农产品中苯并咪唑类农药残留量的测定高效液相色谱法-浙江质

ICS67.040C53浙江省地方标准DB33DB33/T705—2008农产品中苯并咪唑类农药残留量的测定高效液相色谱法Determinationofbenzimidazoleinagriculturalproducts-Highperformanceliquidchromatography2008-09-18发布2008-10-18实施浙江省质量技术监督局发布DB33/T705—2008I前言本标准的附录A为资料性附录。本标准由农业部稻米及制品质量监督检验测试中心提出。本标准由并浙江省农业厅归口。本标准起草单位：农业部稻米及制品质量监督检验测试中心、中国水稻研究所、浙江大地农作物产品质量安全检测中心。本标准主要起草人：牟仁祥、陈铭学、闵捷、应兴华、吴俐、许萍、曹赵云。DB33/T705—20081农产品中苯并咪唑类农药残留量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了用反相离子对高效液相色谱法测定农产品中多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵和2－氨基苯并咪唑残留量的方法。本标准适用于农产品中多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵苯并咪唑类农药及代谢物残留量的测定。本标准检出限：本方法最小检出量多菌灵为1.4×10-9g，噻菌灵为1.0×10-9g，甲基硫菌灵为1.8×10-9g，2－氨基苯并咪唑为2×10-9g。若称取25g试样，进样量为40μL，本标准的最低检出浓度多菌灵为0.07mg／kg，甲基硫菌灵为0.09mg／kg，噻菌灵为0.05mg／kg，2－氨基苯并咪唑为0.10mg／kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（neqISO3936）3原理样品中的苯并咪唑类农药用乙腈提取，硫酸镁盐析，沉淀法净化，经反相离子对色谱分离，根据保留时间定性，外标法定量。4试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水为GB/T6682二级。4.1乙腈：色谱纯。4.2甲醇：色谱纯。4.3丙酮：色谱纯。4.4三乙胺：色谱纯。4.5磷酸。4.6硫酸镁：140℃烘烤4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。4.7乙二胺基—N—丙基（PSA）：40μm，60Å。4.8癸烷磺酸钠：纯度≥98％。4.9离子对试剂（4.1mmol/L）：吸取7.0mL磷酸于200mL水中，加入1.0g癸烷磺酸钠，溶解，再加入10.0mL三乙胺，稀释至1000mL。4.10流动相：量取600mL离子对试剂，加入400mL甲醇，搅拌后超声波震荡脱气，此溶液pH值应约为DB33/T705—200822.4。4.11多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵和2－氨基苯并咪唑标准品：纯度≥98％。4.12标准储备溶液（100mg/L）：分别准确称取0.0100g多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵和2－氨基苯并咪唑标准品,用丙酮溶解定容至100mL，0℃～4℃避光保存。4.13混合标准工作溶液：准确吸取适量的标准储备溶液，在30℃～40℃下用氮气缓缓吹干，用流动相配制成浓度系列为0.5mg/L，1.0mg/L，2.0mg/L，5.0mg/L的混合标准工作溶液，0℃～4℃避光保存。5仪器5.1高效液相色谱仪（附可编程紫外检测器）。5.2高速分散机。5.3离心机。5.4天平（感量0.001g）。5.5天平（感量0.0001g）。5.6组织捣碎机。6试样的制备取不少于1000g样品，去除杂物，取可食部分，将样品缩分至250g，匀浆后密封，于4℃冷藏保存。7分析步骤7.1样品处理7.1.1提取称取25g试样（精确到0.01g）于100mL具塞离心管中，加入25.0mL乙腈，高速匀浆2min，加入15g无水硫酸镁，加盖后，剧烈振摇1min，静置30min，2500r/min离心5min，使乙腈和水相分层。7.1.2净化移取1.0mL上清液于2mL离心管中，加入200mg无水硫酸镁和50mgPSA(4.7)，2500r/min离心5min。准确吸取0.5ml上清液，然后加入离子对试剂0.5mL，振荡后过0.45μm滤膜，待测。7.2测定7.2.1色谱参考条件7.2.1.1色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm,5µm。7.2.1.2检测波长：多菌灵275nm，甲基硫菌灵265nm，噻菌灵300nm，2－氨基苯并咪唑275nm。7.2.1.3柱温：45℃。7.2.1.4进样量：50µL。7.2.1.5流速：1.25mL/min。7.2.2样品测定按仪器参考条件，对标准工作液和试样溶液等体积交替进样，根据保留时间定性，外标法定量。8结果计算样品中被测农药含量以质量分数W计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按式(1)计算：W＝fmVc10001000………………………(1)式中：DB33/T705—20083W——样品中被测农药的质量浓度，单位为毫克每千克（mg/kg）；c——试样中被测农药质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V——加入乙腈体积，单位为毫升（mL）；m——试样的质量的数值，单位为克（g）。f——稀释倍数（f=2，样品中加入了离子对试剂，刚好稀释了一倍）。计算结果表示到二位有效数字。样品含量超1mg/kg时表示到三位有效数字。9精密度本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的。重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。9.1重复性在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，被测物的含量及重复性方程见表1、表2和表3。表1添加水平及重复性和再现性方程（基质为大米）化合物名称含量范围（mg/kg）重复性限r再现性R多菌灵0.50-2.00r=0.0063+0.0880mR=0.0024+0.0978m甲基硫菌灵0.50-2.00r=0.0077+0.0822mR=0.0076+0.0840m噻菌灵0.50-2.00r=-0.0062+0.0976mR=-0.0072+0.1006m2-氨基苯并咪唑0.50-2.00r=-0.0196+0.0975mR=-0.0208+0.1006m注:m为两次测定结果的算术平均值表2添加水平及重复性和再现性方程（基质为辣椒）化合物名称含量范围（mg/kg）重复性限r再现性R多菌灵0.50-2.00r=0.0208+0.0613mR=0.0328+0.0568m甲基硫菌灵0.50-2.00r=0.0047+0.0884mR=0.0052+0.0911m噻菌灵0.50-2.00r=-0.0234+0.1051mR=-0.0277+0.1206m2-氨基苯并咪唑0.50-2.00r=0.0161+0.0690mR=0.0164+0.0861m注:m为两次测定结果的算术平均值表3添加水平及重复性和再现性方程（基质为葡萄）化合物名称含量范围（mg/kg）重复性限r再现性R多菌灵0.50-2.00r=0.0009+0.0959mR=0.0035+0.1072m甲基硫菌灵0.50-2.00r=0.0023+0.0895mR=0.0022+0.0992m噻菌灵0.50-2.00r=-0.0135+0.0853mR=-0.0130+0.0859m2-氨基苯并咪唑0.50-2.00r=0.0176+0.0601mR=0.0287+0.0556m注:m为两次测定结果的算术平均值如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2再现性在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，被测物的含量及再现性方程见表1、表2和表3。10准确度本方法在0.5mg/kg~2.0mg/kg添加浓度的回收率在70%~110%。DB33/T705—20084附录A（资料性附录）四种苯并咪唑类农药标准色谱图和空白苹果样品标准添加色谱图min02468101214mAU01020304050609.187-carbendazim10.939-thiophanatemethyl11.593-thiabendazole13.599-2-aminobenzimizole图A.1四种苯并咪唑类农药标准色谱图min02468101214mAU05101520259.169-carbendazim10.929-thiophanatemethyl11.578-thiabendazole13.639-2-aminobenzimizole15.577图A.2空白苹果样品标准添加色谱图