具有抗氧化作用。•A•Rajakrishnan等发现Cur可通过抗氧化作用而对乙醇诱导的脑细胞损伤具有神经保护作用。A•A•Cur可否通过抗氧化作用而对H2O2诱导的HK-2细胞损伤具有保护作用尚未见报导。SujataMK,etalBiophysChem,1999;80(2)RajakrishnanV,etal;PhytotherRes,19997研究目的•探讨姜黄素对H2O2诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响8研究内容•探讨H2O2诱导HK-2细胞凋亡的诱导作用。•姜黄素对HK-2细胞凋亡的保护作用9第一部分H2O2对HK-2细胞的凋亡诱导作用实验方法:不同浓度H2O2与HK-2细胞共同培养,观察凋亡率H2O220umol/L100umol/L200umol/L400umol/L1.电镜观察细胞形态学变化.2.MTT(甲氮甲唑蓝)法检测细胞增殖状况3.碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡.4.罗丹明123(RH123)染色FCM检测细胞线粒体膜电位.5.DHR染色FCM检测细胞内活性氧(ROS)的含量.6.荧光测定免疫吸附法(FIENT)测定Caspase3活性.11预期结果•H2O2有诱导HK-2细胞凋亡的作用,并且呈剂量依赖关系。12第二部分姜黄素对H2O2损伤的HK-2细胞的保护作用13实验方法:以H2O2损伤HK-2细胞为模型研究姜黄素对HK-2细胞的保护作用技术路线空白对照姜黄素与HK-2细胞培养组姜黄素与模型组20umol/L组100Umol/L组40umol/L组100umol/LH2O2组200umol/LH2O220umol/L组100umol/L组40umol/L组20umol/L组100umol/L组40umol/L组400umol/lH2O220Umol/L组100umol/L40umol/L检测指标:1.电镜观察细胞形态学变化2.测定Caspase活性3.检测细胞线粒体膜电位4.测定细胞内ROS.5.检测Bcl-2表达6.观察细胞凋亡程度14预期结果姜黄素对H2O2诱导凋亡的HK-2细胞有保护作用15可行性分析16