Tune软件操作说明-Q-Exactive-series

1打开打开打开打开Tune软件软件软件软件2界面及界面及界面及界面及图标介绍图标介绍图标介绍图标介绍（1）ON、Standby、Off，启动扫描时选择On，待机选择是Standby（2）打开tune方法（3）保存tune方法（4）六通阀的切换，只用a，1是waste，2是inject（5）质谱注射泵，可以更改流速（6）三个灯都为绿色是正常状态，第1灯：指示仪器通讯是否正常，第2个灯：指示仪器硬件状态是否正常，第3个灯：指示仪器的性能状态是否正常。典型的变黄原因有：校正过期。建议重新校正，校正完成之后可恢复绿色。将鼠标放在上述的灯上即可显示变黄的信息提示。3Instrumentcontrol各项参数各项参数各项参数各项参数3.1Scanparameters（1）Scantype：分为FullMS-SIM和AIF-MS/MS；FullMS：一级全扫，要求Lastmass≤15*firstmassSIM：当fullmass的扫描范围小于50个质量数时，自动变为SIM。AIF：所有的离子全部碎裂，没有母离子的选择性，现在软件无法识别二级子离子是由哪个母离子产生的，所以暂时不用这种方法。MS/MS：设定center/width，或者scanrange，这里设置的是母离子的质荷比；（2）Scanrange：参考scantype，scantype中设置的是fullscan时，这里设置全扫的质荷比范围，如果scantype中选择的是MS/MS，此处应设置子离子的扫描范围。（3）Fragmentation：分为sourceCID和NCE，一般做fullscan时此项是关闭状态SourceCID：源内裂解，主要用于打开二聚体等非共价结合的键。NCE：归一化碰撞能量。仪器校正后，每个特定质荷比的离子都有一个对应将其打碎的能量值，做小分子设为35；（4）Resolution：分辨率代表仪器将不同质量数离子分开的能力，QE可以达到14万，最低分辨率为1750。QE中一级扫描的分辨率一般设为70,000，二级分辨率设为17,500。（5）Polarity：正负扫描模式的选择。（6）Microscan：将几张质谱图叠加，一般用1。（7）Lockmass：内标校正时使用，常用m/z455.120025作为内标物。（8）AGCtarget：Orbitrap容纳的离子数量，因为进入Orbitrap中的离子都带电荷，进入之后会相互干扰（这种现象称之为空间电荷效应），离子数量过多，会影响质荷比准确度，通常一级扫描设为1*106，二级设为1*105。（9）Maxinjectiontime：MS1：100ms，MS2：50ms。（10）Hotlink：选中之后，修改参数只需要点击enter键就可以，如果不选中，点击enter之后还要再点击apply，才能使用修改后的参数。3.2HESIsource：源区参数决定数据好坏、质量，离子信号强度；（1）Sheathgasflowrate：帮助溶剂气化，校正时用5~15，做样品时设为35~45；（2）Auxgasflowrate：气帘气，校正一般为0，做样品时设为10~15；（3）Sweepgasflowrate：吹扫气，流动相中加入不挥发性盐时开启此路气体，设为1~2；（4）Sprayvoltage：正离子模式3.5~4.5KV、负离子模式2.5~3.5KV（5）Spraycurrent：ESI喷雾离子所形成的电流反馈值，不能设置；换APCI源后该处电会自动变为DischargeCurrent，可设置；（6）Capillarytemperature：流速越高，温度越高，校正时，设为275℃，当链接色谱柱时，设为320℃；（7）S-lensRFlevel：一般为50~60（8）Heatertemperature：离子源的加热温度，当链接色谱柱时，设为200~300℃，校正时设置为0。（9）SourceAutoDefaults：根据流速自动调节参数，自动调节的气体流速偏大，一般不建议使用。3.3实时采集数据Acquisition（1）Fileinuse：上一次采集的数据（2）Destinationfile：这次采集的数据保存路径及名称（3）Acquisitiontime：连续采集（4）Onstart：两个选项，don`twait：点击start就开始记录；waitforcontactclosure：需要有触发开始的信号（比方液相色谱的自动进样器等）才开始数据采集；4Tune（1）TIC：对一级谱图中总离子流图进行调谐，得到最佳的tune参数。（（（（2））））Mass：对某一特定质荷比的离子进行调谐。（（（（3））））点击Tune，自动调节离子源参数，使质谱信号最强。（（（（4））））HCDMode：开启HCD对二级碎片进行调谐优化。5MassTraces（1）ScanNCE和ScanCE一般是输入感兴趣的碎片离子的m/z，如输入碎片离子的m/z138，选中scanNCE(scanCE)点击start，会得到能够产生138碎裂能的变化趋势，从变化趋势中可以得到产生m/z138这个碎片离子最佳的碎裂能量，使其信号最强的NCE(CE)值。（2）Scanin-SourceCIDenergy：也是同样可以对源内裂解的能量做一个优化6质量轴校正质量轴校正质量轴校正质量轴校正Calibration（1）开扫描开扫描开扫描开扫描点击下图中的开扫描按钮点击下图中的开扫描按钮点击下图中的开扫描按钮点击下图中的开扫描按钮，，，，打开扫描打开扫描打开扫描打开扫描（2）连接管路安照下图中的管路将注射泵与离子源连接，通入校正液（（（（3））））设置扫描参数设置扫描参数设置扫描参数设置扫描参数按照下图设置按照下图设置按照下图设置按照下图设置扫描参数扫描参数扫描参数扫描参数，，，，（（（（4））））调节离子源参数调节离子源参数调节离子源参数调节离子源参数按照下图中对离子源参数进行调节按照下图中对离子源参数进行调节按照下图中对离子源参数进行调节按照下图中对离子源参数进行调节（（（（5））））查看谱图信息查看谱图信息查看谱图信息查看谱图信息a)在谱图上能找到在谱图上能找到在谱图上能找到在谱图上能找到m/z1955241021-1921离子离子离子离子（（（（负离子模式负离子模式负离子模式负离子模式m/z265、、、、514、、、、1079-1379）；）；）；）；b)TI5ms;c)NL10E8d)TICVariation10%（（（（负离子模式负离子模式负离子模式负离子模式＜＜＜＜15%））））（（（（6））））开始校正开始校正开始校正开始校正点击界面左侧的点击界面左侧的点击界面左侧的点击界面左侧的calibration选择要校正的内容选择要校正的内容选择要校正的内容选择要校正的内容，，，，正离子校正选择正离子校正选择正离子校正选择正离子校正选择MSmasscalibration（（（（pos）；）；）；）；负离子模式校正选择负离子模式校正选择负离子模式校正选择负离子模式校正选择MSmasscalibration（（（（neg））））（7）校正结束校正结束会弹出如下对话框，点击OK校正结束。校正文件的默认保存路径C:\Xcalibur\system\Exactive\instrument\msx_instrument_files\.（1）校正液：正离子标准品组成：m/z195咖啡因；m/z524MRFA；m/z1021-1921聚合物负离子标准品组成：m/z265十二烷基磺酸钠；m/z514中碘磺酸钠；m/z1079-1979聚合物（2）校正时源区参数建议值参数设置正离子模式负离子模式流速ul/min510Scanrange150-2000150-2000Capillarytemp320320SprayvoltageKV3.8（3.5-4.0）3.2（2.5-3.5）S-lens5050Heatertemp00Sheathgas5~305~30Auxgas00Sweepgas00（3）质量数校正的前提：1)总离子流图信号强度＞108，而且基峰m/z195的信号也大于108；2)injectiontime＜5ms3)TICvariation＜10%（负离子模式小于15%）4)如果稳定性不好，调节ESI源的参数，如更改气体流量及离子源位置一般放到C的位置；（4）校正顺序：先选择eFTParameter进行校正；MSMassCalibration(pos)打钩进行正离子校正或者MSMassCalibration(neg)打钩进行负离子校正；；每一项校正完之后点击OK；（5）校正时间一般做正离子校正（25h校正一次），负离子不用的话半年校正一次；（6）保存校正文件默认保存路径C:\Xcalibur\system\Exactive\instrument\msx_instrument_files\.7评估评估评估评估Evaluate3个月一次，查看仪器一些参数是否正常，打校正液，进行评估，如果评估通不过，到calibration中对不正常的选项进行校正8真空度真空度真空度真空度vacuum/BakeoutUHV：：：：低于低于低于低于5*10-10Forevacuum：：：：在1~2mbar之间Bakeout：烘烤高真空腔体使真空快速达到要求。只要仪器经历过放空（比方仪器维护等），重新抽真空，都需要对仪器进行bakeout。通常Bakeouttime设定为6-12小时，仪器会在Bakeout结束后再自动降温平衡3小时。