药品检验方法验证和稳定性研究要求探讨-XXXX423-北京

药品检验方法验证和稳定性研究要求探讨杨仲元(广州市药品检验所)2011年4月23日北京[e-mail]药品检验方法验证前言药品检验方法验证的重要性设计的检验方法应能达到预期的效果，保证测定结果准确可靠，确保药品的安全有效检验方法验证的文件要求:如新版药品生产质量管理规范、药品审评中心和药典的指导原则等中国药典2000-2010年版二部附录XIXA药品质量标准分析方法验证指导原则药品审评中心-化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则美国药典通则1225药典分析方法验证、通则1226药典分析方法确认均依照ICHQ2(R1),ValidationofAnalyticalProcedures:TextandMethodology分析方法验证：建立方法要验证，修订方法要验证分析方法确认：应用方法时要确认方法是否适用。USP通则1226说得比较清楚药品质量标准分析方法验证关于分析方法验证的目的，中国药典为“证明采用的方法适合于相应检测要求，在起草药品质量标准时，分析方法需要验证；在药物生产方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法也需进行验证。方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草说明中”；ICH验证的目的ICH需验证的分析类型ICH验证的分析特性(验证项目)中国药典对方法验证的具体要求：需验证的分析项目有：鉴别试验，杂质定量检查或限度检查，原料药或制剂中有效成分含量测定，以及制剂中的其他成分（如防腐剂等）的测定。药品溶出度、释放度等功能检查中，其溶出量等的测试方法也应作必要验证。验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。视具体方法拟订验证的内容。附表中列出的分析项目和相应的验证内容可供参考。药品质量标准分析方法验证一.准确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。准确度应在规定的范围内测试。药品质量标准分析方法验证.含量测定方法的准确度原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定结果进行比较。制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定结果进行比较。如该分析方法已经测试并求出了精密度、线性和专属性，准确度有时也可推算出来，可不必再做。药品质量标准分析方法验证.杂质定量测定的准确度可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。在不能测得杂质或降解产物的响应因子或对原料药的相对响应因子情况下，可用原料药的响应因子。应明确表明单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（%）或面积比（%）。药品质量标准分析方法验证.数据要求在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价，例如，设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试溶液，进行测定。应报告已知加入量的回收率（%），或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。药品质量标准分析方法验证注意准确度测定的范围，如制剂的含量测定，其准确度试验应覆盖含量限度的范围。一般稍微放宽，约为中值的±20%。加样回收，在制剂辅料能获得的情况下，一般做模拟回收。药品质量标准分析方法验证二精密度精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。在相同条件下，由一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性；在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度，称为中间精密度；在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度，称为重现性。含量测定和杂质的定量测定应考虑方法的精密度药品质量标准分析方法验证.重复性在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价，例如，设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试溶液，进行测定。或100%的浓度水平，用至少测定6次的结果进行评价。药品质量标准分析方法验证.中间精密度为考察随机变动因素对精密度的影响，应设计方案进行中间精密度试验。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。药品质量标准分析方法验证.重现性当分析方法将被法定标准采用，应进行重现性试验，例如，建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果。协同检验的目的、过程和重现性结果均应记载在起草说明中。应注意重现性试验用的样品本身的质量均匀性和贮存运输中的环境影响因素，以免影响重现性结果。药品质量标准分析方法验证.数据要求均应报告标准偏差、相对标准偏差和可信限。注意中间精密度和重现性是对同一批样品不同条件下测定的比较。药典标准修订一定要求做重现性，一定是同一批均匀样品。药品质量标准分析方法验证三专属性专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法均应考察其专属性。如方法不够专属，应采用多个方法予以补充。药品质量标准分析方法验证鉴别反应应能与可能共存的物质或结构相似化合物区分。不含被测成分的样品，以及结构相似或组分中的有关化合物，应均呈负反应。药品质量标准分析方法验证含量测定和杂质测定色谱法和其他分离方法，应附代表性图谱，以说明方法的专属性，并应标明诸成分在图中的位置。色谱法中的分离度应符合要求在杂质可获得的情况下，对于含量测定，试样中可加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并可与未加杂质或辅料的试样比较测定结果。对于杂质测定也可向试样中加入一定量的杂质，考察杂质能否得到分离。药品质量标准分析方法验证在杂质或降解产物不能获得的情况下，可将含有杂质或降解产物的试样进行测定，与另一个经验证了的或药典方法比较结果。用强光照射，高温，高湿，酸、碱水解，或氧化的方法进行加速破坏，以研究可能的降解产物和降解途径。含量测定方法应比对二法的结果，杂质检查应比对检出的杂质个数，必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行纯度检查。药品质量标准分析方法验证专属性注意：研究时应采用不同方法和条件，便于选择更专属的方法。杂质分析指导原则中已有叙述在杂质分析指导原则中说到stability-indicating，在有降解产物存在时，方法应经选择，再进行验证药品质量标准分析方法验证四检测限检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。药品的鉴别试验和杂质检查方法，均应通过测试确定方法的检测限。常用的方法如下：1.非仪器分析目视法用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。药品质量标准分析方法验证2.信噪比法用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为3：1或2：1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。3.数据要求应附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。药品质量标准分析方法验证有的可用斜率标准差法2)ˆ(2nyySiiixy药品质量标准分析方法验证五定量限定量限系指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定方法的定量限。常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为10：1时相应浓度或注入仪器的量确定定量限。药品质量标准分析方法验证六线性系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列供试样品的方法进行测定，至少制备5份供试样品。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。药品质量标准分析方法验证数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图药品质量标准分析方法验证七范围系指能达到一定精度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。范围应根据分析方法的具体应用，和线性、准确度、精密度结果和要求确定。原料药和制剂含量测定，范围应为测试浓度的80%~120%；制剂含量均匀度检查，范围应为测试浓度的70%~130%药品质量标准分析方法验证根据剂型特点，如气雾剂、喷雾剂，范围可适当放宽；溶出度或释放度中的溶出量测定，范围应为限度的±20%，如规定了限度范围，则应为下限的－20%至上限的＋20%；杂质测定，研究时，范围应根据初步实测，拟订出规定限度的±20%。如果含量测定与杂质检查同时进行，用百分归一化法，则线性范围应为杂质规定限度的－20%至含量限度（或上限）的＋20%。药品质量标准分析方法验证八耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为把方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。药品质量标准分析方法验证典型的变动因素有：被测溶液的稳定性，样品的提取次数、时间等。液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成和pH值，不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱，柱温，流速等。气相色谱法变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体，柱温，进样口和检测器温度等。USP色谱条件可调节范围可供参考如:pHofMobilePhase(HPLC):ThepHoftheaqueousbufferusedinthepreparationofthemobilephasecanbeadjustedtowithin±0.2unitsofthevalueorrangespecified.原料药与制剂的稳定性研究原料药与药物制剂稳定性研究首先应知道稳定性试验的重要性1药物研究，特别是药物制剂研究需要进行稳定性试验，进行处方筛选2选择合适包装需要进行稳定性试验3研究药品质量标准需要进行稳定性试验4研究药品的运输贮存需要进行稳定性试验5生产变更需要进行稳定性试验稳定性试验是一件对各个药品长期进行的工作原料药与药物制剂稳定性研究所以，药品研究机构和药品生产单位应认真做好药品稳定性试验，科学进行药品稳定性试验的设计，实施；真实，完整做好稳定性试验记录，保存好各种原始谱图；对稳定性试验的结果进行分析并以此完善质量标准，包装和贮存条件，保证药品在货架效期内安全有效。原料药与药物制剂稳定性研究要明确各种稳定性试验的目的影响因素试验加速稳定性试验长期稳定性试验在规定贮存条件下的稳定性考察原料药与药物制剂稳定性研究药品稳定性试验之所以重要，是因为，通过稳定性试验，可预测原料药的再测试周期和制剂的货架效期，以保证效期内药品具有其应有的质量；可确定药品的包装和贮存条件；可确定可能存在的降解产物，为制订或修订该药品的质量标准提供依据，以保证药品质量可控。原料药与药物制剂稳定性研究药品的稳定性是指原料药及制剂保持其物理、化学、生物学和微生物学性质的能力。稳定性研究目的是考察原料药或制剂的性质在温度、湿度、光线等条件的影响下随时间变化的规律，为药品的生产、包装、贮存、运输条件和有效期的确定提供科学依据，以保障临床用药安全有效。稳定性研究是药品质量控制研究的主要内容之一，与药品质量研究和质量标准的建立紧密相关。原料药与药物制剂稳定性研究稳定性试验的条件稳定性试验的条件应与该药品使用地区的气候条件相应。世界气候区的划分为：I区（温带），II区（亚热带，可能高湿），III区（热带，干燥），IV区（热带，潮湿）。平均气候条件见表I,II.原料药与药物制剂稳定性研究表1平均气候条件，室外和仓库内测定数据气候区室外℃%RH仓库℃%RHI19.97518.745II17.07021.152III24.43926.054IV26.57728.470原料药与药物制剂稳定性研究表2平均气候条件，计算数据和推定贮存条件气侯区计算数据℃℃MKT%RH(平均