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云南农业大学06理学本科生毕业论文答辩三环唑对DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)生长的影响学生：杨一艳指导教师：湛方栋讲师主要内容1.前言2.材料和方法3.结果与分析4.讨论5.结论1.前言•三环唑能够抑制真菌黑色素合成过程中的多烯途径，导致真菌黑色素合成受阻，产生的色素由黑褐色转变为红褐色，是黑色素的生物合成抑制剂。•深色有隔内生真菌（Darkseptateendophytes,DSE）是一群定殖于植物根内的小型土壤真菌，其菌丝富含黑色素。•三环唑是否抑制DSE黑色素合成？是否对DSE生长产生影响？目前尚不明确。•因此，研究三环唑对DSE黑色素合成及其生长的影响，明确三环唑的作用浓度，为研究DSE黑色素奠定基础。2.材料和方法•2.1供试菌株DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)•2.2培养基MMN培养基•2.3平板培养生长测定用浓度为0、2.5、5、7.5、10、20、40μg/mL的三环唑处理，平板培养DSE，观察菌落大小、颜色、形态等特征。于9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35d测量菌落直径，计算菌丝的生长速率；于25d观察菌落的形态，并拍照。•2.4液体培养与生物量测定用浓度为0、1、2.5、5、7.5、10、20、40μg/mL的三环唑处理，液体培养DSE，7d后对菌液进行过滤，干燥，然后称重，计算不同处理下的生物量。•2.5孢子数测定液体培养7d后，用血球计数板对培养后的菌液进行计数，计算不同处理下菌液的孢子数；•2.6菌丝形态显微观察于平板培养后的第25d，对每个处理插入18×18的盖玻片，一周后在显微镜下观察菌丝形态。•2.7数据统计与处理采用DPS3.1统计分析数据，运用Microsoftofficeexcel2003进行折线图绘制。3.结果与分析3.1三环唑对平板培养DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)菌落生长的影响3.1.1三环唑对平板培养DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)菌落与菌丝形态的影响DSE菌株培养25d后，三环唑浓度越大，对菌株黑色素合成的抑制作用越强，三环唑浓度低于10μg/mL的对DSE菌落形态影响不明显，浓度大于20μg/mL的严重影响DSE的菌落形态。0μg/mL2.5μg/mL7.5μg/mL20μg/mL5μg/mL10μg/mL40μg/mL图1三环唑对平板培养DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)菌落与菌丝形态的影响3.1.2三环唑对平板培养DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)菌落生长的影响051015202530911131517192123252729313335培养时间（d）菌落面积（cm2）02.557.5102040DSE菌株培养35d的生长测定，三环唑浓度越大，菌丝生长速率越慢。其中，三环唑浓度为2.5、5、7.5、10μg/mL的菌丝生长速率受到的影响小，20、40μg/mL的菌丝生长速率受到的影响大。图2三环唑对平板培养DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)菌落生长的影响3.2三环唑对液体培养DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)生长的影响DSE菌株培养7d，三环唑浓度越大，对菌株黑色素合成的抑制作用越强，三环唑浓度低于10μg/mL的对DSE菌落形态影响不明显，浓度大于20μg/mL的严重影响DSE的菌落形态。图3三环唑对液体培养DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)菌落形态的影响0μg/mL20μg/mL•3.2.1三环唑对液体培养DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)生物量的影响200250300350400450012.557.5102040三环唑浓度（μg／mL）生物量(mg)DSE菌株培养7d后，三环唑浓度越大，对菌株的最终生物产量抑制作用越大，三环唑浓度小于5μg/mL的菌株生物量受到的抑制作用很小，浓度为7.5、10μg/mL的菌株生物量受到一定的抑制作用，浓度大20μg/mL的菌株生物量受到的抑制作用大，特别是40μg/mL的菌株生物量受到较强的抑制。图4三环唑对液体培养DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)生物量的影响•3.2.2三环唑对液体培养DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)产孢量的影响0.05.010.015.020.025.0012.557.5102040三环唑浓度（μg/mL）孢子数（103个）DSE菌株培养7d后，三环唑浓度越大，对菌株的产孢量抑制作用越大，三环唑浓度低于10μg/mL的菌株产孢量受到的抑制作用小，浓度大于20μg/mL的菌株产孢量受到的抑制作用大，特别是40μg/mL的菌株产孢量受到较强的抑制。图5三环唑对液体培养DSE菌株嗜鱼外瓶霉(ExophialapisciphilaH93)产孢量的影响4.讨论•三环唑能够抑制黑色素合成过程中的多烯途径，阻碍真菌黑色素合成，且低浓度三环唑对真菌生长影响不明显。•三环唑抑制真菌黑色素的合成，是该试剂防治产黑色素的病原真菌病害的重要机制之一。5.结论（1）三环唑对DSE菌株的黑色素合成有抑制作用，三环唑浓度越大，对其抑制作用越大；（2）三环唑浓度低于10μg/mL时，DSE菌株受抑制作用小，对其正常生长影响不明显，浓度大于20μg/mL时，DSE菌株受抑制作用强，对其正常生长影响很明显；（3）低浓度（1~10μg/mL）三环唑既能有效抑制DSE黑色素合成，又对DSE生长的影响不明显。谢谢！