低频超声增强阿霉素对白血病耐药细胞株k562adm效应的实验研究

东南大学硕士学位论文低频超声增强阿霉素对白血病耐药细胞株K562/Adm效应的实验研究姓名：孟庆齐申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：陈宝安20050601低频超声增强阿霉素对白血病耐药细胞株K562/Adm效应的实验研究作者：孟庆齐学位授予单位：东南大学相似文献(2条)1.学位论文严思静载10-羟基喜树碱脂质超声微泡的处方制备及药代动力学研究200910-羟基喜树碱（10-hydroxycamptothecin，HCPT）是从喜树中提取到的生物碱或半合成品，抗瘤谱广，与其它常用抗肿瘤药无交叉耐药性，因此对耐药肿瘤也有治疗作用。多项研究表明，HCPT是喜树碱家族药物中活性最强的药物，对腹水型肝癌、头颈部肿瘤、胃癌、非小细胞肺癌及白血病等有一定疗效[2]，具有潜在的选择性杀伤肝癌细胞的作用。HCPT虽然是较有发展前景的抗肿瘤药物，但是其本身存在溶解性低、活性内酯环不稳定、毒性和不良反应较大等问题。目前临床使用的HCPT为加氢氧化钠成盐（内酯环打开）的结构，这种开环结构的抗癌活性低，半衰期短（t1/2约5min），作为细胞周期特异性药物，HCPT的体内存留时间短和组织浓度低成为限制其进一步提高疗效的主要因素，因此寻找有效的药物传递系统弥补药物自身缺陷就显得尤为重要。超声脂质微泡不仅具有脂质体的诸如增加药物溶解度、保护药物活性结构、延长血浆滞留时间及减少毒性等诸多优点，还具有靶向运载的作用，其在超声介导下的空化效应，可以靶向传输基因或药物，从而达到治疗疾病的目的。因此为了解决HCPT稳定性差、半衰期短、水溶性差等的制剂学问题，本课题旨在制备出一种新型的载HCPT脂质超声微泡，并检测其相关物理性质，对其在小鼠体内的药代动力学行为进行考察，从而为临床提供一种长效、具有靶向性的HCPT新制剂提供可靠的实验依据。本课题研究主要包括以下两个部分的内容：第一部分载10-羟基喜树碱脂质微泡的处方制备及一般特性研究。目的：研究载10-羟基喜树碱（HCPT）脂质超声微泡的处方制备工艺，筛选出最佳处方制备载药微泡。方法：以机械振荡法制备载HCPT脂质超声微泡；采用正交试验优选处方；采用紫外分光光度法和反相高效液相色谱法测定微泡的包封率和载药量；在光学显微镜下计数并观察微泡的外观和分布情况；以马尔文激光粒径测量仪测量微泡粒径大小和Zeta电位；观察并比较微泡经60Co射线灭菌前后其外观、形态、平均粒径和包封率的改变；并观察微泡在兔肝脏的显影效果。结果：以最佳处方制备的载HCPT（2mg）脂质超声微泡的药物包封率为86.70％，载药量为21.70％；浓度为（3.07±0.58）×109/ml，粒径范围为（1.10±0.20）μm，平均粒径为1.10μm，Zeta电位为-（3.90±0.80）mV；经60Co射线灭菌后观察微泡形态、平均粒径及包封率无明显变化；静脉注射此载药微泡后，兔肝脏超声显影持续增强。结论：采用机械振荡法制备的载HCPT脂质微泡，包封率和载药量较高，粒径分布均一，体内显影效果好，有望实现实时监控下的体内定点靶向给药，为其进一步的研究奠定了基础。第二部分载10-羟基喜树碱脂质微泡在小鼠体内的药动学研究。目的：制备载10-羟基喜树碱（HCPT）脂质超声微泡，探讨其在小鼠体内的药代动力学特征及在超声辐照下药物在小鼠肝脏的定位释放情况。方法：用机械振荡法制备载HCPT脂质超声微泡，测定HCPT注射液、载HCPT脂质超声微泡（HLM）在不同时间点小鼠血浆中的药物浓度，数据用3P97药动学程序处理，得到各主要药代动力学参数；将实验小鼠分为HLM组、HLM辐照组、HCPT注射液组、HCPT注射液辐照组4组，分别注射HLM及HCPT注射液后，用一定声强的超声经体表定点辐照，用HPLC-荧光法测定小鼠肝脏中的HCPT含量。结果：光鏡下观察载HCPT脂质超声微泡呈球形；HLM及HCPT注射液的药-时曲线符合二室模型，HLM在多数取样时间点的血药浓度较HCPT注射液高，HLM在血浆中的消除半衰期（6.70h）较HCPT注射液（1.12h）明显提高，延长了药物在血浆中的滞留时间，同时提高了HCPT的生物利用度，其AUC（药-时曲线下面积）为HCPT注射液的5.5倍；HLM辐照组小鼠肝组织中的HCPT含量明显高于其余各组。结论：载HCPT脂质超声微泡粒径分布均一，可延长HCPT在体内的循环时间，在一定声强的超声定位辐照下能明显提高靶组织内的药物浓度。2.学位论文吴青羟喜树碱超声微泡制剂的研究2009超声微泡是一种利用超声波进行定位和释药的新型靶向药物制剂，开创了超声定位靶向释药一个全新的研究领域。通过超声成像可观察到微泡在体内的运行情况，利用超声空化效应击碎微泡，达到靶向释放药物的目的，从而减少药物的用量，降低药物的不良反应。因此，超声微泡给药系统有广阔的应用前景和巨大的经济效益。羟喜树碱（Hydroxylcamptothecine，HCPT）是目前唯一用于临床的拓扑异构酶Ⅰ特异性抑制剂，可用于原发性肝癌、胃癌、头颈部癌、膀胱癌及直肠癌、白血病等多种恶性肿瘤的治疗，与其他肿瘤药物相比疗效高、毒性低、无交叉耐药性，是目前治疗多种恶性肿瘤疗效较好的化疗药物，但仍具有骨髓抑制作用和消化道毒性。因此，研究减少羟喜树碱毒性的新剂型是亟待解决的问题。课题以乳酸一羟基乙酸共聚物（PLGA）为成膜材料，制备载羟喜树碱的超声微泡。第一部分：羟喜树碱超声微泡制剂的制备1.建立紫外含量测定方法：标准曲线方程为A=0.0737C-0.1573（r=0.9994），在5.88μg·.mL-1-11.76μg·mL-1范围内浓度与吸收度线性良好，精密度、回收率、稳定性均符合方法学要求。2.采用改进的复乳化.溶剂挥发法和冷冻干燥技术制备超声微泡。3.采用单因素考察筛选出制备工艺：内水相与油相体积比1：10、初乳超声功率200W、时间90s、复乳的超声功率100W、时间60s、搅拌速度为600rpm，制备出平均粒径433nm的空白微泡。4.以包封率为考察指标，处方实验获得处方优化：HCPT25.0mg、PLGA1.8750g.初乳和外水相体积比1：15、3％PVA，制备出载药微泡的平均包封率为79.93％，载药量为0.4783％的载药微泡。5.初步稳定性考察载药微泡冻干粉在冰箱4℃条件下56d内稳定性良好。第二部分：羟喜树碱超声微泡制剂的药剂学评价1.建立HCPT微泡HPLC体外释放分析测定方法：标准曲线方程为A＝491.77C+1601.8（r=0.9994），在0.4μg·mL-1-8.20μg·mL-1浓度与峰面积线性良好，精密度、回收率、稳定性均符合方法学要求。2.微泡外观圆整光滑，平均粒径为715nm，粒径范围为500-900nm，电荷分布在-40-0mv之间。具有良好的形态和分散性良好。超声照射可使微泡破裂。3.使用超声诊断仪观察微泡具有良好的增加超声信号的能力，体外成像清晰。4.研究未超声和超声照射时两种情况下微泡的体外释放行为。表明了未超声时，微泡释放符合缓释制剂的释放特点，10天基本释放完毕。超声照射时30min能迅速释放药物。第三部分：羟喜树碱超声微泡制剂的体内成像实验使用超声诊断仪观察微泡在超声照射作用时具有显著增强新西兰大白兔体内肝脏部位及肝脏肿瘤部位的超声显影效果。为超声定位靶向给药提供了直接可靠的依据。通过对羟喜树碱超声微泡制剂的研究，总结出本课题四大特色：①国内外学者利用微球[1]、脂质体[2-4]等作为羟喜树碱新的传递系统，以提高治疗效率，但仍存在靶向性不够和受患部位药物的血药浓度低等问题。本课题研究的载HCPT超声微泡制剂弥补这类问题。不仅有效防止羟喜树碱药物的转型，保证药物的最佳治疗效果；还在超声照射下药物可视的定向送达到体内有效部位，并通过超声最大限度的使药物在病变部位大量释放，从而提高病变部位的药物浓度，降低不良反应。对开发具有定点实时可视的靶向性释放，且能够降低毒性的新型抗肿瘤药物制剂进行了尝试。关于羟喜树碱超声微泡的研究国内外未见相关报道。②通过工艺筛选和处方优化，制备得到了包封率相对较高的超声微泡。通过制剂学评价，其形态圆整、分散性好、粒径和电荷电荷分布相对均匀。体外体内显影效果良好。③建立了紫外-可见分光光度法和HPLC测定微泡中HCPT含量测定方法。对微泡的载药量和包封率以及羟喜树碱超声微泡的体外释放特性进行了考察，为超声微泡这一剂型的特性研究奠定了基础。④观察了微泡在体内肝脏及肝脏肿瘤部位的超声成像图，为超声靶向系统的发展起到了一定的作用。本文链接：授权使用：上海海事大学(wflshyxy)，授权号：4bcea9c9-24c5-4760-891f-9dd90089a99e下载时间：2010年8月21日