卫生微生物总结

第一章绪论卫生微生物学是一门什么学科？能解决什么问题？怎样解决这些问题？卫生微生物学：微生物与其环境相互作用的规律、对人类健康的影响以及应对方略的科学。卫生微生物学与医学微生物学的区别：卫生微生物学医学微生物学研究目的以预防为主，保护群体健康治疗个体病人，维护个体健康研究内容研究微生物与外界环境之间相互关系研究致病性微生物与机体之间的关系研究对象包括致病性微生物和非致病性微生物致病性微生物研究方法定性、定量定性实验卫生微生物时期：1.17世纪荷兰人吕文虎克(A.V．Leeuwenhoek)从自制显微镜中首次观察到微生物在雨水、井水海水等环境中的存在2.19世纪德国学者施旺(T．Schwann)首次报道了空气中微生物可污染食品，并造成食品的腐败与变质3.法国科学家巴斯德(Pasteur，1822—1895)酒类酿造、酒类变质原因，发明巴氏消毒法4.英国外科医生李斯特(J．Lister，1827—1912)研究认为开放性伤口感染是由空气中微生物引起的。根据这一设想，创用了石炭酸喷洒手术室，病人的皮肤、医生的手、使用的器械均用稀释石炭酸液消毒，以防止外科手术后的继发感染，为外科消毒技术奠定了基础。5.医学细菌学奠基人德国医生科赫(R．Koch）创用固体培养基于1876年从病死畜的血液和组织中发现并分离出炭疽杆菌第二章微生物生态微生物生态学：研究微生物与其生存环境、微生物群体之间相互关系的科学，即微生物群体与周围环境的生物和非生物因素的相互关系的科学。种群（population）是由相同的许多个体所组成，种群内的个体之间是一个有机的统一体。是物种具体的存在单位、繁殖单位和进化单位。生境(habitat)指生物栖息的场所。对微生物而言，生境通常为微小生境。是指微生物生存的外环境。演替：一定生境中，一个群落被另一个群落替换的过程。一、微生物与环境之间相互作用的基本规律1.利比西最低量法则：某种生物的总生物量是由环境中该生物生长所需的最低浓度营养决定的。如，水中的微生物的总量。2.耐受性定律：指生物对环境中生态因子能耐受的范围。微生物对环境因子有一种限定要求，低于或高于这个要求，尽管有营养供给，微生物也不能存活和生长。例如：微生物对温度的耐受：嗜冷菌兼性嗜冷菌嗜温菌嗜热菌超嗜热菌3.综合作用定律：一个生物或一群生物的生存和繁殖取决于综合环境。二、微生物之间相互作用的基本生态规律正面相互作用：偏利共生：一种微生物能长生某种物质或改变环境促使另一种微生物生长，而对前者无影响。互利共生：同一生境的两种微生物互换产物，相互依赖，共同有利，生活在生理上形成整体。（专性）互惠共生：两个种群的共同生存可以相互受益，但不是一种固定的关系，解除关系后双方都能独立生存。（非专性）负相互作用：捕食寄生拮抗竞争微生物生态的基本规律小结营养因子数量限制耐受力是否生存一定生境中微生物的种类和种类的变化微生物之间的相互作用例如：牛奶变质过程的微生物生态（即微生物种类与种类的变化）第四章卫生微生物研究和检测的卫生微生物检测的特点检测对象：致病、非致病、条件致病微生物标本来源：人体、环境环境中致病微生物数量少，需要特异的检测方法，并且多依靠指示微生物样品的采集原则（一）样品必须要有代表性:采样量：满足检测要求采样部位：均匀采样采样时间：便于分析微生物的动态变化采样批号：尽量检测每个批号（二）避免对样品的污染：器材灭菌、无菌操作（三）避免对样品中微生物的杀灭和抑制：避免有毒物质的残留和高温影响（四）对样品进行详细的标记：这是基本要求样品的运送原则（一）尽快送检：一般3-4h内送检，减少细菌死亡和进一步繁殖带来的影响。（二）注意保护待检的微生物：一定的温度，加保护剂，运送培养基，如病毒、厌氧菌等（三）高致病微生物的完善包装（四）进行完善的样品交接：必须有样品送检单，与实验室人员逐项核对后交接实验室检验原则（一）具有相应的实验室硬件设施：1级（P4实验室）：可检验危害性最严重的病原体，如天花病毒、HIV、SARS病毒等。2级（P3实验室）：可检验特殊危险致病菌，如霍乱菌。3级（P2实验室）：检验一般致病菌。4级（P1实验室）：检验非致病菌。（二）具有合格的人员和采用标准或公认的检验方法人员要有资质，并经常接受培训采用国家标准方法或公认方法（WHO、EPA等）（三）加强实验室质量控制仪器、设备、试剂：定期检定和校准注意记录和核查：如GLP（标准实验室规范）实验室报告规范：数据规范，完整签名盖章（四）实验室应有应急措施应对突发事件能力需做多种检验时，微生物优先恰当的样品处理与检验指示微生物（indicatormicroorganism）：在常规卫生监测中，用以反映检品卫生状况及安全性的（非致病）指示性微生物。设定指示微生物的原因：微生物（包括致病和非致病的）种类繁多，不可能一一检测;环境中致病微生物往往数量少，检测困难，需要用相对易于检测的微生物来间接反映指示微生物的选择总的原则：检测简便，相关性好粪便污染指示菌的选择检测简便:易检出，易定量计数。相关性好：与粪便污染的相关性好；与肠道致病菌的相关性好。指示微生物的种类：(1)反映微生物综合污染：细菌、霉菌和酵母菌落总数(2)反映微生物污染来源：粪便污染指示菌(大肠菌群、粪大肠菌群);空气污染指示菌(溶血性链球菌(3)不得检出的致病微生物(4)间接反映致病微生物：如反映肠道病毒的噬菌体等(5)消毒效果指示菌：嗜热脂肪芽孢杆菌（压力蒸汽灭菌）；短小芽孢杆菌（电离辐射灭菌）；枯草杆菌黑色变种芽孢（环氧乙烷灭菌）常用的指示微生物（一）菌落总数1、概念：单位量的被检样品(g、ml、cm2、m3)内，所含有的能在某种培养基上经一定条件培养后生成的菌落数量。种类：细菌菌落总数（不能说细菌总数）、霉菌和酵母菌菌落总数。报告：cfu/每单位样品量，如：cfu/g、cfu/ml。(cfu:colonyformingunit)2、菌落总数的卫生意义菌落总数是判定检样被微生物污染程度的指示菌，是某些样品的卫生限量标准。3、菌落总数的测定方法类型：标准平板计数法、表面涂布法（二）粪便污染指示菌1．大肠菌群(coliformgroup)大肠菌群系指一群能在37℃、24h内发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰阴性无芽孢杆菌。大肠菌群检测：35~37℃生长：培养于这个温度下24h内发酵乳糖产酸产气：培养基中加乳糖，24小时内观察是否产酸产气：气：培养基中有气泡;酸：培养基中加酸碱指示剂需氧或兼性厌氧：一般孵箱可革兰阴性无芽孢杆菌：革兰染色，光镜下观察种类：总大肠菌群、耐热大肠菌群（粪大肠菌群）大肠菌群的卫生学意义：是常规检测的卫生指示菌，饮用水、生活用水、各类产品（食品、药品、化妆品等）都要进行检测，推断检样中有无被肠道致病菌污染的可能。测定方法：多管发酵法、滤膜法、纸片法。其他粪便污染指示菌名称优点缺点指示作用应用大肠杆菌指示作用优于大肠菌群检测方法复杂人、畜粪便污染较少粪链球菌对不良环境抵抗力强，水体中繁殖低人粪便中数量少B4.1，人粪污染；0.7，动物粪污染；之间，混合污染必要时，辅助检测产气荚摸梭菌对不良环境抵抗力强数量多而大肠菌群少时，陈旧粪便污染水、土壤卫生指标菌注：B为粪大肠菌群与粪链球菌的比值(三)其他指示微生物1、不得检出的致病菌微生物主要危害主要指示作用沙门菌肠道致病菌口服药、食品不得检出志贺菌菌痢食品不得检出金葡菌局部化脓、食物中毒食品、化妆品、外用药不得检出；游泳池水指标菌溶血性链球菌乙型，食物中毒室内空气、食品指标菌铜绿假单胞菌条件致病菌外伤、眼科用药、化妆品不得检出，游泳池水指标菌破伤风梭菌外伤皮肤感染外用药不得检出2、肠道病毒指示微生物指示物优点缺点应用大肠杆菌噬菌体f2与肠道病毒耐受性似；存在于人粪中；检测较简便粪便中数量少；可能在环境中繁殖；检测结果受大肠杆菌DNA噬菌体影响水中病毒消毒效果评价指标脊髓灰质炎病毒减毒疫苗株І操作安全非所有粪便有；检测困难应用于消毒学和水中病毒研究3、消毒效果指示菌嗜热脂肪芽孢杆菌：压力蒸汽灭菌短小芽孢杆菌：电离辐射灭菌枯草杆菌黑色变种芽孢：环氧乙烷灭菌卫生微生物研究和检测的方法目标：检测环境微生物的种类、数量。种类：纯培养（选择性增菌、分离）→鉴定→分型（血清学、噬菌体、细菌素、质粒图谱）数量：倾注平板法、表面涂布法、MPN法、显微镜直接计数法等环境中微生物检出困难：方法有特点：卫生指标菌的运用、样品的处理、损伤菌的复苏注意新技术的运用：PCR、核酸杂交、G+C含量测定、基因芯片、蛋白质芯片一、样品的处理混匀样品（非常重要）液体：电动混匀、手摇混匀、敲打混匀固体：搅碎混匀、研磨混匀、匀浆混匀样品浓缩（提高检出率）沉淀法过滤法吸附沉淀法二、损伤菌的复苏较低的培养温度无选择压力的培养环境三、选择性增菌与分离目的：检品中的微生物有哪些？检测的困难：微生物小、少、是混合的。分离的原理：让微生物繁殖，一个变成一大群，再把每一种分开，让它们分别显示出各自的特性，从而得到鉴定。选择性：采用抑制杂菌的条件，使待检菌生长的更好，利于分离。物理方法：厌氧条件培养厌氧菌、光照条件培养藻类等化学方法：根据微生物的营养需求，加入特制的促进或抑制生长的物质选择性培养基四、定量计数法目的：检品中的微生物有多少？直接（显微镜下计数、比浊法）计数倾注平板法“单个菌”“菌落”而计数间接表面涂布法（使菌繁殖）MPN法统计学方法微菌落快速计数法显微镜下计数微小菌落1、倾注平板法方法：使样品（1ml）均匀地分布到琼脂培养基中，培养后，计数菌落。怎样使样品均匀地分布到琼脂培养基中去？琼脂的特性：凝固的琼脂要在100℃以上才能融化，但融化后的琼脂要在45℃以下才会凝固。微生物：大多数在45℃时不会立即烫死。做法：融化后的琼脂培养基冷却到45℃时，加入样品混匀。加入多少样品才合适？使一个平板上生长的菌落数在30~300之间时，最利于计数。例如：食品中菌落总数的测定2、表面涂布法方法：使样品（0.1ml）中的微生物涂布在琼脂培养基的表面，培养后，计数表面生长的菌落数。方法优点缺点倾注平板法接种量大（1ml），代表性好热琼脂对菌可能损伤表面涂布法可使用不透明的培养基；易于挑取菌落做进一步的分析；避免了热琼脂对菌的损伤接种量小（0.1ml），易出偏差3、MPN法利用统计学的方法对样品中的微生物计数。方法是把样品分成多个小份，根据小份样品待检微生物出现的阳性情况来推断样品中的菌数。乳糖发酵试验分离培养证实试验出报告：根据阳性管数，查MPN检索表4、其他方法微生物鉴定系统、免疫、核酸杂交、PCR、G+C含量、基因芯片、蛋白质芯片第五章消毒与灭菌消毒(disinfection)：杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使其达到无害化的处理。灭菌(sterilization)：杀灭或清除传播媒介上的一切微生物的处理。消毒的要求:我们以总微生物数量的减少来衡量消毒的效果。我国消毒技术规范规定：在医用器材和医疗环境的消毒中，若能使人工污染的微生物在消毒过程中杀灭去除99.90%，在卫生防病消毒中，如果能杀灭消毒对象上污染的自然微生物的90.00%以上，就达到了要求。灭菌的要求:灭菌因子对微生物的杀灭，遵循着指数定律，即，细菌数在恒定的时间间隔以相同的级数下降。从微生物的死亡方式看，总是可以计算出灭菌后活微生物的量。目前国际上规定，灭菌过程必须使物品污染的微生物存活概率减少到10-6物理消毒与灭菌方法一、热力种类特点主要原理方法应用湿热(水蒸气的热)穿透力强，杀菌作用强蛋白质变性，煮沸消毒、流通蒸汽消毒、巴氏消毒、压力蒸汽灭菌、间歇灭菌耐湿耐热物品干热（单纯热）穿透力弱，杀菌不及湿热细胞组分氧化，蛋白质变性烘烤、红外线照射、烧灼、焚烧忌湿耐热物品、油剂、粉剂例:肉毒梭菌芽孢，湿热121℃，5分钟内被杀死;干热160℃，2小时才被杀死压力蒸汽灭菌使用这种方法，关键要使灭菌室的空气被完全排除，如未被完全排除，在合格的压力下，温度也达不到要求，并且，残留的空气还会使蒸汽的穿透力下降，最终影