03药物的杂质检查

第三章药物的杂质检查•1、杂质与药物纯度的评价•2、杂质的检测方法•3、一般性杂质检测1-1、什么是杂质应把药物的性状、理化常数、杂质检查、含量测定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。药物的纯度检查也称为杂质检查。药物的杂质：药物中存在的无治疗作用，影响药物的疗效和稳定性，甚至对人体健康有害的物质，称为杂质。1-2、杂质的来源与分类如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。1.一般杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。有关物质：指药物中可能存在的原料、中间体、副产物、异构体、聚合体和降解产物等与药物结构相似或相关的一类物质的总称。2.特殊杂质：按理化性质有机杂质无机杂质残留溶剂按其来源工艺杂质（中间体、副产物，未完全反应的原料及试剂）降解产物从反应物及试剂混入的杂质药物的纯度与化学试剂的纯度药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格。化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯。1-3、杂质限量通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示《药典》中规定的杂质检查均为限量（或限度）检查（Limittest）杂质限量指药物中允许杂质存在的最大量二、药物的杂质检查法1.对照法限量检查法（LimitTest）系指取限度量的待检杂质的对照物质配成对照液，另取一定量供试品配成供试品溶液，在相同条件下处理，比较反应结果（比色或比浊）。特点：不需知道杂质的准确含量药典对色氨酸杂质检查的规定自身对照法高低浓度对照法醋酸甲地孕酮杂质限度为，单个杂质：1/50X1/2=1/100所有杂质：1/50X3/4=3/2002.比较法含量测定法：测定杂质的绝对含量特点：准确测定杂质的量，需要对照品3.灵敏度法在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。特点：不需对照品三、杂质限量的计算供试品量允许杂质存在的最大量杂质限量%100ScVL%100供试品量标准溶液浓度标准溶液体积杂质限量6ppm10ScVL例色氨酸；教材P101，例3-1~3-4供试品溶液体积50ml标准NaCl浓度1ml相当于10mg的氯0.02%100%0.25105100%ScVL5计算色氨酸中氯的限量1-4、杂质研究规范（教材P102，自学）•（一）有机杂质的化学名称作为项目名称•（二）杂质检查项目的确定•（三）杂质限度的确定（不是越低越好）•（四）杂质检查方法的选择与验证2、杂质的检测方法•1、化学方法•2、色谱法–薄层色谱：P106~P107，示例3-8、10、12、13–HPLC：P108~P110，示例3-16、18等•杂志对照品法、加（不加）校正因子的主成份自身对照法、面积归一化法。–GC：类似于HPLC•3、光谱法–可见-紫外分析：（教材P111，示例3-21）–红外分析：区别不同的晶型。•4、热分析法220260300nm肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线HOHOOCCH2NHCH3HOHOOHCHCH2NHCH3λmax310nm可见-紫外分析肾上腺素中的肾上腺酮热分析法物理性质技术名称简称质量热重分析法TGA温度差热分析法DTA焓差示扫描量热法DSC1.定义：在程序控温条件下，测定物质的理化性质与温度之间关系的一类技术。2.原理：物质在温度改变过程中会发生融化、升华、相转变、晶型改变、脱水、脱氢或分解等反应，从而造成理化性质（温度、能量或质量）的改变。3.分类：该法研究其受热过程所发生的晶型转变、熔融、升华、吸附等物理变化和脱水、热分解、氧化还原等化学变化，可对物质进行物理常数（如熔点和沸点）的确定，可用于鉴别和纯度检查。1.热重法（TGA）热重法是在程序控制温度下，测量物质重量与温度关系的一种技术。记录重量变化对温度的关系曲线称为热重曲线（TG曲线）。热重曲线的纵坐标为质量(m)，横坐标为温度(T)或时间(t)。本法适用于药物结晶水的测定和贵重药物或在空气中极易氧化药物的干燥失重分析。（例：硫酸铜脱去结晶水，教材P113~114。）特点：准确测量物质的质量变化及变化速度、样品用量少、速度快2.差热分析法（DTA）差热分析法是在程序控制温度下，测量待测物质和参比物之间的温度差（△T）与温度(或时间)之间的关系的一种技术。差热分析曲线记录的纵坐标为样品与参比物的温度差(T)，横坐标为温度。（教材P114，图3-6）第三节一般杂质检查一、一般杂质检查规则《药品检验操作标准》规定：1.遵循平行操作原则（1）仪器的配对性如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致（2）对照品与供试品的同步操作平行操作原则2.正确的取样及供试品的称量范围3.正确的比色、比浊方法4.检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份二、氯化物检查法（一）原理对照法白色浑浊药物：AgClAgNOCl3HNO3白色浑浊）（对照：AgClAgNO,NaCl3HNO3Vc（二）检查方法药典附录除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水使成40m1，摇匀，即得对照浴液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用水稀释使成50m1，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得（三）测定条件1.标准NaCl溶液10mgCl/ml，50ml溶液中含50～80mg的Cl所显浑浊梯度明显，相当于标准NaCl溶液5～8ml。2.反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。（如为碱性？）（1）加速AgCl浑浊的形成；（2）产生较好的乳浊；（3）避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成。3.试剂：硝酸银5.避光、暗处放置5分钟后比浊，因氯化银见光易分解。4.供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀6.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。7.平行操作原则（四）干扰及排除1.若供试品有色，需处理后方可检查。内消色法：如枸橼酸铁铵中氯化物的检查。于其中一份中先加入硝酸银试液1.0ml，摇匀，放置10min，如显浑浊，可反复滤过，至滤液澄清，即得无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液，再在其中加入规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，作为对照溶液；另一份中加入硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，作为供试溶液，将两液在暗处放置5min后比较，即可消除颜色的干扰。此法又称为内消色法。2.当有其它干扰物质存在时，必需在检查前除去（1）碘中氯化物的检查（2）碘化物中氯化物的检查（3）溴化物中氯化物的检查（2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。3.不溶于水的有机药物（1）加水振摇，过滤，取滤液进行检查。（2）加热，放冷，过滤，取滤液进行检查。（3）溶于有机溶剂如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后进行检查。三、硫酸盐检查法（一）原理对照法4HCl224BaSOBaCl药物：SO白色混浊4HCl242BaSOBaCl（c、V）SO对照：K白色混浊除另有规定外，取各品种项下规定量的供试品，加水溶解使成约40ml（溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性）；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml，摇匀，即得供试溶液。另取该品种项下规定量的标准硫酸钾溶液，置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入25％氯化钡溶液5ml，用水稀释至50ml，充分摇匀，放置10分钟，同置黑色背景下，从比色管上方向下观察、比较，即得。（二）测定条件1.标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.1～0.5mg的SO42－所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液1～5ml。2.反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。目的是防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀得生成3.氯化钡10％－25％5.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。4.供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀6.检测时的温度20℃－30℃，温度太低产生的白色混浊既慢又少。若供试品有色，也可用内消色法处理。（三）干扰及排除四、铁盐检查法1.原理对照法（一）硫氰酸盐法36HClFeFeFeSCNFe6SCN药物：3o2336HCl3SCNFe6SCNc、V对照：Fe红色2.检查方法药典附录除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml，置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液（取该药品项下规定量的标准铁溶液，置50ml纳氏比色管中，加水使成25ml，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀）比较，即得。（3）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行（4）铁盐检查时，加氧化剂氧化Fe2+为Fe3+。加过硫酸铵可氧化Fe2+为Fe3+，同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。加硝酸后加热也可氧化Fe2+为Fe3+（5）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。4.干扰及排除（1）为了提高灵敏度或供试管与对照管色调不一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。（2）有机药物，特别是具环状结构的有机药物，需经700～800℃炽灼破坏处理后再依法检查。（3）干扰离子的影响氯化物、硫酸盐、磷酸盐、亚硝酸盐、枸橼酸盐有干扰增加酸度、萃取、增加显色剂的量甘油磷酸钠铁盐取本品0.5g，加水10ml溶解，依法检查（附录VIIIG），与标准铁溶液2.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.004％）。（二）巯基醋酸法BP（2000）对照法本法灵敏度较高，但试剂较贵红色药物：巯基醋酸巯基醋酸枸橼酸OHNH22%20FeFe2332Feml红色对照：巯基醋酸巯基醋酸枸橼酸OHNH22%20323FeFemlLimitTestforIron(Ph.Eur.method2.4.9)Dissolvethespecifiedquantityofthesubstancebeingexaminedinsufficientwatertoproduce10mloruse10mlofthesolutionprescribedinthemonographandtransfertoaNesslercylinder.Add2mlofa20%w/vsolutionofcitricacidand0.1mlofmercaptoaceticacid,mix,makealkalinewith10Mammonia,diluteto20mlwithwaterandallowtostandfor5minutes.Anypinkcolourproducedisnotmoreintensethanthatobtainedbytreating10mlofironstandardsolution(1ppmFe)inthesamemanner.五、重金属检查法中国药典（2005年版）共收载四法