临床检验基础实验指导要点

1实验一血液一般检验（一）GeneralExaminationofBlood【内容】1、皮肤采血法（毛细血管采血法）2、血红蛋白(微量)吸管3、静脉采血法4、血红蛋白测定5、红细胞计数6、细胞计数池的正、侧面观察7、正常及异常红细胞形态(示教)【目的要求】1、掌握红细胞直接计数，血红蛋白测定的标本送检要求、原理、操作方法、参考值及临床意义。2、掌握皮肤采血法（毛细血管采血法）及血红蛋白(微量)吸管的使用方法。3、熟悉静脉采血（collectionofvenousblood）的方法和无菌操作技术。4、熟悉细胞计数池的结构及应用范围。【器材】721-型分光光度计，血细胞计数板，血红蛋白吸管，75％酒精棉球及干棉球，三棱针，玻棒及试管，显微镜。【试剂】1、HicN试剂的配制氰化钾50mg高铁氰化钾200mg无水磷酸二氢钾140mgTriton×—1001.0ml蒸馏水加至1000ml，纠正pH至7.0-7.4。此液为淡黄色透明溶液，贮存在棕色有塞玻璃瓶中，放40C冰箱保存，一般可用数月。2、赫姆(Hayem)液：2氯化钠1.0g结晶硫酸钠(Na2S04·10H20)5.0g(或无水硫酸钠2.5g)氯化高汞0.5g蒸馏水加至200ml溶解后加20g/L伊红水溶液1滴，过滤后用。【实验】一、皮肤采血法（毛细血管采血法）【器材】1、三棱针，预先高压消毒，每人每次采血更换1次性采血针以避免交叉感染。2、消毒干棉球。3、75％乙醇棉球4、20u1吸管【操作方法】1、采血部位以左手无名指为宜。2、轻轻按摩采血部位，使其自然充血，用75％乙醇棉球消毒局部皮肤，待干。3、紧捏刺血部位，用无菌刺血针迅速刺入皮肤约2—3mm，让血液自然流出，如血液不流出可在其周围轻轻加压，但不要过重。4、用干棉球擦去第一滴血、按需要依次采血。5、采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。6、血红蛋白吸管的使用：在采血前首先练习一下吸管使用，使其达到得心应手。二、血红蛋白(微量)吸管的使用【原理】挤压乳胶吸头，使刻度微量吸管内产生负压而吸取液体。【器材】1.微量吸管、乳胶吸头、干脱脂棉。2.试管、试管架。3.2ml吸管、吸耳球。3【试剂】1.洗涤液3管（蒸馏水、95%乙醇、乙醚）。2.生理盐水。【操作方法】1.准备吸管及试管将乳胶吸头套在微量吸管上，注意两者连接处应严密不漏气。试管上应贴上患者姓名或门诊/住院号标签。2.加稀释液取试管1支，加生理盐水2ml。3.持管吸血右手拇指和中指夹住吸管与吸头交接处，示指盖住吸头小孔。三指轻微用力，排出适量的气体使管内形成负压。将管尖插入抗凝血，三指慢慢松开，吸取抗凝血到所需刻度后抬起示指。注意吸血时管尖始终不要离开液面，以免吸入气泡；也不要用力过度，将血液吸入乳胶吸头内。4.拭净余血用干脱脂棉沿吸管口方向拭净余血，并检查血量是否达到规定刻度。5.释放血液将吸管插入含生理盐水的试管底部，慢慢排出吸管内的血液，再用上清液冲洗管内余血3次，最后将管内残余液体完全排净。6.洗涤试管依次用蒸馏水洗净，95%(V/V)乙醇脱水，乙醚干燥。如为一次性微量吸管，可省略该步骤。【注意事项】1.准备吸管吸管和胶吸头连接处应严密不漏气，挤压吸头力度应适宜。2.持管吸血吸血时动作宜慢，防止血液吸入乳胶吸头内；避免产生气泡。3.拭净余血吸血后拭净管外余血以保证血量准确。三、静脉采血法【原理】使用注射器或负压采血器刺入浅静脉后，用负压吸取所需血量。【器材】1.消毒棉签。2.压脉带（止血带）2~3mm口径的橡皮软管。3.一次性消毒注射器（1）针头：30~40mm长，18号、19号、20号带斜面。若采集5岁以下儿童的血液标本，使用23号或25号针。（2）注射器：可选用2ml、5ml、10ml或20ml注射器。4.一次性负压采血器。5.试管含或不含抗凝剂，并应有采血量的标记（如5ml刻度）。46.垫枕。【试剂】30g/L碘酊、75%（V/V）乙醇或碘伏。1.抗凝剂（根据实验项目选择所需的抗凝剂）。【操作方法】1.准备试管仔细阅读受检者申请单，决定采血量，准备每个试验所需的试管，并应按一定顺序排列，如患者仅做凝血试验一项，最初1ml血液必须丢弃。如做红细胞沉降率测定，需取试管1支，加入适量抗凝剂（109mmol/L枸橼酸钠0.4ml）。2.标记试管在试管上贴上标签，注明患者姓名、项目名称、采集日期、门诊或住院号等。3.消毒双手采血前，操作人员应用肥皂或消毒液和水洗手。4.选择静脉采血前，要求受检者坐在实验台前。将前臂放在实验台上，掌心向上，并在肘下放一垫枕。卧床受检者要求前臂伸展，暴露穿刺部位。常用采血位置是肘前静脉，因其粗大、容易辨认。5.检查注射器打开一次性注射器包装，左手持针头下座，右手持针筒。将针头和针筒紧密连接，并使针头斜面对准针筒刻度，抽拉针栓检查有无阻塞和漏气。最后排尽注射器中的空气，备用。使用前，保持针头无菌状态。6.消毒皮肤用30g/L碘酊棉签自所选静脉穿刺处从内向外，顺时针方向消毒皮肤，待碘酊挥发后，再用75%乙醇棉签以同样方式拭去碘迹；或以碘伏消毒，待干。7.扎压脉带在采血部位上端约6cm处，将压脉带绕手臂一圈打一活结，压脉带末端向上。要求患者握紧和放松拳头几次，使静脉隆起。压脉带应能减缓远端静脉血液回流，但又不能紧到压迫动脉血流。8.穿刺皮肤取下针头无菌帽，以左手拇指固定静脉穿刺部位下端，右手持注射器，示指固定针头下座。保持针头斜面和针筒刻度向上，沿静脉走向使针头与皮肤成30°角斜行快速刺入皮肤，然后成5°角向前穿破静脉壁进入静脉腔。确认穿刺入静脉中心位置，并沿着静脉走向将针头推入10~15mm。9.抽血用左手缓缓向后拉注射器针栓，见少量回血后，松开压脉带。然后，向后拉针栓到达采血量刻度。若使用一次性负压采血器，当针头进入血管后会见少量回血，将负压采血管插入试管托内采血针中，因试管内负压作用，血液自动流入试管，到达采血量刻度后拔出试管即可。10.止血嘱受检者松拳，用消毒棉签压住穿刺点，迅速向后拔出针头。继续紧按住消毒棉签3min。511.放血从注射器上取下针头。将血液沿试管壁缓缓注入，到达标记处。含抗凝剂试管需迅速轻轻颠倒混匀几次。【注意事项】1.采血准备采血前应向患者耐心解释，以消除不必要的疑虑和恐惧心理。如遇个别患者进针时或采血后发生眩晕，应立即拔出针头让其平卧休息片刻，即可恢复。必要时可给患者嗅吸芳香酊、针刺（或拇指压掐）人中和合谷等穴位。若因低血糖诱发眩晕，可立即静注葡萄糖或嘱患者服糖水。如有其它情况，应立即找医生共同处理。2.准备试管不同检查项目可根据试验需要选择不同的抗凝剂及与血液的稀释比例，如血细胞计数及MCV、MPV等参数测定时应选择EDTA-K2抗凝，不要用肝素抗凝，因为肝素抗凝会影响RBC和PLT的计数结果。3.选择静脉如果肥胖患者的静脉暴露不明显，可以左手示指经碘酊、乙醇或碘伏消毒后，在采血部位触摸，发现静脉走向后凭手感的方向与深度试探性穿刺。4.检查注射器静脉采血前要仔细检查针头是否安装牢固，针筒内是否有空气和水分。所用针头应锐利、光滑、通气，针筒不漏气。抽血时针栓只能向外抽，不能向静脉内推，以免形成空气栓塞，造成严重后果。5.扎压脉带采静脉血时压脉带压迫时间不能过长、绑扎不能过紧，以避免淤血和血液浓缩，最好不超过1min，否则会影响某些实验结果，如造成血红蛋白和血细胞比容增高。6.穿刺皮肤不能从静脉侧面进针。针头进入静脉的感觉是：皮肤有一定阻力，而静脉壁阻力较小，更富弹性。7.抽血血液加入抗凝试管中应与抗凝剂充分混匀以达到抗凝目的；无须抗凝时则将血液直接注入试管中。要防止血液标本溶血，因为溶血后标本不仅血红细胞数和血细胞比容减低，还会使血清（浆）化学成分发生变化。造成溶血的原因有：注射器和容器不干燥、不清洁；压脉带捆扎时间太久，淤血时间长；穿刺过程中损伤组织过多；抽血速度太快；血液注入容器时未取下针头或用力推出时产生大量气泡；抗凝血用力震荡；离心时速度过快等。8.止血不能弯曲手臂，以免形成血肿。9.放血颠倒混匀时，需防止溶血和泡沫产生。切忌震荡试管。10.标本检测与保存血液标本采集后应立即送检，实验室接到标本后应尽快地检查。抗凝静脉血可稳定8~12h，如不能及时测定，应将其置于较稳定的环境中，如4℃冰箱，减少和降低条件的变化。测定前，将其从冰箱内取出，恢复至室温状态，混匀后再测定。要注意有的试验标本不宜4℃保存，如PLT计数。用于生物化学检查的标本6若不能及时检查，应将血清或血浆与细胞分离，进行适当的处理。11.一次性器材只能使用一次，不能反复使用。四、血红蛋白测定(Hemoglobin简称Hb)氰化高铁血红蛋白法【原理】血红蛋白被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与氰离子(CN-)结合生成稳定的氰化高铁血红蛋白，用光电比色法根据标准曲线求得每升血液的血红蛋白克数。【试剂】HicN试剂【操作方法】取试剂5毫升加入血液20立方毫米混匀置5分钟后用540nm波长，试剂为空白调0点比色，读取光密度，查标准曲线得结果。【报告方式】HbXXXg/L【参考区间】男性成人：120—160g／L女性成人：110—150g／L新生儿：170—200g／L五、红细胞计数(redbloodcell简称RBC)——显微镜直接计数(试管法)【原理】一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中显微镜下计数。【血细胞计数板】血细胞计数板中央有两个刻度平台(即血细胞计数池)，每个平台划分为9个大方格，每个大方格的面积为1平方毫米，加特制盖片的深度为0.1毫米，故每l大方格的容积为0.1立方毫米。四角的四个大方格又等分为16个中方格，作为计数白细胞用。中央大方格又等分为25个中方格，每个中方格又等分为16个小方格，共为400个小方格，作为计数红细胞和血小板之用。计数台之上覆以特制的盖片(厚度0.4mm，7表面平直，质地较硬)后构成计数室。每个大格方格体积是0.1mm(1mm×1mm×0.1mm)，参阅图1、2及3。【操作方法】l、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试管内。2、用血红蛋白吸管吸血至l0立方毫米处。3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内，吸上清液嗽洗吸管2-3次，立即摇匀。4、用玻棒取混悬液少量，充入计数池内。5、待2—3分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。红细胞计数的区域是中心大方格中的5个中方格(正中一个和四角各一个)。计数方法：长城迂回法。计数原则：凡压在中方格边线(双线)上的红细胞，只计上侧与左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线8上者不计入。即“数上不数下，数左不数右”的原则进行。图4红细胞计数的方式【计算】红细胞数/L=5个中方格内红细胞数×5×10×201×106或红细胞数/L=5个中方格内红细胞数÷100×1012式中×55个中方格换算成1个大方格×101个大方格容积为0.1ul，换算成1.0uL。×201血液的稀释倍数×106由u1换算成L【报告方式】RBCXXX×1012/L【注意事项】1、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有血凝块应重新采血，同时做血红蛋白测定、红细胞计数、白细胞计数和分类计数，在采血时应先做血膜再做红细胞，然后做白细胞，血红蛋白检验，避免红细胞破坏。2、充液前，红细胞悬液要充分摇匀，红细胞悬液注入计数池内要求分布均匀，不可有气泡，亦不可有多余液体外溢。3、中方格内红细胞分布应均匀，健康成人每中方格红细胞数约为80—100个，各中方格内之红细胞相近，如悬殊过大(超过10个细胞以上的)应重混匀再充填。【参考区间】男性成人：(4—5.5)×1012/L女性成人：(3.5—5)×1012/L新生儿：(6—7)×1012/L9实验二血液一般检验（二）GeneralExaminationofBlood【内容】1、白细胞计数及分类计数2、各类白细胞的形态(示教)【目的要求】1、掌握白细胞直接计数，分类计数的标本送检要求、方法及参考值，并换算出白细胞绝对值。2、掌握血液涂片