02 PCR实验室基本设置要求 张琼

PCR实验室基本设置要求张琼主要内容一、实验室生物安全二、PCR实验室布局设置严重生物安全事故案例•2003年9月新加坡实验室人员感染SARS病毒•2003年9月台湾实验室人员感染SARS病毒•2004年4月我国国家CDC的SARS实验室研究生感染SARS病毒并传染给别人实验室生物安全法规•2003年12月《实验室生物安全通用要求》通过了专家审定，并很快申报国家标准•2003年SARS期间，有关部门制订了《传染性非典型肺炎病毒研究实验室暂行管理办法》•2004年11月12日我国发布了《病原微生物实验室生物安全管理条例》一、实验室生物安全•生物危险度的分级•生物安全实验室分级•生物安全柜分级1.生物危险（risk）的分级•I级：个体和群体低危险•II级：中等个体危险，有限群体危险•III级：高个体危险，低群体危险•IV级：高度的个体和群体危险•第一级：不引起健康成年人疾病•第二级：可通过破损皮肤、消化道及粘膜暴露等方式引起人类疾病•第三级：本土或外来的微生物，通过吸入途径暴露时可以造成严重或潜在致死性疾病•第四级：可以引起严重且威胁生命的人类疾病，可通过气溶胶传播，或相关的传播危险性不明的微生物•生物安全防护实验室根据不同的微生物和防护要求分为四个生物安全防护级别美国CDC对微生物指导性分级我国对病原微生物的分类•第一类：能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物•第二类：能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物•第三类：能够引起人类或者动物疾病；不构成严重危害，传播风险有限；具备有效治疗和预防措施•第四类：通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物•第一类和第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物2.生物安全实验室分级•生物安全是防范处理微生物及其毒素对人体危害的综合性措施•危害的来源：对医学实验室主要是标本实验室生物安全防护•实验室工作人员所处理的实验对象含有致病的微生物及其毒素时，通过在实验室设计建造、使用个体防护装置、严格遵从标准化的工作及操作程序和规程等方面采取综合措施，确保实验室工作人员不受实验对象侵染，确保周围环境不受其污染实验室生物安全防护分级一级生物安全防护实验室，简称BSL1或P1二级生物安全防护实验室，简称BSL2或P2三级生物安全防护实验室，简称BSL3或P3四级生物安全防护实验室，简称BSL4或P4一级最低，四级最高典型的一级生物安全水平实验室（图片由CUH2A，Princeton，NJ，USA提供）典型的二级生物安全水平实验室（图片由CUH2A，Princeton，NJ，USA提供）。在生物安全柜中进行可能发生气溶胶的操作程序。门保持关闭并贴上适当的危险标志。潜在被污染的废弃物同普通废弃物隔开。BIOHAZARD生物危害标识典型的三级生物安全水平实验室（图片由CUH2A，Princeton，NJ，USA提供）。实验室与公共通道分开并通过缓冲间（双门入口或二级生物安全水平的基础实验室）或气锁室进入。处理废弃物前，在实验室内先进行高压灭菌以清除污染。应有非手控的水槽。形成向内气流而且涉及感染性材料的全部工作应在生物安全柜中进行。四级生物安全水平实验室•在加拿大仅有一个4级实验室(CanadianCentreforHumanandAnimalHealthinWinnipeg,Man.)•设计要求非常苛刻，要把工作人员完全与感染物质隔离开3.生物安全柜生物安全柜（biosafetycabinet）是处理危险性微生物时所用的箱型空气净化安全装置3.生物安全柜分级I级生物安全柜（classIbiosafetycabinet）至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，外部空气由操作窗吸进，而不可能由操作窗口逸出；100%由密接排气导管排到室外（类似于通风厨）工作状态时保证工作人员不受侵害，但不保证实验对象不受污染。现已很少使用IIIIII至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部为观察窗，下部为操作窗口。外部空气由操作窗吸进，而不可能由操作窗口逸出工作状态下遵守操作规程时既保证工作人员不受侵害，又保证实验对象及环境不受污染Ⅱ级生物安全柜（classⅡbiosafetycabinet）IIIIIIII级生物安全柜根据结构以及气流分配不同主要是外排气流不同分为：A1型:（0.38m/s，30%排在室内）A2型:（0.5m/s，30%外排，原B3型）B1型:（0.5m/s，70%接管道外排）B2型:（0.5m/s，100%接管道外排）Ⅲ级生物安全柜（classⅢbiosafetycabinet）至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。正面上部为观察窗，下部手套箱式操作口箱内对外界保持负压可确保人体与柜内物品完全隔绝IIIIII隔离器美国国立卫生研究所美国疾病控制中心病源操作一级屏障二级屏障P1BSL-1不会经常引发健康成人疾病标准的微生物操作不要求开放实验台、洗手池P2BSL-2人类病源菌，因皮肤伤口、吸入、黏膜曝露而发生危险BSL—1操作外加：1、限制进入2、有生物危险警告标志3、“锐器”安全措施4、生物安全手册，其中规定废物消毒和医疗观察1级、2级生物安全柜实验服、手套、若需要则采取面部保护措施BSL-1外加：高压灭菌锅P3BSL-3内源性和外源性病源，可通过气溶胶传播，能导致严重后果或生命危险BSL-3BSL-2操作外加：1、控制进入2、所有废物消毒3、洗涤前，实验服消毒4、有基础血清1级、2级生物安全柜保护性实验服、手套、若需要则采取呼吸保护措施BSL-2外加：1、和进入走廊隔开2、双门进入，门自动关闭3、排出的空气不循环4、实验室内负压P4BSL-4对生命有高度危险的危险性病源或外源性病源：致命、通过气溶胶而致实验室感染：或未知传播风险的有关病源BSL3操作外加：1、进入前换衣服2、出实验室前淋浴3、带出设施的所有材料消毒3级生物安全柜或1级、2级生物安全柜加全身的、供应空气的正压防护服BSL3外加：1、单独建筑或隔离区域2、有供气系统、排气系统、真空系统、消毒系统3、其他有关要二、PCR实验室布局设置生物安全二级实验室目的保护操作人员保护环境保护样品PCR实验室平面设计○在入口处设缓冲间○缓冲间比专用走廊更有意义。有问题！临床PCR实验室工作流程试剂储存和准备标本制备区扩增区产物分析区PCR实验室各区的设备配置表分区器材选配PCR①试剂区PCR②制备区PCR③扩增区PCR④分析区PCR仪器生物安全柜加热模块、离心机产物分析仪冰箱、混匀器√√√√移液器√√√√可移动紫外车√√√√办公用品、耗材√√√√√√√建筑结构阴角均采用圆弧线条密封洗手池谢谢！