《球菌》课件

第9章球菌(coccus)球菌(coccus):形状呈球形或椭圆形的一类细菌大多数不导致人类的感染病原性球菌(pyogeniccoccus)少数对人类有致病性的球菌，通常引起化脓性炎症，又称化脓性球菌。根据革兰染色不同分两类：G＋球菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌G－球菌：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌第一节葡萄球菌属(staphylococcus)分布广泛，种类繁多是医院内感染的常见致病菌大多不致病对人类致病的主要为金黄色葡萄球菌易产生多重耐药菌株1.形态与染色:G＋、球形、葡萄串状排列、无鞭毛和芽胞。一、生物学特性2.培养特性易培养:普通平板中生长良好、血平板生长更佳；产色素:金黄色、白色、柠檬色（脂溶性）中等大，突起，有色素，S型菌落。金黄色葡萄球菌（金黄色）表皮葡萄球菌（白色）腐生葡萄球菌（柠檬色）金黄色葡萄球菌有透明溶血环。表皮葡萄球菌无溶血环。3.抗原构造葡萄球菌A蛋白(staphylococcusAprotein,SPA):细胞壁表面的一种单链多肽，具有多种生物学作用。SPAcapsuleteichoicacidpeptidoglycanSPA的应用：协同凝集试验SPA与IgG分子的Fc段结合抗原葡萄球菌聚集在一起出现凝集现象金黄色葡萄球菌(S.aureus)表皮葡萄球菌(S.epidermidis)腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)性状金葡菌表皮葡菌腐生葡菌菌落色素金黄色白色白色或柠檬色发酵甘露醇+--凝固酶+--溶血性β溶血不溶血不溶血耐热核酸酶+--SPA+--致病性强弱无4.分类据色素、生化反应根据有无凝固酶：凝固酶阳性菌凝固酶阴性菌4.分类根据核酸遗传学分型：48种5.抵抗力♥无芽胞菌中抵抗力最强，耐干燥，对石炭酸、龙胆紫等敏感。♥易产生耐药性，特别对青霉素耐药株高达90%以上。♥由于广泛应用抗生素，耐药菌株增多，成为院内感染最常见的致病菌。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）凡对甲氧西林、苯唑西林耐药或Mec基因阳性的金黄色葡萄球菌定义为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillinresistantstaphylococcusaureusMRSA)，也被称作“超级细菌”。1961年英国首次报道MRSA正在全世界快速蔓延，可能有多达5300万人携带致命性MRSA。致病机理与普通金黄葡萄球菌没什么两样成为医院感染和社区获得性感染的重要致病菌。MRSA（超级细菌）治疗难度大，病死率高，已成为医院感染中的严重问题，已与乙肝、艾滋病并列为世界三大感染性疾病。MRSA传播主要通过医护人员的手，在患者、医护人员、患者间播散，另外，衣物、敷料等物品可携带MRSA，促进MRSA在院内的流行，病人一旦感染或携带MRSA，该菌可存在于患者身上达数月之久。(“肮脏的白大褂”)二、致病性与免疫性1、致病物质金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。①侵袭性酶：血浆凝固酶；葡激酶；耐热核酸酶；透明质酸酶；脂酶②外毒素:葡萄球菌溶素、杀白细胞素、肠毒素、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1(TSST-1);③表面结构或蛋白：如粘附素、荚膜、肽聚糖和SPA等。使含抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类。耐热，100℃，30min或高压灭菌后仍保持部分活性；但易被蛋白酶破坏。鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标。凝固酶（coagulase）分类：A：游离凝固酶，分泌至菌体外。B：结合凝固酶/凝聚因子，结合于菌体表面不释放，利于细菌凝集。凝固酶原物质凝固酶样物质纤维蛋白原（液态）纤维蛋白（固态）血浆凝固协同因子致病机理：A：使周围血液/血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面，阻碍吞噬细胞的吞噬或胞内消化作用；B：集聚在细菌四周，保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏；C：细菌不易扩散，使感染易于局限化和形成血栓。意义：鉴别有无致病性的重要指标。葡萄球菌溶素（staphylolysin）损伤细胞膜的毒素，主要是溶素；对多种哺乳动物RBC有溶血作用，对白细胞、血小板、肝细胞、成纤维细胞、血管平滑肌细胞等均有损伤作用；溶素是一种外毒素，具有良好的抗原性；经甲醛液脱毒后可制成类毒素；作用机制为毒素分子插入细胞膜疏水区，破坏膜的完整性导致细胞溶解。杀白细胞素（leukocidin）只攻击中性粒细胞和巨噬细胞；与细胞膜受体结合，使细胞膜发生构型变化，膜通透性增高，细胞浆内的颗粒排除，细胞死亡；在抵抗宿主吞噬细胞，增强病菌侵袭力方面有意义。肠毒素（enterotoxin）（超抗原）•约50%临床分离金黄色葡萄球菌可产生；•耐热，抗胃肠液中蛋白酶的水解作用；•产毒菌株污染牛奶、肉类等食物，经10h便产生大量肠毒素；•作用机制：毒素与肠道神经细胞受体作用，刺激呕吐中枢导致以呕吐为主要症状的急性胃肠炎即食物中毒。表皮剥脱毒素（exfoliativetoxin）由质粒编码产生的一种蛋白质，可水解宿主表皮粒层的细胞内桥—桥粒。在新生儿、幼儿和免疫功能低下的成人中可引起烫伤样皮肤综合征(SSSS)。毒性休克综合征毒素-1（TSST-1）由噬菌体I群感染和产生。引起机体发热，增加对内毒素的敏感性;多器官系统功能紊乱或毒性休克综合征(toxicshoksyndrome,TSS)。病人的临床表现主要包括急性高热、低血压、猩红热样皮疹伴脱屑，严重者发生休克。2.所致疾病感染类型所致疾病侵袭性局部感染全身感染毒素性食物中毒假膜性肠炎烫伤样皮肤综合征SSSS毒性休克综合征TSS病灶局限且脓汁粘稠局部感染食物中毒（肠毒素）2011年“思念”牌水饺，被检出金黄色葡萄球菌而停售。旧标准：不得含有”金黄色葡萄球菌。现在：在每克生制品中检出的金黄色葡萄球菌含量只要在1000~10000个之间，都为合格产品。表现为弥漫性红斑和水疱形成，继以表皮上层大片脱落，受损部位的炎症反应轻微。烫伤样皮肤综合征泉州“婴儿疑被烤死”事件2013.7.17，一名刚出生12天的婴儿在泉州市儿童医院保温箱内死亡，死亡时身体多处为黑色，疑为烤死。SSSS综合症（烫伤样皮肤综合症）3、免疫性人体有一定的天然免疫力,只有当皮肤黏膜受伤后,宿主免疫力降低时,才易引起葡萄球菌感染。感染后能获得一定的免疫力，但不强，难以防止再次感染。三、微生物学检查标本采集检查程序检查方法1.标本采集根据病情采集标本种类：脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。注意：无菌操作，避免污染。2.检查程序脓液、咽拭子、穿刺液尿液、痰液脑脊液血液粪便、呕吐物直接涂片染色增菌培养分离培养（血平板）分离培养（高盐甘露醇平板）取可疑菌落鉴定试验药敏试验涂片染色血浆凝固酶耐热核酸酶其他鉴定试验报告初报•鉴定试验（1）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（+）（2）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（+）（3）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（+）（4）肠毒素测定：金黄色葡萄球菌产生（5）SPA检测：金黄色葡萄球菌（6）凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定防注意消毒隔离注意个人卫生防止医源性感染防止耐药菌株产生治抗菌素药敏试验自身菌苗疗法四、防治原则人类凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最为常见。CNS主要引起以下几种感染：泌尿系感染，细菌性心内膜炎，败血症等，其中大多为医院内感染。此外，心脏起搏器安装、置换人工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。凝固酶阴性葡萄球菌的致病性第二节链球菌属(Streptococcus)分类根据溶血作用分类:甲（α）型溶血乙（β）型溶血丙（γ）型溶血根据抗原结构分类根据细胞壁中C多糖抗原不同，分为20个群。对人致病的链球菌，90%属于A群。链球菌的群别与其溶血性间无平行关系。A群多为乙型溶血。A群链球菌主要为β-溶血性链球菌，是链球菌中对人致病作用最强的细菌。对人致病的链球菌有90%属此种。一、生物学特性1.形态与染色G+，球形或椭圆形，呈链状排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。2.培养特性营养要求较高血液或组织液、生长因子菌落细小，S型ß溶血环液体培养成絮状沉淀3.生化反应活泼分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。菊糖（-）胆汁溶菌试验（-）optochin敏感试验（-）触酶（-）（区别于葡萄球菌属）（区别甲链与肺链）4.抗原构造•多糖抗原（C抗原）：群特异性。•蛋白抗原（M、T、R、S）：型特异性，与致病有关的是M蛋白抗原。•核蛋白抗原：无特异性。多糖抗原蛋白质抗原核蛋白抗原链球菌抗原构造模式图荚膜（二）致病性与免疫性细胞壁成分黏附素M蛋白外毒素致热外毒素（红疹毒素）溶血素－ASO侵袭性酶透明质酸酶链激酶（ＳＫ）链道酶（ＳＤ）致病物质细胞壁成分黏附素M蛋白（主要致病因子）心肌、肾小球基底膜共同抗原风湿热急性肾小球肾炎致热外毒素（pyrogenicexotoxin）是引起猩红热的主要毒性物质。由携带有溶原性噬菌体的A群链球菌产生对机体具有致热和细胞毒作用。外毒素链球菌溶素（streptolysin）溶解RBC、破坏WBC和血小板。链球菌溶素O（SLO）：对哺乳动物多种细胞有毒性作用（对氧不稳定），具有抗原性链球菌溶素S（SLS）：对白细胞和多种组织细胞有破坏作用（对氧稳定），不具有抗原性侵袭性酶透明质酸酶链激酶（ＳＫ）链道酶（ＳＤ）“丹毒”蜂窝组织炎所致疾病A群链球菌引起的疾病约占人类链球菌感染的90%淋巴管炎蜂窝组织炎扁桃体炎等猩红热(3)变态反应性疾病(1)化脓性感染(2)中毒性疾病风湿热急性肾小球肾炎病灶界限不清,脓汁稀薄三、微生物学检查标本采集检查程序检查方法标本直接涂片镜检培养血琼脂平板，形成典型的溶血现象抗原的检测血清学试验抗O试验（ASO）•鉴定链球菌的主要试验：根据形态、菌落、溶血情况进行：①杆菌肽敏感试验：A群敏感(d10mm)②Optochin敏感试验：肺炎链球菌d18mm，d15mm为阴性。③胆汁溶菌试验：肺炎链球菌+•血清学试验：抗O试验（ASOtest）原理：毒素与抗毒素的中和试验，用SLO检测血清中的ASO。方法：间接凝集。结果：效价＞1:400单位有诊断意义。意义：辅助诊断急性风湿热、风湿活动期、急性肾小球肾炎。积极治疗儿童链球菌感染，防止发生急性肾炎和风湿热。抗生素首选青霉素：用长效青霉素预防链球菌感染，对减少肾小球肾炎及风湿热的发生有一定效果。(四)防治原则属链球菌科，链球菌属。广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，多数不致病。可导致细菌性大叶性肺炎、脑膜炎、支气管炎肺炎链球菌S.pneumoniae1.形态与染色：G＋、矛头状、成双（或短链）排列；平面相对、尖面相背；无鞭毛、无芽胞，有厚荚膜。一、生物学性状培养及生化反应培养特性需氧或兼性厌氧营养要求高在固体培养基上形成“脐状”菌落，胆盐可促其自溶a溶血环生化反应可发酵菊糖，胆汁溶菌，可鉴别肺炎球菌与甲型溶血性链球菌，奥普托欣抑制其生长3.抗原构造•荚膜多糖抗原：据此将肺炎链球菌分85型，对人致病的有20多型。Ⅰ-Ⅲ型引起大叶性肺炎。•菌体多糖抗原：种特异性，C多糖可与CRP反应，产生沉淀，在炎症活动期(如风湿热)含量增多。•M蛋白抗原：型特异性。二、致病性与免疫性致病物质荚膜肺炎链球菌溶血素脂磷壁酸所致疾病大叶性肺炎其他部位炎症免疫性牢固的型特异性免疫，同型再次感染少见三、微生物学检查标本采集痰液，脓液，血液，脑脊液等。检查程序检查方法微生物学检查法标本：痰液脓液血液脑脊液直接涂片镜检分离培养：血琼脂平板鉴别试验肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌菌落相似，应加以鉴别：①菊糖发酵试验；②胆汁溶菌试验；③奥普托欣试验（optochintest）肺炎链球菌型别鉴定（荚膜肿胀试验、凝集试验）动物试验胆汁溶菌试验阳性：加入胆汁或10%去氧胆酸钠，37℃，5-10min，激活本菌的自溶酶，出现溶菌现象。取肉汤培养液均匀涂于血平板上用optochin纸片贴于接种区中央（或分区划线法，纸片贴于1-2区），35℃需氧培养过夜，抑菌圈18mm。Optochin敏感试验阳