酵母双杂交原理和应用

蛋白质相互作用研究——酵母双杂交系统专业:XXX学生：XXX研究背景系统分类系统原理操作过程研究背景蛋白质---蛋白质的相互作用是细胞生命活动的基础和特征。例如细胞与细胞、细胞与基质的连接；细胞信号转导；代谢网络；以及转录、翻译调节等.通过酵母系统进行基因水平的检测，是采用体内实验来研究蛋白间的相互作用。所有操作均是在核酸水平上进行，无需纯化大量的蛋白，并可精确地测定蛋白质间弱相互作用。研究背景酵母双杂交系统分类核内蛋白质相互作用的研究膜蛋白、膜相关蛋白和可溶性蛋白间相互作用的研究核内蛋白质间相互作用的研究原理：转录激活因子通常有两个可分割的、功能相互独立的结构域，即DNA特异性结合结构域（DNA-bindingdomain，DBD）与转录激活结构域（transcriptionalactivationdomain,AD）。DBD-Bait和prey-AD这两个融合蛋白是如何构建的？又是如何进入同一个酵母细胞的呢？因此完整的酵母双杂交由三个部分组成：bait载体，prey载体，和带有报告基因的酵母菌株。根据目前通用的系统中DBD来源的不同，主要分为GAL4系统和LexA系统。GAL4系统来源于酵母；LexA系统的BD来源于原核生物，在真核生物内缺少同源性，因此可以减少假阳性的出现。应用定义两个已知蛋白质间的相互作用；筛选新的蛋白质间相互作用（即cDNA文库筛选）；绘制蛋白质相互作用图谱；寻找具有药物治疗作用的小分子多肽。膜蛋白、膜相关蛋白和可溶性蛋白间相互作用的研究原理：泛素（ubiquitin）N-terminusLysine63Lysine48C-terminus分离的泛素系统分离泛素（split-ubiquitin）系统应用确定两个膜蛋白的相互作用；从cDNA文库中筛选相互作用的蛋白质。THANKYOU