生化试剂注意事项

生化试剂在全自动生化分析仪中应用的注意事项Contents1.试剂的保存2.实验室有关试剂使用的SOP的建立3.试剂类型和机器的匹配4.校准和质控与试剂的匹配性7.对外观异常的标本的处理8.对特殊项目进行特殊的处理6.合理的试剂上机顺序9.对异常结果的标本的处理5.机器性能和水机状态对检测的影响1.试剂的保存1.1.合适的温度和避光保存：大部分为2-8℃少部分为2-26℃。1.2.试剂摆放时注意不要贴近冰箱后背的内胆，防止试剂结冰。试剂放置的偏后，贴近后背的内胆，现在的冷凝器在两侧，后背有制冷管路就会造成结冰。2.实验室有关试剂使用的SOP的建立2.1.不同项目在同一型号机器上SOP的建立。2.2.同一个项目在不同型号上SOP的建立。HBA1C的溶血剂D-D标本类型三试剂HCYHBA1C在AU5400和AU5800的应用区别3.试剂类型和机器的匹配货号规格适用仪器020GR1:4×100mlR2:2×50mlHitachi7060/7150及岛津CL7200/8000专用包装021GR1:6×60mlR2:2×45mlHitachi7170/7080及OlympusAU640/400/600专用包装GH021GR1:2×50mlR2:1×25mlHitachi7020专用包装GT021GR1:5×48mlR2:2×30mlTOSHIBA专用包装GX021GR1:2×80mlR2:2×20ml贝克曼仪器CX5/7/9/LX20专用包装GD021GR1:24×4.3mlR2:6×4.3ml杜邦专用包装4.校准和质控与试剂的匹配性首先必须明确生化分析仪不论如何先进，它还是一个比较器，它测试出来的标本结果是随着标准限的设置不同而变化的。所以，在卫生部临床检验中心拟定的“临床实验室（定量测定）室内质控工作指南”中明确指出“对测定标本的仪器一定要求进行校准，校准时要选择合适的（配套的）标准品/校准品；如有可能，校准品应能溯源到参考方法或/和参考物质；对不同的分析项目要根据其特性确立各自的校准频率。”校准品（Calibrationmaterials）含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差。因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差。质控品（Controlmaterials）只用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，因此要求保存时间十分稳定。5.机器性能和水机状态对检测的影响5.1.优良的机器状态是实验结果准确的前提。5.2.合格且稳定的水质是保障结果准确性和稳定性的重要因素。5.1.有关机器状态对测量结果影响读点主波长副波长A121873171170213187417117031418741681706151874170170416187217017021717031691534181709165154419170916615432017081681540搅拌系统出现问题某医院反馈CL比色法最近结果特别异常，结果在-1000和2000之间波动。而且仅仅CL结果异常，其它项目结果没问题。灯泡在450的波长下不稳定。所有项目仅仅CL在450的波长下反应。某医院反馈最近所有项目忽高忽低，特别是酶类，怀疑试剂出现问题冲洗站最外面的打水针出现问题，打水量时多时少。当打水偏多的时候，水会溢到隔壁反应杯。5.2.有关水机状态对测量结果影响ABS空白：33ABS27.4：47510:1949.8:1919.69.29.19.0合格且稳定的水质是保障结果准确性和稳定性的重要因素。6.合理的试剂上机顺序合理的试剂测试顺序是防止试剂针交叉污染的重要方法之一。TG试剂内含有高活性的脂肪酶，浓度为6000U/L。TG和LPS的检测之间尽量隔开。7.对外观异常的标本的处理随着科学技术的发展，生化检验测定的精密度和准确度都大大的提高了，但是这却时一些实验人员忽视了对血清标本外观的观测。事实上，血清标本的外观对其生化结果有着很直接的影响。溶血黄疸乳糜血溶血：血红蛋白的吸收峰在500nm，500-560nm都有影响。又因为血红蛋白本身是氧化还原剂，可以与试剂中的过氧化物发生反应，致使检测结果受到影响。黄疸：严重的黄疸对比色有影响，例如ALT，Crea，GGT等项目受影响更为明显。脂血：造成散射，波长越短越明显，对任何测定都有影响。建议：对于外观异常的标本采取其它的检测手段进行分析。8.对特殊项目进行特殊的处理HbA1C：溶血剂处理半个小时以上。CO2：试剂盒不能长期敞开盖子，标本尽快处理防止挥发。NH3：含氨的抗凝剂、未去氨材质做的试管、分析过程中受到氨的污染。标本放置会导致氨的逸出。CU：不能使用肝素抗凝的采血管。9.对异常结果标本的处理对于异常结果的标本不仅要结合临床情况进行分析，而且也要结合反应曲线进行全面分析。前白蛋白结果为“0”TBA大批量做偶尔出现负值，单独没有问题肝脏的损伤程度机器交叉污染的情况Hotspot:有关双试剂R1剩余的问题在生化分析仪器的长期使用过程中，出现双试剂的R1剩余很多，R2已经用完。其原因是仪器在设计过程中，为了避免试剂污染，试剂探针在加入设定量的同时多加一些试剂（模拟量），设定量加入反应杯，模拟量被弃去，其模拟量随设定量不同而不同，由于R2设定试剂量小,其相对模拟量大，造成R2短缺。R1体积：80mlR2体积：40mlR1：R2=200:100R1：R2=100：50实际测试数：347，R1剩余量2.6ml实际测试数：634，R1剩余量7.1mlHotspot:有关交叉污染的分析1.部件间化学污染的来源2.试剂间化学污染的类型3.试剂间化学污染的判别4.消除试剂间化学污染的方法1.部件间化学污染的来源全自动生化分析仪发展迅速，具有多项目、多样本的处理能力，检测速度不断的提高，但由于共用吸样针、试剂针、搅拌棒以及比色杯，当生化仪长期使用致其清洗能力下降、比色杯老化后引起吸附力增加、生化仪内污垢的积聚、测试顺序安排不当，且常规清洗不能有效消除交叉污染时，就会增加试剂间化学污染的可能性，引起测定结果不准确。1.1.试剂针污染：当试剂针在清洗不完全，或黏附力增加时，残留试剂可能会对下一相临检测结果造成影响。1.2.搅拌棒污染：搅拌绑若清洗不完全，或黏附力增加时，残留试剂可能会对下一相临检测结果造成影响。1.3.比色杯污染：当某个比色杯清洗不完全时，吸附在比色杯上的上一个项目的残留试剂，可能会对在这个比色杯中进行的下一个项目的检测结果造成影响。2.试剂间化学污染的类型2.1.试剂成分的直接污染2.2.试剂成分参与反映2.3.反应进程相同2.4.影响反映条件2.1.试剂成分的直接污染：上一测定试剂中含有下一测定所需要测定的物质，直接干扰下一检测的测定结果。如：AMY试剂中含有较高浓度的Ca2+；ALP（IFCC法）、CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）、CO2（PEPC法）、AMY（EPS法）、TG等试剂中含有Mg2+。2.2.试剂成分参与反映：上一个试剂中含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用，因而干扰下一反应的测定结果。如：（1）镁测定试剂的络合剂亦能与铁结合，影响铁有铁络合剂的结合（2）CHOL试剂中含有胆固醇酯酶，可水解胆固醇酯形成游离胆固醇，而引起对游离胆固醇测定的干扰。2.3.反应进程相同：上一试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰，下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。如：当上一个反应产物为H2O2时则对以Trinders反应产生颜色的测定结果引起干扰。如UA对CHOL结果的影响；CHOL对CREA（酶法）测定结果的影响；GLU（氧化酶法）对CREA测定结果的影响。2.4影响反映条件：影响下一项目的反应条件如pH等，从而改变反应速率。如：（1）直接胆红素（钒酸盐氧化法）试剂中含有表面活性剂的酒石酸盐缓冲液会影响ALT活性，对测定结果有负干扰。（2）CREA（苦味酸速率法）反应条件为碱性，果糖胺（动力学法）反应条件为酸性，受到污染后反应速率会减慢。3.试剂间化学污染的判别3.1.一份样本分成两份，一份加生理盐水或其他适当的稀释液，另一份加等量的某试剂，同时测定，观察结果的变化，进而确定发生试剂交叉污染时造成直接干扰的项目。3.2.1.假设有3个项目A，B，C，以一混合血清作为标本，按以下顺序测试：A，A，A，A，A，B，A，C，A，B，B，B，B，B，C，B，C，C，C，C，C。得到的结果分别为：A1，A2，A3，A4，A5，BA-B，AB-A，CA-C，AC-A，B1，B2，B3，B4，B5，CB-C，BC-B，C1，C2，C3，C4，C5。（AB-A：表示B项目对A项目污染时A项目的测定值，其余表示类同）。以A2~A5、B2~B5、C2~C5的4次测定平均值分别作为A、B、C项目无污染时的测定值。若（AB-A/A×100%）95%或105%则强烈支持B试剂对A有交叉污染。3.1.2.若上述初试验结果B对A有污染，则可进行以下试验进行确认，测定顺序为：B,A,A,A,结果为：B，A1，A2，A3。若（A1/A3×100%）95%或105%，则强烈支持B对A有交叉污染。A1→A3的结果可观察受B污染的程度是否逐渐减轻。4.消除试剂间化学污染的方法4.1.要求检验人员对仪器工作流程、试剂组成、测定原理要了如指掌，对试剂交叉污染的各种可能性加以考虑，合理设计程序。更换试剂时应仔细研究说明书，发现和避免可能存在的试剂交叉污染。4.2.合理安排检测项目的顺序，在有交叉污染的检测项目中间插入一个或两个非污染项目。最彻底的做法则是将被干扰项目置于干扰项目之前，以消除干扰发生的可能。4.3.当合理设置测试顺序无法消除交叉污染时，可使用生化仪的试剂针、比色杯清晰程序，对试剂针、比色杯进行2次或多次清洗。用碱性清洗掖及酸性清洗掖冲洗试剂针可以有效地避免携带污染。4.4.选用具有抗交叉污染的试剂盒：如在游离胆固醇试剂中添加胆固醇酯酶抑制剂，以减少胆固醇酯酶水解胆固醇酯而引起对游离胆固醇测定的污染。Hotspot:不同型号生化仪器工作注意事项贝克曼库尔特：CX,LX/DXC,旧AU,新AU西门子：ADVIA1200/1650/1800/2400,DIMENSION日立：7020/7060,7080/7100/7180/7180,7600,008/003罗氏：P800,C311/C501/C502,C701/C702雅培：Areset,C4000/C8000/C16000东芝：TBA40,TBA120,TBA2000其他