15_第十五章___甾体激素类药物的分析

药物分析XiangnanUniversity第十五章:甾体激素类药物的分析基本要求1．掌握本类药物的化学结构、特征官能团与分析方法的关系。2．掌握高效液相色谱法、紫外分光光度法、四氮唑比色法、异烟肼比色法、Kober反应比色法等含量测定方法。3．熟悉本类药物常用的鉴别试验和特殊杂质的检查方法。甾体激素类药物的分析甾体激素类药物环戊烷并多氢菲母核的激素类药物SteriodHormones甾体激素类药物的分析1.甾体激素是在研究哺乳动物内分泌系统时发现的内源性物质发现史2.1932年至1939年间，从腺体中获得雌酮(1932)、雌二醇(1932)、睾酮(1935年)及皮质酮(1939)等的纯品结晶。3.随后，发明用薯蓣皂甙(Diosgenin)为原料进行半合成生产甾体药物，使生产规模扩大，成本降低4.发现肾上腺皮质激素治疗风湿性关节炎及其在免疫调节上的重要价值，使甾体药物成为医院中不可缺少的药物5.甾体口服避孕药的研究成功，使人类生育控制达到了新水平Contents结构与分类1鉴别2检查3含量测定4第一节基本结构与性质1234567891011121314151617甾烷ABCD母体结构第一节基本结构与性质18雌甾烷18雄甾烷1918孕甾烷192120母体衍生结构甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素分类药理作用第一节基本结构与性质一、肾上腺皮质激素OHOOHOCH2OHHHH311172021氢化可的松(hydrocortisone)OHOOHOHFHOCH3OHCH3醋酸地塞米松(dexamethasoneacetate)16α-甲基21-酯化17α-羟基9α-氟3-酮1,2-双键11β-羟基20-酮OCH3OHCH3HHOPFHHCH3OHOOONaONa地塞米松磷酸钠DexamethasoneSodiumPhosphateOCH3CH3HOHHHO醋酸去氧皮质酮DesoxycortisoneAcetate)CH3OOCH3OHHCH3HFHHOOOH3CCH3CH3OO醋酸曲安奈德TriamcinoloneAcetonideAcetate本类药物结构特征A环Δ4-3-酮基,为共轭体系,在波长240nm附近有紫外吸收,部分药物在C1-C2之间有双键,也有紫外吸收OCH3OHHCH3HFHHOOOH3CCH3CH3OO醋酸曲安奈德TriamcinoloneAcetonideAcetate本类药物结构特征C17位上为α-醇酮基,具有还原性.多数药物有C17-α-羟基,部分药物α-醇羟基与酸成酯.OCH3OHHCH3HFHHOOOH3CCH3CH3OO醋酸曲安奈德TriamcinoloneAcetonideAcetate本类药物结构特征部分药物的C6或C9位由卤素取代,呈相应的卤化物反应OCH3OHHCH3HFHHOOOH3CCH3CH3OO醋酸曲安奈德TriamcinoloneAcetonideAcetate本类药物结构特征部分药物C11位上有羟基或酮基取代二、雄性激素及蛋白同化激素第一节基本结构与性质CH3HHCH3HOHCH3O甲睾酮(methyltestosterone)OOHHHHOCH3丙酸睾酮(testosteronepropionate)OOHHHHO苯丙酸诺龙(nandrolonephenylpropionate)17β-羟基作用更强吸收减缓CH3HHCH3HOHCH3O甲睾酮(methyltestosterone)A环Δ4-3-酮基C17位上为羟基,部分药物的羟基被酯化雄性激素上的母核为19个碳原子,蛋白同化激素在C10位上一般无角甲基,母核只有18个碳原子二、雄性激素及蛋白同化激素本类药物结构特征第一节基本结构与性质三、孕激素COHHHCH3O黄体酮(progesterone)CH3OCH3OCH3OHHHO醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)乙酰氧基，具口服活性C17位α-羟孕酮类第一节基本结构与性质OHCH3HOHHH炔诺酮(norethisterone)H3C左炔诺孕酮三、孕激素C19位去甲睾丸酮类第一节基本结构与性质三、孕激素COHHHCH3O黄体酮(progesterone)A环Δ4-3-酮基C17位上有甲酮基或乙炔基.多数在C17位上有羟基,部分药物的羟基被酯化第一节基本结构与性质四、雌性激素HOHHHOHCH3H雌二醇EstradiolHOHHCH3H炔雌醇EthyinylestradiolCOHCH第一节基本结构与性质四、雌性激素HOHHHOHCH3H雌二醇Estradiol有些药物在C17位上有乙炔基,构成19-去甲孕甾烷母核A环为苯环,C3位上有酚羟基,有的药物C3位上的酚羟基成酯C17位上有羟基有些药物C17位羟基成酯.种类主要活性基团△4-3-酮C17-α-醇酮基△4-3-酮C17-β-羟基△4-3-酮C17-甲酮基C17-乙炔基A环为3-OH苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应C17-乙炔基C17-羟基与硝酸银反应可成酯可成酯UV、与羰基试剂反应与亚硝基铁氰化钠反应与硝酸银反应UV、与羰基试剂反应性质还原性UV、与羰基试剂反应肾上腺皮质激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素第一节基本结构与性质总结如下第二节Identification物理常数的测定化学鉴别法制备衍生物测定熔点UVIRTLCHPLC理化性质与鉴别试验第二节Identification一、物理常数的测定1.熔点HO+COClKOHCOO+KCl+H2O炔雌醇m.p.201℃OCCH3O+2HONH2NCHOCH3NOH+2H2O黄体酮双肟m.p.238℃苯丙酸诺龙缩氨基脲m.p.178~185℃分解OCOCH2CH2OC6H5+NH2CNHNH2OHClNCH2NOH+H2O+HAcOCOCH2CH2N+H2OOHO+CH3CH2COOHOCOCH2CH3OKOH丙酸睾丸素m.p.150~156℃第二节Identification第二节Identification二、化学鉴别法2.比旋度3.吸收系数与强酸的呈色反应官能团的反应1.与强酸的呈色反应甾体激素类药物硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸呈色与硫酸显色反应显色荧光加水稀释泼尼松龙深红絮状↓灰泼尼松橙黄→蓝绿炔雌醚橙红黄绿↓红色炔雌醇橙红黄绿絮状↓玫红醋酸可的松黄或微褪色并澄带橙清第二节Identification2.官能团的反应①C17-α-醇酮基——还原性A.呈色反应C17-α-醇酮基四氮唑盐OH-呈色B.沉淀反应C17-α-醇酮基氨制硝酸银银镜反应C17-α-醇酮基碱性酒石酸铜Cu2O↓OHOOHOCH2OHHHH第二节Identification②C3–酮基和C20–酮基甾酮类2,4-二硝基苯肼呈色异烟肼、硫酸苯肼OOHNCONHNH2HClCONHNOHN异烟腙（黄色）睾酮CONHNCCH3NHNOCNN异烟双腙（黄色）OCCH3O2NCONHNH2HCl黄体酮③甲酮基或活泼亚甲基第二节Identification亚硝基铁氰化钠间二硝基酚/芳香醛呈色COCH3O]NOCNFe[OHH2O2+-4Fe5CNNOCHCOO蓝紫色黄体酮专属鉴别反应黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化钠其他甾体淡橙色或不显色第二节Identification有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ④有机卤素茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸—硝酸银AgCl↓呈蓝紫色第二节Identification⑥乙炔基第二节IdentificationRCCHAgNO3RCCAg↓OHCCHHO炔雌醇3AgNOOHCCAgHO白⑦酯基⑤酚羟基雌激素类重氮苯磺酸红色偶氮染料△４-3-酮、苯环、其他共轭结构结构依据240nm左右280nm左右三、UV第二节Identification结构特征：酚羟基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇OHCCHHO四、IR第二节Identification1505cm-1νOH3505cm-13300cm-1νCHCC1590cm-13610cm-1νOH酚羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨架振动黄体酮COHHHCH3O结构特征：△４-3-酮、C17-酮基四、IR第二节Identification1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H双键五、TLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别方法：对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。第二节Identification主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）方法：对照品法要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。六、HPLC法第二节Identification一、有关物质的检查检查意义：其他甾体与甾体激素药物结构相似，也有一定的药理作用而又互不相同.检查方法（具有一定分离能力）TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）第三节PurityTest第三节PurityTest氢化可的松中其他甾体检查对照品60μg/ml供试品3.0mg/mlCHCl3-MeOH(9:1)溶剂硅胶GF254二氯甲烷-乙醚-甲醇-水385:60:15:2展开后晾干105℃干燥10min碱性四氮唑蓝显色（一）TLC判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色对照溶液——0.02mg/ml供试液——1mg/ml（二）HPLC第三节PurityTest黄体酮中有关物质检查供试品溶液的杂质峰数不得超过1个，其面积不得大于对照液的主峰面积的3/4第三节PurityTest二、硒的检查来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢46SeSe盐酸羟胺氧瓶燃烧有机药物苯并苯硒二唑二氨基萘5,43,24Se..pHnmA环己烷三、溶剂残留甲醇和丙酮(GC)0.3%0.5%第三节PurityTest四、游离磷酸盐检查OnHMoOPHPOHPOMoOH24103433424还原钼蓝钼酸铵磷钼酸740nm，UV-Vis第四节AssayHPLCUV比色法非水溶液滴定法四氮唑比色法异烟肼比色法柯柏反应比色法第四节Assay一、HPLC对照液供试液己烯雌酚黄体酮第四节Assay二、UV-Vis化合物结构λmax(nm)肾上腺皮质激素雄性激素孕激素雌激素280△4-3-酮240醋酸地塞米松苯环第四节Assay三、比色法肾上腺皮质激素类有色甲瓒四氮唑盐醇酮基17COH-[还原]CC6H5NNNNC6H5C6H5+Cl2e(H)CC6H5NNNNC6H5C6H5H2,3,5-TriphenyltatrazoliumchlorideTTC(RedtatrazolineRT)氯化三苯四氮唑三苯甲䐶(Formazan)深红色λmax480~490nm（一）四氮唑比色法䐶N+ClOCH3N+ClOCH3NCNC6H5NC6H5NCNC6H5NC6H5NCNC6H5NHC6H5NCNC6H5NC6H5OCH3NN+ClOCH3NCNC6H5NHC6H5NCNC6H5C6H5OCH3NNOCH3NH2e(H)2e(H)第四节Assay蓝四氮唑BluetetrazolineBTBT-单甲䐶BT-双甲䐶蓝色λmax525nm氢化可的松软膏的含量测定第四节Assay精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液1ml，摇匀，各再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25℃的暗处放置40min～45min，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得影响因素基团溶剂与水分碱空气中氧与光线温度与时间第四节Assay（1）基团对反应速度的影响C11=O＞C17－OHC21－OH＞C21-酯（2）溶剂、水分的影响含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→几无反应—无水乙醇(无醛)（一）四氮唑比色