重组乙肝疫苗的研究2

重组乙肝疫苗的研究主讲人：赵芮彤5乙肝疫苗的发展1346乙肝疫苗的种类及现状乙肝疫苗的工艺路线参与竞争的主要公司存在的问题及解决办法2乙肝疫苗的背景和研究历史目录乙肝的危害据统计，全球约20亿人曾感染过乙肝病毒，每年约有100万人死于乙肝病毒感染所致肝脏衰竭、肝硬化和原发性肝癌（HCC），全世界无症状乙肝病毒携带者超过2.8亿,我国约占1.3亿。目前我国有乙肝患者3000万。乙肝的特点为起病较缓，以亚临床型及慢性型较常见。本病主要通过血液、母婴和性接触进行传播。什么是乙肝呢？乙肝：是一种由乙型肝炎病毒（HBV）感染机体后所引起的疾病，分急性和慢性两种。HBV不仅能引起急性肺炎、慢性肺炎，更为严重的是它与肝硬化、肝癌的发生有密切关系。临床表现为食欲减退、恶心、厌油、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛等。HBV感染细胞的过程乙肝的防治•乙肝的治疗•最大限度地控制HBV，减轻肝细胞炎性坏死及肝纤维化，延缓和减少肝脏失代偿、肝硬化、HCC及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间。•乙肝的预防•接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染最有效的方法。乙肝疫苗的研究历史血源性疫苗此疫苗是用无症状的HBsAg携带者的血液制成并提纯，然后采用胃酶、尿素、甲醛三步化学灭活制备而成重组乙肝疫苗由重组酵母或重组CHO工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原，经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成的疫苗。联合疫苗治疗性疫苗新型乙肝疫苗疫苗的发展方向乙肝疫苗的种类和现状重组乙肝疫苗酵母表达疫苗中国仓鼠卵巢细胞（CHO）表达疫苗优点酵母为低等真核微生物，易于在营养成份简单的培养基中高密中发酵培养，利用工业化生产，表达量高，目前世界上大规模生产和上市的疫苗大多数由该表达系统制备而成。重组酵母乙肝疫苗重组酵母乙肝疫苗缺点酵母不能模拟蛋白在人体肝细胞中的翻译后修饰、蛋白折叠、大分子组装以及糖基化。定义重组酵母乙肝疫苗是借助基因工程技术，使酵母细胞表达重组的乙型肝炎病毒表面抗原(HbsAg)，经纯化并加佐剂吸附而制成的一种预防乙型肝炎的疫苗。重组酵母乙肝疫苗表达乙肝疫苗定义重组（CHO）乙肝疫苗是采用哺乳动物细胞表达系统建SFDA的技术路线，20世纪80年代国内外学者对其展开了研究，采用中国仓鼠卵巢细胞，用基因工程技术将乙型肝炎表面抗原基因片段重组到中国仓鼠卵巢细胞(CHO)内，通过一定工艺制成。优点CHO细胞表达的重组HepB是高等真核细胞表达产物，其天然结构较低等的真核细胞酵母表达的HBsAg蛋白更适合人体吸收，生产过程中不同于酵母使用硫氰酸盐处理，安全性好。重组CHO表达乙肝疫苗重组CHO表达乙肝疫苗重组乙肝疫苗的工艺路线•重组酵母乙肝疫苗的工艺路线原始菌种生产菌种一代扩增逐级扩增接种发酵罐收集细胞三级发酵菌种制备以及发酵过程分离纯化过程•重组CHO乙肝疫苗的工艺路线注：选取的细胞株是国家批准的重组CHO乙型肝炎疫苗的细胞株取细胞株收集培养液硫酸铵盐析密度梯度离心色谱纯化浓缩除菌过滤甲醛灭活AL(OH)3吸附分装葛兰素史克公司国际全球约有20家企业被世界卫生组织认定为疫苗生商，然而疫苗市场实际上被4家跨国企业所垄断，这4家公司掌握着全球约3/4的疫苗市场。塞洛菲巴斯德公司美国立达公司德国默克公司参与竞争的主要公司IIIIIIIV葛兰素史克的产品葛兰素史克公司Engerix-BEngerix-B由Biogen公司与英国的Edinburgh大学共同研发酵母菌制造乙肝疫苗技术，并授权葛兰素史克公司销售其产品。FendrixFendrix是葛兰素史克公司集乙肝疫苗Engerix-B超过15年的经验的基础上研制而成的。本品的几何平均滴度(GMTs)更高，抗体存在的时间更长。。塞洛菲巴斯德的产品HBvaxPROProcomvax赛诺菲巴斯德公司默克公司默克公司Recombivax•由默克公司销售的乙肝疫苗技术来自Chiron公司，它是在美国推一能与Engerix－B竞争的产品。•1992年的Recombivax销售额为0．9亿美元，1996年为4．4亿美元，其中重组酵母菌乙肝疫苗和血源乙肝疫苗各占50％，1999年为3.1亿美元；在世界畅销的处方药中排字第147位，销售额比1998年增长6．9％。Bio-Hep-BHepreeombeGenHevacB法国巴斯德研究所以色列BTG公司瑞士其它竞争产品重组乙型肝炎疫苗（酵母）国内生产重组酵母乙肝疫苗技术主要由默克公司转让，具有工艺成熟、成本低、产量高的特点。国内公司情况主要制品是重组乙肝疫苗（酿酒酵母）的氢氧化铝混悬液注射剂主要制品是重组乙肝疫苗（酿酒酵母）的氢氧化铝混悬液注射剂主要制品是重组（汉逊酵母）乙肝疫苗北京天坛生物深圳康泰生物大连高新生物主要制品是重组（汉逊酵母）乙肝疫苗华兰生物北京天坛生物北京天坛生物是中国生物制品总公司所属六大生物制品企业之一，是深沪两市惟一主营生物制品的上市公司，天坛生物开发了多种疫苗，企业８５％以上的收入和利润来源于疫苗制品。其主要品种是脊髓灰质炎疫苗、乙肝疫苗、乙脑疫苗、流脑疫苗和风疹疫苗，近年来，乙肝疫苗占据了主导地位。简介北京天坛生物在全国医药工业利润总额百强中排名第７８位。2002年2003年2004年北京天坛生物乙肝疫苗的销售收入为１．１８亿元，占实现业务收入的６１％，单品种在北京医药工业销售排序中居第８位，由于疫苗产品整体毛利率平均达６２．４６％，重组（酵母）乙肝疫苗收入已占主营业务的５５％，在全国乙肝疫苗份额中约占１／３强。重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞）此种疫苗是1991年中国预防医学科学院病毒学研究所联合长春生物技术研究所等单位研制成功哺乳动物（CHO）细胞表达的基因工程疫苗，已有长春生物技术研究所、华北制药集团、北京华尔盾公司、兰州生物技术研究所、武汉生物技术研究所和成都生物技术研究所获得生产批文，这6家合计年产量估计约为200－600万支。从目前国内从事生产CHO细胞乙肝疫苗的6家生产单位中。华北制药的生产技术水平处于绝对领先地位。该企业乙肝疫苗年产量居国内第3位。现有乙肝疫苗存在的问题及优化改进的研究•(一).现有疫苗剂量和免疫策略函待改进•(二).临床试验不规范•(三).首针及时率和全程覆盖率急待提高•(四).疫苗企业注册标准和说明书存在的问题•(五).不良反应(SAE)无有效的报告、鉴别、处理以及反馈制度•(六).加强科研图.成人5µg/剂国产酵母疫苗免疫效果(检定所)020406080100120140160371224(月)抗体阳转率抗体滴度★应增加生产高剂量酵母乙肝疫苗以满足成人需要成人乙肝疫苗免疫效果•应加强计划免疫外人群的疫苗接种1现有疫苗剂量和免疫策略函待改进•成人与儿童乙肝疫苗免疫持久性比较中国公共卫生杂志乙肝疫苗免疫后抗HBs阳转率与年龄的关系免后儿童成人时间(月)阳转率（%）阳转率（%）797.3483.31290.0069.62477.9932.73671.4420.84865.69•成人乙肝疫苗免疫效果中华预防医学杂志乙肝疫苗免疫后抗HBs阳转率与年龄的关系免疫后〈35岁〉35岁时间（月）人数阳转数（%）人数阳转数（%）3632336.5571933.37615488.5534177.412625283.9542851.9*24542138.9531426.436501428.046613.02临床试验不规范解决方法：《疫苗临床试验指导原则》2004年10月执行1.试验设计2.试剂质量水平低,统计分析方法不规范3.操作不规范4.未进行真正意义上的IV期临床试验3计免疫苗首针及时率和全程覆盖率急待提高管理、宣传、组织新型减少针刺、缓释、控释疫苗及联合疫苗的研发和推广4疫苗企业注册标准和说明书存在的问题目前的企业标准以国家标准为最高标准使用说明书缺乏信息5不良反应管理制度亟待完善加强科研函待深入研究病毒与宿主的相互作用机制病毒感染后的自然史病毒变异和基因型与临床转归和疫苗效果的关系影响现有乙肝疫苗效果因素分析;病毒体液免疫;细胞免疫位点变异的影响;无应答人群的遗传背景研究研究新型佐剂和控释系统，开发研制新型减少针次的预防性疫苗和治疗性疫苗6加强科研乙肝疫苗的发展•传统疫苗受制作工艺的限制，其保存、使用和接种副反应等方面都容易出现一些问题。其特点主要有三点：以完整的病原体作为抗原、在身上容易获得抗原、灭活不好会导致感染。如何解决呢？联合疫苗治疗性疫苗针对传统疫苗的不足，进一步研究，发展出联合疫苗及治疗性疫苗，它们克服传统疫苗的不足同时也有自身的优点。联合疫苗由多种抗原混合制成的疫苗，包括两大类：一类是由多种病原的抗原组成的多联疫苗，可预防多种疾病，如“百白破疫苗”等；一类是由同一细菌或病毒的不同亚型或血清型组成的多价疫苗，如“２３价肺炎球菌疫苗”等。联合疫苗种类治疗性疫苗治疗性疫苗是指在已感染病原微生物或已患有某些疾病的机体中，通过诱导特异性的免疫应答，达到治疗或防止疾病恶化的天然、人工合成或用基因重组技术表达的产品或制品。①现有疫苗增加前S基因或替换现有铝佐剂制成的疫苗；②DNA疫苗；③增大剂量酵母疫苗（10μg/支）的生产得到的疫苗；①可以提高细胞的免疫效果；②可减少加强免疫及成本低，储存方便的特点；③提高酵母抗体阳性率和滴度；优点