藏药大黄中脂肪酸含量的高灵敏测定

“挑战杯”系列作品1目录作品申报表A.申报者情况（集体项目）……………………………………………4B.申报作品情况………………………………………………………5C．项目的立项依据及当前国内外同类课题研究水平概述………11D.推荐者情况及对作品的说明……………………………………12E．学院评审委员会预审意见………………………………………14F.曲阜师范大学学校竞赛组委会终审意见………………………14正文摘要…………………………………………………………………15Abstract………………………………………………………………161.实验原理……………………………………………………………171.1荧光法………………………………………………………171.2BCETS合成………………………………………………………172.实验部分……………………………………………………………182.1仪器与试剂…………………………………………………………182.2实验方法………………………………………………………182.2.1HPLC标准液制备……………………………………………182.2.2HPLC标品衍生及标准曲线制作……………………………192.2.3样品HPLC供试液制备……………………………………192.2.4色谱条件……………………………………………………19“挑战杯”系列作品23.结果与讨论…………………………………………………………203.1衍生条件的优化………………………………………………203.2色谱分离条件的优化…………………………………………203.3HPLC稳定性与重现性………………………………………213.4线性回归方程与检出限………………………………………224.大黄中脂肪酸的数据分析………………………………………224.1三种大黄中脂肪酸衍生物的色谱分离图…………………………224.2三种大黄中21中脂肪酸相对峰高值…………………………234.3大黄中脂肪酸含量数据分析…………………………………255.总结………………………………………………………………26参考文献…………………………………………………………26致谢………………………………………………………………27“挑战杯”系列作品3序号：编码：“挑战杯”曲阜师范大学第十一届课外学术科技作竞赛作品申报书作品名称：藏药大黄中脂肪酸含量的高灵敏测定学校全称：曲阜师范大学申报者姓名：付强张敬帅赵晓霞张家跃刘翠翠类别：□自然科学类学术论文□哲学社会科学类社会调查报告和学术论文□科技发明制作A类□科技发明制作B类“挑战杯”系列作品4A．申报者情况（集体项目）申报者代表情况姓名付强性别男出生年月199103学校曲阜师范大学系别、专业、年级化学与化工学院化学2010学历本科学制肆入学时间2010年9月4日作品名称藏药大黄中脂肪酸含量的高灵敏测定联系方式15020725331其他作者情况姓名性别年龄学历所在单位联系方式张敬帅男22本科曲阜师范大学18766858525赵晓霞女22本科曲阜师范大学15064723747张家跃男21本科曲阜师范大学18853718118刘翠翠女22本科曲阜师范大学18853718115资格认定学院学籍管理部门意见以上作者是否为2012年10月1日前正式注册在校的全日制非成人教育、非在职的高等学校专科生、本科生、硕士研究生或博士研究生。□是□否（签章）年月日院系负责人或导师意见本作品是否为课外学术科技或社会实践活动成果□是□否负责人签名：年月日“挑战杯”系列作品5B．申报作品情况（自然科学类学术论文）作品全称藏药大黄中脂肪酸含量的高灵敏测定作品所属领域(E)A．机械与控制（包括机械、仪器仪表、自动化控制、工程、交通、建筑等）B．信息技术（包括计算机、电信、通讯、电子等）C．数理（包括数学、物理、地球与空间科学等）D．生命科学（包括生物、农学、药学、医学、健康、卫生、食品等）E．能源化工（包括能源、材料、石油、化学、化工、生态、环保等作品撰写的目的和基本思路一、撰写目的大黄是一味重要的藏药，大黄脂类成分中棕榈酸含量为38.17％，亚油酸占10.47％，棕榈酸具抗菌作用，亚油酸具有降血脂作用。本实验的目的是通过藏药大黄中脂肪酸含量的高灵敏测定，开发大黄的药用价值，为深入研究与开发藏药价值及其批量生产奠定理论基础。二、基本思路提取目标组分—纯化并置于适宜体系环境—运用各种方法检测分析。“挑战杯”系列作品6项目的研究目标、研究内容以及拟解决的关键问题一、总体目标在已有的研究基础上，灵活运用能够精确测量脂肪酸含量的科学方法，如高效液相色谱法、超声波法、荧光分析法等。二、研究内容以藏药中的大黄作为研究对象，以高效液相色谱法、超声波法、荧光分析法为主要手段，测定不同种类的大黄中含有的脂肪酸含量。三、拟解决的关键问题(1)超声波提取植物中有效成分的优势；(2)荧光探针的设计合成；(3)试验中加入碳酸钾的作用是什么；(4)实验中为什么要求要吹干，保证纯净干燥的有效成分。拟采取的研究方法、技术路线和实验方案及可行性分析一、研究方法柱前衍生-高效液相色谱荧光检测法(HPLC-FLD)分析游离脂肪酸具有较高的灵敏度、准确度和重现性。本实验采用新制备的2-(11H-苯[a]咔唑)乙基对甲苯磺酸酯(BCETS)作为柱前衍生试剂,建立了藏药大黄中游离脂肪酸的分析方法。二、技术路线和实验方案荧光法：使被激发分子实现去活化。高效液相色谱法：HPLC标品衍生及标准曲线制作BCETS对脂肪酸的衍生；制备HPLC标准液；使用EclipseXDB-C8高效液相色谱荧光检测法分析游离脂肪酸(BCETS)“挑战杯”系列作品7色谱柱进行梯度洗脱。三、可行性分析(A)技术可行性分析本实验技术要求比较高，安全性和可靠性都较强，但通过前面的综合分析可以知道，从技术上来说，是可行的。实验主要采用高效液相色谱仪荧光法测定，精细、准确，为实验提供了充足的前提条件。在高效液相色谱的发展过程中，有以下几项突破性工作：第一，色谱柱的改进和完善，主要包括固定相填充微粒粒度的改进和流动相溶剂的选择；第二，仪器方面的改进工作，加入了高压泵，缩短了分离时间，高效液相色谱有效塔板数比传统液相色谱提高了数百倍，提高了分离效率；第三，与计算机联用之后，自动化程度大大提高。(B)经济可行性本实验中最为主要的高效液相色谱法中由于色谱柱可回收利用，高效节能节约成本，是此类实验不错的选择。“挑战杯”系列作品8作品的科学性、先进性及独特之处一、作品科学性创新运用声波辐射法，减少实验误差。二、作品先进性运用高效液相色谱仪，灵敏度、速度、分辨度高，色谱柱可回收利用，高效节能。三、作品独特之处本实验通过结合运用声波辐射法与高效液相色谱仪，既达到了减少实验误差的科学性，又实现了高效节能的先进性，是本实验的一大特色。作品的实际应用价值和现实指导意义一、理论价值现阶段藏药研究的首要目标在于研究藏药资源开发的药学基础，在此之上结合临床实际研制符合现代需要的藏药新药。大黄是一味重要的藏药，青藏高原分布大黄属植物28种，其中藏药应用的有21种。大黄中含有脂肪酸：如己酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸，这些脂肪酸，有游离与结合两种形态。大黄脂类成分中棕榈酸含量为38.17％，亚油酸占10.47％，棕榈酸具抗菌作用，亚油酸具有降血脂作用。二、现实意义通过对大黄中脂肪酸含量的高分子测定，开发大黄的医用价值，为其批量生产提供理论基础，对藏药的开发与研究有着重大的现实意义。“挑战杯”系列作品9作品摘要摘要:藏药大黄是多种蓼科大黄属的多年生植物的合称，也是中药材的名称。在中国地区的文献里，“大黄”指的往往是马蹄大黄。在中国，大黄主要作药用，但在欧洲及中东他们的大黄往往指另外几个作食用的大黄属品种，茎红色，气清香，味苦而微涩，嚼之粘牙，有砂粒感。秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖。除去细根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。中药大黄具有攻积滞、清湿热、泻火、凉血、祛瘀、解毒等功效。采用柱前衍生-高效液相色谱荧光检测法(HPLC-FLD)分析了藏药大黄中的游离脂肪酸。用荧光衍生试剂2-(11H-苯[a]咔唑)乙基对甲苯磺酸酯(BCETS)作为柱前衍生化试剂对21种脂肪酸标准品进行衍生,经梯度洗脱实现了21种游离脂肪酸BCETS衍生物的完全分离,使用外标法定量,建立了同时测定21种脂肪酸绝对含量的方法,对藏药大黄中的游离脂肪酸进行了分析。关键词：高效液相色谱BCETS荧光大黄脂肪酸作品在何时、何地、何种机构举行的会议或报刊上发表登载、所获奖励及评定结果无“挑战杯”系列作品10请提供对于理解、审查、评价所申报作品，具有参考价值的现有对比数据及作品中资料来源的检索目录参考文献：[1]曹凯光.食品科技,2002,1:15[2]朱丽琼,朱春敬,王亚军,等.广东农业科学,2009,11:115[3]李子璇,秦公伟,江海,等.食品与发酵工业,2009,36(12):137[4]方志娥,陆巍,曲斐,等.重庆医科大学学报,2010,35(5):699[5]XiangpingC,TieZ,YuanyuanZ,etal.Chromatogr,2009,69:645[6]TakeshiF,NorikoU,TomofumiS,etal.JPharmBiomedAna,l2003,30:1655[7]TakadateA,MasudaT,MurataC,etal.AnalSc,i1992,8:695[8]YoshidaT,UetakeA,YamaguchiH,etal.AnalBiochem,1988,173:70调查方式□走访□问卷□现场采访□人员介绍□个别交谈□亲临实践□会议□图片、照片□书报刊物□统计报表□影视资料□文件□集体组织□自发□其它主要调查单位及调查数量省（市）县（区）乡（镇）调查数量邮编“挑战杯”系列作品11C．项目的立项依据及当前国内外同类课题研究水平概述现阶段藏药研究的首要目标在于研究藏药资源开发的药学基础，在此之上结合临床实际研制符合现代需要的藏药新药。大黄是一味重要的藏药，青藏高原分布大黄属植物28种，其中藏药应用的有21种。大黄中含有脂肪酸：如己酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸，这些脂肪酸，有游离与结合两种形态。大黄脂类成分中棕榈酸含量为38.17％，亚油酸占10.47％，棕榈酸具抗菌作用，亚油酸具有降血脂作用。目前，国内外在脂肪酸微量测定的领域中使用的方法主要有：索氏提取（GB/T5009.6—2003）、甲酯化方法（GB/T17376—1998）、气相色谱法、高效液相色谱法等。本实验主要采用高效液相色谱法进行定量分析，试验中所采用的仪器有：1100型高效液相色谱(美国Agilent公司)配备四元梯度泵,在线真空脱气机,荧光检测器,自动进样器;EclipseXDB-C8色谱柱(4.6×150mm,5Lm);KQ-100DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器公司)。2-(11H-苯[a]咔唑)乙基对甲苯磺酸酯,21种脂肪酸标准标品,色谱纯乙腈,其他试剂均为分析纯,超纯水制备系统。N,N-二甲基甲酰胺(DMF)经减压蒸馏后使用，为实验奠定了一定的实验基础，使实验的精确度有了一定的提升。“挑战杯”系列作品12“挑战杯”系列作品13“挑战杯”系列作品14E．学院评审委员会预审意见F．曲阜师范大学学校竞赛组委会终审意见“挑战杯”系列作品15藏药大黄中脂肪酸含量的高灵敏测定摘要:藏药大黄是多种蓼科大黄属的多年生植物的合称，也是中药材的名称。在中国地区的文献里，“大黄”指的往往是马蹄大黄。在中国，大黄主要作药用，但在欧洲及中东，他们的大黄往往指另外几个作食用的大黄属品种，茎红色，气清香，味苦而微涩，嚼之粘牙，有砂粒感。秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖。除去细根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。中药大黄具有攻积滞、清湿热、泻火、凉血、祛瘀、解毒等功效。采用柱前衍生-高效液相色谱荧光检测法(HPLC-FLD)分析了藏药大黄中的游离脂肪酸。用荧光衍生试剂2-(1