上海药物研究所-上海绿谷(集团)有限公司

上海药物研究所－上海绿谷（集团）有限公司丹参联合实验室上海绿谷（集团）有限公司中国科学院上海药物研究所创新中药丹参多酚酸盐粉针剂的产业化丹参丹参乙酸镁Mg2+丹参作为传统的活血化瘀良药，广泛应用于临床治疗心血管疾病，丹参制剂是目前国内医药市场中销售量最大的品种之一。丹参注射剂的临床使用量每年约30亿支。SalviamiltiorrhizaBge.丹参注射液—产品1丹参注射液—产品2现有的丹参注射剂由于大多是70年代研制的，受当时研究水平和条件的限制，未能很好地阐明丹参的有效成分。因此这些制剂的质控指标不能充分反映药物疗效，药物质量控制存在的问题导致产品的疗效不稳定，有时出现不良反应。二.技术基础最大聚集率(%)IC30g/ml050g/ml100g/ml200g/ml400g/mlControl305丹参乙酸镁29824617764118紫草酸二钾3212307264168278迷迭香酸钠298233227116311丹参乙酸二钾296256186106134异丹参乙酸二钾28620619875141丹参素钾2710207256124141表1.丹参乙酸镁及其同系物对ADP诱导兔血小板最大聚集率的影响（ADP1mol/L,n=4-8)聚集解聚率(%)IC30g/ml050g/ml100g/ml200g/ml400g/mlControl96丹参多酚酸盐3238321135666841丹参乙酸镁19111713216791945紫草酸二钾2693072814583461迷迭香酸钠——3534431523839丹参乙酸二钾1992493214492490异丹参乙酸二钾232127182212301386丹参素钾24163372813384267表2.丹参乙酸镁及其同系物对ADP诱导兔血小板聚集解聚率的影响（ADP8mol/L,n=4-7)MDA(nmol/gwetweight)10g/ml30g/mlControl5274510丹参多酚酸盐204142丹参乙酸镁203152紫草酸二钾216163迷迭香酸钠225162丹参乙酸二钾184142异丹参乙酸二钾184152丹参素钾344208表3.丹参乙酸镁及其同系物对脂质过氧化的抑制作用比较invitro（n=10)成活时间延长率丹参乙酸镁延长65％，P0.01紫草酸二钾延长23％，P0.05迷迭香酸钠延长42％，P0.05丹参乙酸二钾P0.05异丹参乙酸二钾延长69％，P0.01丹参素钾P0.05表5.丹参乙酸镁及其盐增强小鼠耐缺氧能力的作用比较invivo（200mg/kg,n=10)表4.丹参乙酸镁及其同系物增强小鼠耐缺氧能力的作用比较invivo（100mg/kg,n=10)成活时间延长率丹参乙酸镁延长78％丹参乙酸延长28％丹参多酚酸盐延长78％丹参多酚酸延长14％图4.丹参乙酸镁对氧化修饰低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的影响。A,cellsculturedwithoutox-LDL;B,cellsculturedwithox-LDL.图3.丹参乙酸镁对Cu2+诱导低密度脂蛋白氧化修饰的影响。Lane1,NormalLDL;Lane2,ox-LDL;Lane3,ML-B100µM;Lane4,ML-B30µM;Lane5,ML-B10µM.图5.丹参乙酸镁对缺氧复氧诱导内皮细胞凋亡DNA的影响。Lane1:MLB30µg/mL;Lane2:MLB10µg/mL;Lane3:MLB3µg/mL;Lane4:HRcontrol;Lane5:normoxiacontrol;Lane6:200bpDNALadder.123456200bp400bp600bp800bp1000bp1200bp1400bp1600bp1800bp2000bp丹参乙酸镁为主要成分的多酚酸盐是丹参中最重要的有效活性部位，并通过多种机制和途径发挥其保护心血管系统的作用。国家药典委员会已经明确公布将丹参乙酸镁作为丹参片的质量标准，规定每片含量不低于13mg。丹参乙酸镁的药理活性及重要性已经得到了中国药品质量标准最权威的机构国家药典委员会的认定。丹参乙酸镁Mg2+丹参多酚酸盐丹参多酚酸盐及其粉针剂是以丹参乙酸镁为主要成分（含量达80％）和质量控制指标新药。丹参多酚酸盐质量控制丹参多酚酸盐原料药丹参多酚酸盐粉针剂丹参药材丹参多酚酸盐粉针剂与丹参注射液中丹参乙酸镁的含量比较丹参注射液—产品1丹参注射液—产品2Mg2+丹参乙酸镁丹参多酚酸盐粉针剂丹参乙酸镁40mg/支技术基础以冻干粉针剂提高水溶性有效成分稳定性图5丹参药材和市售丹参注射剂的HPLC比较丹参多酚酸盐粉针剂丹参注射液有效成分以丹参乙酸镁为主，含量达到80％，其余为其同系物。而丹参乙酸镁药理作用最强，它是丹参的主要活性成分。除原儿茶醛和丹参素外，其它的有效化学成分不明确。且它们的药理活性较弱。质量指标以丹参乙酸镁为质量标准，相当于40mg/支；丹参多酚酸盐含量近100％，保证了的临床疗效。以原儿茶醛为质量标准，不少于2mg/支（10ml）,疗效较低。制备工艺技术以先进的专利工艺富集丹参乙酸镁，减少了药材质量对成品质量制约。精制的原料药可确保成品质量。直接从生药材制备，采用水提醇沉传统工艺，药材质量影响成品的质量。制剂稳定性和质量冻干粉针剂，有效成分稳定。采用指纹图谱技术对药材、原料药和成品制剂分别进行全面的质量控制。水针剂，有效成分易分解，质量不稳定。大部分的成分无法进行控制。安全性和疗效不良反应少，安全性、临床疗效好。不良反应多见，疗效不稳定。丹参多酚酸盐粉针剂与丹参注射液的比较临床前药效学研究1.抗心肌缺血作用对狗冠状动脉结扎造成心肌梗塞模型的治疗作用对离体大鼠心脏再灌注损伤的保护作用2.心脏血液动力学的影响对狗心脏血液动力学的影响对离体豚鼠心脏血液动力学的作用3.心脏耗氧量的影响对狗心肌组织氧耗量的影响对离体豚鼠心脏氧耗量的影响4.抗血小板聚集和抑制血栓形成作用对ADP诱导的大鼠血小板聚集功能的作用对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响抗心肌缺血作用(1)对狗冠状动脉结扎造成心肌梗塞模型的治疗作用图1.丹参多酚酸盐对狗冠脉结扎心表面电图ST段总和(ΣST)的影响（mV，`x±SD，n=5只/组）图2.丹参多酚酸盐对N-BT染色测定心肌梗塞范围的影响抗血小板聚集和抑制血栓形成作用Dan-9/2616:1016:0516:0017120240-1002000160-40004000030-0.40.2-8040-800Dan-9/26464442403818120240-1002000160-40004000030-0.40.2-8040-800Control给药后5min给药后10min给药后20minDan-9/26181614121019120240-1002000160-40004000030-0.40.2-8040-800Dan-9/261816141210821120240-1002000160-40004000030-0.40.2-8040-800对犬血液动力学的影响图5A.丹参多酚酸盐20mg/kg静脉注射对犬的血流动力学影响丹参多酚酸盐对狗冠状动脉结扎造成心肌梗塞模型，能使心肌缺血程度显著下降，心肌缺血范围缩小，减轻心肌缺血时的细胞损害，具有明显的抗心肌缺血作用。同时丹参多酚酸盐能对抗血小板聚集和抑制血栓形成。其特点是在治疗剂量范围内不影响心脏血液动力学功能。临床前药效学研究的总结1.一般药理学试验神经系统、心血管系统和呼吸系统药理学试验2.急性毒性试验昆明种小鼠的急性毒性试验3.长期毒性试验Beagle狗的长期毒性试验；Sprague-Dawley大鼠的长期毒性试验4.制剂的安全性试验局部刺激试验；血管刺激试验；过敏试验；溶血试验临床前安全性评价Control给药后5min给药后60min给药后120min图1.麻醉狗静脉注射丹参多酚酸盐100mg/kg对心率、血压和心电图的影响心血管系统和呼吸系统Dan-10/21G86414120160200240-2-101-0.8-0.400.40.8Dan-10/21G121086M22120160200240-2-101-0.8-0.400.40.8Dan-10/21G12108619120160200240-2-101-0.8-0.400.40.8Dan-10/21G9:389:369:349:3218120160200240-2-101-0.8-0.400.40.8Beagle狗的长期毒性Beagle狗静脉注射320mg/kg30天的毒副反应主要表现为高浓度药液（80mg/ml）引起消化道的功能紊乱，血管的内皮细胞损伤、血栓形成以及所引起的造血组织变化。停药后均有所恢复。Beagle狗静脉注射丹参多酚酸盐30天，无毒剂量为20mg/kg(约狗最佳有效剂量的6倍)；安全剂量为小于80mg/kg；中毒剂量为320mg/kg（约狗最佳有效剂量的100倍）。1.局部刺激试验家兔股四头肌内局部注射丹参多酚酸盐1毫升（5mg/ml），观察注射局部刺激反应。结果表明，丹参多酚酸盐无局部刺激作用。2.血管刺激试验家兔耳缘静脉注射丹参多酚酸盐，连续三次后观察试药对血管的刺激作用。结果表明，丹参多酚酸盐静脉注射后对血管无刺激作用。3.过敏试验豚鼠腹腔间日注射丹参多酚酸盐，连续三次后，分别在第14和21天静脉注射丹参多酚酸盐，观察豚鼠对试药的过敏反应。结果表明，静脉注射丹参多酚酸盐后没有出现过敏性反应。4.溶血试验采用丹参多酚酸盐的浓度5mg/ml，观察丹参多酚酸盐对家兔红细胞的溶血作用。结果表明，丹参多酚酸盐对家兔红细胞无溶血作用。制剂的安全性试验丹参多酚酸盐粉针剂是以丹参乙酸镁为质量控制标准的一种创新中药，与现有的丹参注射液的质量指标完全不同，克服了现有制剂的缺点，具有明显的优越性。丹参多酚酸盐粉针剂不仅有效成分明确，而且采用指纹图谱技术针对药材、原料药和制剂的质量进行全面的控制，从而确保了丹参多酚酸盐粉针剂产品的质量稳定、可控、高效和安全。丹参多酚酸盐及其粉针剂的创新点丹参多酚酸盐粉针剂的临床研究I期临床试验（健康人耐受性试验）–单次给药24例–多次给药6例II期临床试验（安全性及有效性的初步评价）–随机、阳性药对照（丹参注射液）、多中心–试验组120例（完成116例），对照组120例（完成114例）–安全性分析一般体格检查安全性检测–疗效分析心绞痛疗效心电图疗效中医症状疗效疾病综合疗效–心绞痛及中医症状记分分析心绞痛总记分、总记分下降率、心绞痛症状消失率中医症状总记分、总记分下降率、中医症状消失率丹参多酚酸盐粉针剂I期、II期临床研究的耐受性和安全性评价在I期临床试验中，单次给药组及多次(累积)给药组共30例健康受试者，在初始剂量及临床推荐剂量的2倍范围内，观察过程中均未出现不良反应，并在停药后随访3天亦未见不良反应。在II临床试验中，丹参多酚酸盐粉针剂受试组116例患者治疗14天后，一般体格检查、肾功能、尿粪常规未见异常。有1例受试者用药后自觉轻度头胀痛，未经治疗，2h后消失。表明丹参多酚酸盐粉针剂治疗冠心病心绞痛是安全的。II期临床研究结果不良反应总有效率（％）缓解心绞痛发作和减少硝酸甘油用量改善心电图S－T段中医症状疗效疾病综合疗效丹参多酚酸盐粉针剂轻度头胀痛1例92.2％*61.2％**92.2％**86.2％**丹参注射液皮疹1例、头痛和四肢乏力1例76.8％39.7％75.4％55.3％多中心、随机对照丹参多酚酸盐粉针剂治疗冠心病心绞痛疗效分析*P0.05，**P0.01与丹参注射液比较。5个临床研究中心入组病例数共240例，其中丹参多酚酸盐粉针剂组120，完成116例，脱落4例；丹参注射液组120例，完成114例，脱落6例。I期和II期临床试验表明丹参多