可乐中咖啡因的高效液相色谱法测定

可乐中咖啡因的高效液相色谱法测定基础化学实验中心实验化学四（综合化学实验）色谱法简介混合物随流动相流经色谱柱时，由于个不同组分与固定相的相互作用强弱不同，从而使各组分按先后不同的顺序依次从固定相中流出。这种利用个组分在两相中具有不同分配系数或吸附系数，使混合物中各组分分离的技术称为色谱法。作用：分析分离流动相：携带样品流过固定相的流动体固定相：固定不动的一相按流动相的物态分：气相色谱液相色谱高效液相色谱：在技术上采用了高压泵，高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化。流动相为液体的色谱技术高效液相色谱的分类：高效液相色谱液—液分配色谱法离子交换色谱法液—固分配色谱法空间排阻色谱法流动相极性固定相极性：正相色谱法流动相极性固定相极性：反相色谱法固定相为依附在载体上的液体固定相为吸附剂凝胶渗透色谱法（GPC）液—液分配色谱法载体全多孔型表面多孔型化学键合固定相：用化学反应的方法把有机分子结合到载体表面。（如实验所用的C18即十八烷基键合硅胶）反相色谱优点：能和水兼容高效，稳定适用于大部分物质，应用非常广泛常被用于从极性溶液中或水相中萃取非极性物质分析方法：定性：根据保留值或与其相关的制进行判断，以确定各色谱峰代表何组分定量：检测信号（峰面积、峰高等）大小与组分的量成正比关系标准曲线法归一化法内标法高效液相色谱仪流程示意图实验目的了解液相色谱仪的基本结构和操作；了解反相液相色谱法的原理、优点和应用；掌握标准曲线定量方法。咖啡因又称咖啡碱，化学名称为1，3，7-三甲基黄嘌呤，分子式为C8H10O2N4，属黄嘌呤衍生物，是一种可由茶叶或咖啡中提取而得的生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡中含咖啡因的质量分数约为1.2％~1.8％，茶叶中约含2.0％~4.7％，可乐饮料、APC药品等中均含咖啡因。NNCH3NNOOCH3H3C1.色谱仪:ProStar210（Varian）2.色谱柱：C18柱，200mm×4.6mm3.流动相:甲醇:水(60:40)，流速:1.0mL/min4.检测器:紫外检测器UV345检测波长：275nm主要仪器与试剂：实验步骤：1.配制系列标准溶液：40、60、80、100、120μg/ml；(140μg/ml不用配制）2.样品处理：可口可乐、百事可乐干过滤后（弃去前滤液）取25ml用氯仿萃取（加饱和NaCl和NaOH溶液），脱水过滤配成50ml溶液；3.制作工作曲线：基线平稳后分别进样标准系列溶液5μL，重复一次，纪录峰面积和保留时间；4.样品测定：将配好的样品分别用0.45μm的滤膜过滤后，进样5μL，根据保留时间确定咖啡因色谱峰并记录其峰面积；5.结束试验：清洗所用各仪器，关液相色谱仪及计算机。数据处理：1.根据标准系列溶液的色谱图，绘制咖啡因峰面积与其浓度的关系曲线；2.根据样品中咖啡因色谱峰的面积，由工作曲线得出两种可乐中咖啡因含量。思考1、若标准曲线用咖啡因浓度对峰高作图，能给出准确结果吗？与本实验的标准曲线相比何种优越？为什么？2、在样品干过滤时，为什么要弃去前过滤液？这样做会不会影响实验结果？为什么？3、请设计测定茶叶中的咖啡因时样品的处理方法。主要问题开始实验！