稀土敏化荧光法检测动物源食品中环丙沙星药物残留的研究与应用

稀土敏化荧光法检测动物源食品中环丙沙星药物残留的研究与应用答辩内容第一章绪论第二章实验部分第三章结论致谢第一章绪论氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones，FQs)是一类十分重要的广谱抗菌药物，是继磺胺类药物之后人类在合成抗菌药方面最重要的突破。氟喹诺酮类药物几乎适用于临床常见的多种细菌感染性疾病，很多己经成为畜禽专用的抗菌药物。其中本次实验检验的环丙沙星(CPFX)是其中最常用的药物之一。环丙沙星的结构式FNNNCOOHO对人体的毒性作用导致人类病原菌耐药性的产生对环境的污染作用兽药残留的危害FQs残留的主要检测方法高效液相色谱法1具有灵敏度高、特异性强、定量准确、稳定性和重复性好等优点，缺点是仪器昂贵，样品的前处理较繁琐耗时。2普遍适用于抗菌药物的残留测定，其检测限常高于药物的最高残留量，不够灵敏，因此仅能作为残留的一种筛选方法。微生物法3操作简便、快速和样品容量大的优点,可使用正相或反相板,分辨率较高。缺点是样品的前处理较繁琐耗时。高效薄层色谱法稀土敏化荧光法镧系敏化荧光：属f→f禁戒跃迁的三价镧系金属如Tb3+对200-400nm紫外光的吸收相当弱，因而发光发光效率很低。但当有机配体与Tb3+离子形成配合物后，在高能射线激发下，配体吸收能量后有效的传递给Tb3+从而发射出镧系离子的特征荧光。镧系敏化发光过程中的光的吸收和发射可简单表示如下：L+hν→L*（配体吸收激发光能）L*+Ln3+→L+Ln3+*（能量转移）Ln3+*→Ln3++hν（发射Ln3+特征荧光）稀土敏化荧光法的优点Stokes位移大，克服了因激发和发射光谱重叠带来的误差1发射光谱谱带窄，特异性强2荧光寿命长，比普通荧光物质高几个数量级3荧光强度大，可提高测定的灵敏度4荧光稳定，受外界影响少。5第二章实验部分鸡胗购自虹桥菜市场七氧化四铽Tb4O7（优级纯）环丙沙星标准品C17H18FN3O3（分析纯）Cary100紫外-可见分光光度计920稳态荧光光谱仪970CRT型荧光仪试验材料与仪器实验部分荧光光谱测定Tb3+离子浓度对于实验体系的影响绘制标准曲线计算回归方程样品的测定结论pH值对于实验体系的影响体系激发波长的选择方法回收率的测定体系激发波长的选择2002503003504004505000.000.050.100.150.200.250.300.35Absorbance(a.u.)Wavelength(nm)271nm320nm1.0×10-5mol/L环丙沙星的紫外可见吸收光谱（Cary100紫外-可见分光光度计，美国瓦里安公司）荧光光谱测定350400450500550600650020000400006000080000FluorescenceIntensityWavelength(nm)CPLXCPLX-Tb3+490nm545nm588nm621nm435nm环丙沙星和环丙沙星-铽离子配合物的荧光光谱（920稳态荧光光谱仪，英国爱丁堡公司）CPFX：1.0×10-5mol/L；Tb3+：1.0×10-3mol/L；pH：6.0pH值对于实验体系的影响发射波长555nm下pH对CPFX－Tb3+配合物体系的影响（970CRT型荧光仪，上海三科仪器有限公司）CPFX：1.0×10-5mol/L；Tb3+：1.0×10-3mol/L152025303540455055.566.577.5pH值荧光强度Tb3+浓度对于实验体系的影响荧光强度1020304050607011.522.533.544.555.5Tb3+浓度(1×10-4mol/L)荧光强度Tb3+浓度的影响（970CRT型荧光仪，上海三科仪器有限公司）CPFX：1.0×10-5mol/L；pH：6.4标准曲线与回归方程标准曲线y=0.5169x+5.843R2=0.9862010203040506070020406080100120环丙沙星浓度（1×10-7mol/L）荧光强度Tb3+：1.0×10-3mol/L；pH：6.4CPFX浓度在5.0×10-7mol/L～1.0×10-5mol/L范围内线性关系良好。样品的处理振荡离心上清液样品提取液清洗仪器振荡离心样品样品提取液混匀静置下清液待用正己烷上清液样品的测定350400450500550600650050001000015000200002500030000FluorescenceIntensityWavelength(nm)样品-Tb3+荧光光谱（920稳态荧光光谱仪，英国爱丁堡公司）Tb3+：1.0×10-3mol/L；pH：6.4方法回收率的测定加入量（1×10-5mol/L）测定量（1×10-5mol/L）回收率（%）平均回收率（%）相对标准差（%）Added（1×10-5mol/L）Measured（1×10-5mol/L）Recover（%）AverageRecover（%）RSD2.001.73486.780.22.444.003.13078.26.004.93882.38.005.88073.5关于仪器的差异350400450500550600650020000400006000080000FluorescenceIntensityWavelength(nm)CPLXCPLX-Tb3+490nm545nm588nm621nm435nm445nm436nm555nm482nm—CPFX—CPFX—Tb3+CPFX（1.0×10-5mol/L）CPFX（1.0×10-5mol/L）—Tb3+（1.0×10-3mol/L）920稳态荧光光谱仪英国爱丁堡公司970CRT型荧光仪上海三科仪器有限公司结论本文利用Tb3+离子与氟喹诺酮药物形成配合物后产生的敏化荧光来检测动物源食品中的环丙沙星含量，建立了Tb3+增敏荧光光度法检测鸡肉组织中的环丙沙星的方法。本实验样品前处理简单、快速，实验过程操作方便、快捷、经济，可以满足快速判断CPFX的残留量超标与否的要求，为CPFX药物残留分析提供了极为经济的快速筛选方法。三、致谢本论文是在孙春燕副教授的悉心指导下完成的。导师扎实的理论基础，严谨的学风以及精益求精的科研精神都是我学习的榜样。导师不仅在学习上给予我谆谆教诲，而且在生活的各个方面都给与了我无微不至的关怀和帮助。在此，谨向我的恩师孙春燕副教授致以最诚挚的感谢和祝福。我还要感谢在整个实验过程中给予我很多关心的卢静老师，袁媛老师，叶海清老师，王海波老师，卜秀娟老师，李凤芝老师等，感谢你们对我一直以来的的帮助和指导！