第十六课维生素类药物分析(三)

第十章维生素类药物的分析（三）第四节维生素D的分析CH2HCH3HHHOHCH3CH3CH3HCH3维生素D2（骨化醇、麦角骨化醇）CH2HCH3HHHOHCH3CH3CH3维生素D3（胆骨化醇）1.溶解性脂溶性2.不稳定性含多个双健易被氧化，对酸不稳定3.旋光性性状项下比旋度一、结构与性质4.显色反应5.紫外吸收特征性状项下吸收系数二、鉴别试验（一）显色反应1.与醋酐-浓硫酸反应Ch.P（2005）维生素D2Ch.P（2005）【鉴别】（1）取本品约0.5mg，加三氯甲烷5ml溶解后，加醋酐0.3ml与硫酸0.1ml，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后成绿色。维生素D3Ch.P（2005）【鉴别】（1）取本品约0.5mg，加三氯甲烷5ml溶解后，加醋酐0.3ml与硫酸0.1ml振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色。2.与三氯化锑反应BP3.其他显色反应维生素D+三氯化锑→橙红色→粉红色（二）IRCh.P（2005）维生素D2Ch.P（2005）【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集452图）一致。（三）维生素D2、D3的区别反应维生素D与乙醇+硫酸反应维生素D2显红色，max在570nm维生素D3显黄色，max在495nm三、杂质检查维生素D2中麦角甾醇的检查灵敏度法维生素D2Ch.P（2005）【检查】麦角甾醇取本品10mg，加90%乙醇2ml溶解后，加洋地黄皂苷溶液（取洋地黄皂苷20mg，加90%乙醇2ml，加热溶解制成）2ml，混合，放置18小时，不得发生浑浊或沉淀。四、含量测定HPLC药典附录维生素D测定法共有三法第一法适用于无维生素A醇及其它杂质干扰时正相色谱、内标法1.色谱条件色谱柱硅胶流动相正己烷–正戊醇（997:3）内标邻苯二甲酸二甲酯2.系统适应性试验维生素D3对照品维生素D3前维生素D3反式维生素D3速甾醇D3光照△目的获得待测成分及各种干扰成分色谱峰，检查分离度是否符合规定3.计算校正因子（对照品为维生素D3）1f进样对照内标（1）维生素D校正因子（f1）rrssmAmAf//1（2）前维生素D折算成维生素D的校正因子（f2）srrsrsmAAmfmAf2112进样冷至室温二叔丁基对甲酚，对照品内标物℃、，排空气、密塞通hN5.1902624.计算含量维生素D及前维生素D折算成维生素D的总量（mi）ssiiiAmAfAfm/)(2211单位=0.025µg第二法适用于有维生素A醇及其它杂质干扰时分离净化皂化提取反相色谱系统按第一法第三法适用于按第二法处理后前维生素D仍被干扰的样品对照第二法净化后样品维生素D外标法计算维生素D含量维生素D2Ch.P（2005）【含量测定】精密称取本品25mg，置100ml棕色量瓶中，加三甲基戊烷80ml，避免加热，用超声处理1分钟使溶解，加三甲基戊烷至刻度，摇匀；精密量取上述溶液与内标溶液各5ml，置50ml棕色量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀，作为供试品溶液。照维生素D测定法（附录ⅦK第一法）测定，即得。苯并－二氢吡喃醇第五节维生素EOHOOR1HOR2CH3名称R1R2相对活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1***生物效价右旋体：消旋体=1.4：10（天然品）（合成品）CH3COOCH3CH3CH3CH3CH3CH3H3CH3COdl－α－生育酚醋酸酯结构与性质一、苯环+二氢吡喃环+饱和烃链1、易溶于有机溶剂，不溶于水2、UV3、酯键易水解]O[orOHHVitE醌型化合物生育酚△]O[HNO3VitE生育红生育酚75℃15′（一）硝酸反应橙红色鉴别二、OOCH3C16H33H3CCH3O（橙红色）生育红CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚HNO3强氧化剂取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75℃加热15分钟，溶液应显橙红色。三氯化铁－联吡啶反应红色生育醌对生育酚联吡啶2FeKOHFeVitE3△[O]（二）OOH3CCH3OHCH3C16H33CH3CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚对-生育醌+3Fe[O]弱氧化剂红色+23Fe3++2FeNNNN=41.0～45.5%cmE11λmax=284nmλmin=254nm0.01%无水乙醇中UV法（三）维生素EUV图薄层板硅胶G展开剂环己烷-乙醚（4：1）显色剂硫酸（105℃5′）VitERf=0.7TLC法（四）三、特殊杂质1.酸度检查制备过程中引入的游离羧酸，酸碱滴定法2.游离生育酚的检查硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄→灰紫）生育醌对生育酚3422CeCe利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈原理（一）试剂（二）nCMT（M生育酚=430.8））（ml/mg154.228.43001.0T例取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过1.0ml。%100WTV%限量≤2.15％%15.2%1001.0002154.00.1%限量限量（三）药典规定消耗硫酸铈液（0.01mol/L）≤1.0ml设：应消耗硫酸铈液≤Vml0.01×1.0＝实际浓度×V硫酸铈实际浓度）（0.101.0mlV若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L，应重新计算硫酸铈的消耗量例Ce(SO4)2=0.01020mol/L）（）（ml....mlV98001020001010四、含量测定GC法（一）GC特点1、选择性好灵敏度高速度快分离效能好挥发性低、不稳定、极性强→衍生化易受样品蒸气压限制载气→N2固定液→硅酮（OV-17）担体→硅藻土或高分子多孔小球柱温→265℃检测器→氢火焰离子化检测器(FID)内标→正三十二烷n≥500R≥2VitE测定的色谱条件2、内标法加校正因子内标法供试液（样品+内标）内标物对照液（对照+内标）是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分的量接近对样内对内样样样内内对对内内相对WWAAAAWAWAWAWAf校正因子：1KAA内对2KAA内样%WWKK%VitE10012稀释度稀释度样对实际工作中的计算方法例内标液取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液对照液精密称取VitE对照品0.2011g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul注入GC仪，测定，计算供试液精密称取供试品0.1998g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul注入GC仪，测定，计算对照液内对AA供试液805741296513内样AA0.3730.368%.%....%VitE本品含C31H52O3应为96.0~102.0%BPGC内标正三十二烷R≥1.4USPGC内标十六酸十六醇酯R≥1.0JPHPLC外标dl－α－生育酚R≥1.4利用生育酚的易氧化性还原型氧化型二苯胺（亮黄→灰紫）生育醌—对生育酚溶解）（无水乙醇SOCeSOHVitE△原理1、铈量法（二）指示剂2、.S1025滴水乙醇防止Ce(SO4)2的水解减慢生育酚被O2氧化速度C、酸性条件Ce(SO4)2易溶于水生育酚易溶于醇B、溶剂分子量较大，反应慢易被O2氧化A、反应速度H2SO4讨论3、%10001.010025WC00236.0V%100WFTV%实际含量）（ml/mg36.2247201.0T含量计算4、MVitE=472样品→dl－α－生育酚固定相→十八烷基硅烷键合硅胶流动相→甲醇-水（49：1）检测波长→292nmR＞2.6RSD≤0.8%对样对生育酚HHWWJP-RP-HPLC法（外标法）（三）测定对象→血清中VitA和VitE固定相→十八烷基硅烷键合硅胶流动相→甲醇-水（96：4）检测波长→8′前330nm8′后292nm样对对样样稀释度稀释度WAAWRP-HPLC法（外标法）（四）108．在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、脱羧、失水后，加入吡咯即产生蓝色产物的药物应是A.氯氮卓B.维生素AC.普鲁卡因D.盐酸吗啡E.维生素C99：88．中国药典（2000年版）采用以下何法测定维生素E含量A.酸碱滴定法B.氧化还原法C.紫外分光光度法D.气相色谱法E.非水滴定法98：79．中国药典（2000年版）采用气相色谱法测定维生素E含量，内标物质为A.正二十二烷B.正二十六烷C.正三十烷D.正三十二烷E.正三十六烷99：77.下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是A.维生素AB.维生素B1C.维生素CD.维生素DE.维生素E97：77．既具有酸性又具有还原性的药物是A.维生素AB.咖啡因C.苯巴比妥D.氯丙嗪E.维生素C99m：132.维生素C的鉴别反应，常采用的试剂有A.碱性酒石酸铜B.硝酸银C.碘化铋钾D.乙酰丙酮E.三氯醋酸和吡咯99m：84.测定维生素C注射液的含量时，在操作过程中要加入丙酮，这是为了A.保持维生素C的稳定B.增加维生素C的溶解度C.使反应完全D.加快反应速度E.消除注射液中抗氧剂的干扰98：85.能发生硫色素特征反应的药物是A.维生素AB.维生素B1C.维生素CD.维生素EE.烟酸97：81．使用碘量法测定维生素C的含量,已知维生素C的分子量为176.13，每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于维生素C的量为A.17.61mgB.8.806mgC.176.1mgD.88.06mgE.1.761mg97：[121—125]（99：[121—125]）可发生以下反应或现象的药物为A.维生素B1B.维生素CC.两者均能D.两者均不能121.与碘化汞钾生成黄色沉淀122.麦芽酚反应123.在乙醚中不溶124.与2,6-二氯靛酚反应使颜色消失125.硫色素反应ADCBA115．维生素A的鉴别试验为A.三氯化铁反应B.硫酸锑反应C.2,6-二氯靛酚反应D.三氯化锑反应E.间二硝基苯的碱性乙醇液反应77．中国药典（2000年版）规定维生素A的测定采用紫外分光光度法（三点校正法），此法又分为A．等波长差法B．等吸收度法C．6/7A法D．差示分光法E．双波长法78．维生素E的鉴别试验有A．硫色素反应B．硝酸氧化呈色反应C．硫酸-乙醇呈色反应D．碱性水解后加三氯化铁乙醇液与2,2-联吡啶乙醇液呈色反应E．Marquis反应80.下面哪些描述适用于维生素AA.分子具有长二烯醇侧链，易被氧化B.具有较长的全反式共轭多烯结构C.含酯键，经水解后产生苯并二氢吡喃衍生物，易被氧化D.与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳定兰色，很快转变为紫红色E.样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加热后，呈橙红色维生素A与反应即显蓝色，渐变成紫红色；反应需在条件下进行。（）维生素A分子中由于具有共轭多烯侧链，因而其性质很稳定，不易被氧化变质。三氯化锑无水×维生素E在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离，当有氧或其他氧化剂存在时，则进一步被氧化成醌型化合物，尤其在碱性下更易发生。生育酚维生素B1的噻唑环在介质中可开环，再与嘧啶环上氨基缩合环合，然后经等氧化剂氧化生成具有荧光的，加荧光消失，加荧光又显出；此反应称为反应。碱性铁氰化钾硫色素酸碱硫色素维生素C是元弱酸，具有强性，易被氧化剂氧化，常用作其它制剂的剂。一还原抗氧维生素E中游离生育酚的检查时规定消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L）不得过1.0ml，现硫酸铈滴定液的实际浓度为0.01053mol/L，应不得超过多少ml？A.0.95B.0