第五章、中药制剂含量测定

第五章中药制剂含量测定反映其制剂中有效成分或者毒性成分的含量衡量其制剂工艺的稳定性和中药材的质量优劣197719851990199520000.00%5.00%10.00%15.00%20.00%25.00%30.00%35.00%药典中中药及其制剂的含量测定所占比例第一节常用含量测定方法一、化学分析法适用于含量较高的成分及无机成分的测定包括：重量分析和滴定分析（一）重量分析挥发法：如水分测定萃取法：如冰片散中冰片的含量测定沉淀法：如苦参片中苦参总碱的含量测定（二）滴定分析酸碱滴定法：测定生物碱、有机酸、内酯类沉淀滴定法银量法：生物碱的氢卤酸盐及有机卤化物四苯硼钠法：+生物碱→白色沉淀亚铁氰化钾法配位滴定法（EDTA法和硫氰酸铵法）：测定鞣质、生物碱及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等矿物类制剂的含量氧化还原滴定法：酚类、糖类及矿物药中Fe、As等万氏牛黄清心丸中朱砂的含量测定—硫氰酸铵法本品剪碎，取5g，精密称定，置250ml凯氏烧瓶中，加硫酸30ml与硝酸钾8g，加热俟溶液至近无色，放冷，转入250ml锥形瓶中，用水50ml分次洗涤烧瓶，洗液并入溶液中，加1%高锰酸钾溶液至显粉红色，两分种内不消失，再滴加2%硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液（0.1mol/L）滴定。本品按干燥品计算，每丸含朱砂以硫化汞（HgS）计，小丸应为69~90mg；大丸应为138~180mg。二、紫外－可见分光光度法对照品比照法对照品溶液浓度应与供试品浓度接近（100±10％）吸收系数法A=ECL计算分光光度法等吸收点法，系数倍率法，三波长法，导数光谱法cf.标准曲线法紫外－可见分光光度法，标准曲线法排石颗粒中总黄酮的含量测定[含量测定]对照品溶液的制备取120℃干燥至恒重的芦丁对照品20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含无水芦丁0.2mg）。标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置10ml量瓶中，各加50%甲醇至5ml，加5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液4ml，再加50%甲醇至刻度，摇匀。以相应的溶液为空白。照紫外-可见分光光度法（附录VA），在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法取装量差异下的本品，研细，……（甲醇超声提取）。精密量取2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为空白对照。另精密量取2ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加50%甲醇至5ml”起，依法立即测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水芦丁的量，计算，即得。本品每袋含总黄酮以无水芦丁（C27H30H16）计，不得少于0.12g。紫外－可见分光光度法，吸收系数法戊己丸中总生物碱的含量测定[含量测定]取本品粉末（过三号筛）0.7~0.9g，精密称定，置索氏提取器中，加盐酸-甲醇（1:100）适量，加热回流至提取液无色，提取液浓缩后移至25ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，照柱色谱法（附录VIC）试验，精密量取5ml，置氧化铝柱（内径约0.9cm，中性氧化铝5g，湿法装柱，用乙醇30ml预洗）上，用乙醇洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，用0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。照紫外-可见分光光度法（附录VA），在345nm的波长测定吸光度，按盐酸小檗碱（C20H18Cl16NO4）的吸收系数（E1%1cm）为728计算，即得。本品按干燥品计算，每1g含总生物碱以盐酸小檗碱（C20H18Cl16NO4）计，不得少于30mg。三、原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法是以待测元素的气态基态原子对该元素特征普贤的吸收为基础。准确度高、灵敏度高、选择性好、分析速度快。四、薄层色谱扫描法薄层吸收扫描法光源：氘灯(190-340nm)和W灯(340-900nm※薄层板引起的散射现象（散射系数SX）→标准曲线（Kubella-Munk曲线）弯曲→校正（曲线校直法和计算机回归法）薄层荧光扫描法光源：汞灯(250-580nm)直线式扫描，无需曲线校直系统适应性试验检测灵敏度分离度R=2(d1-d2)/(W1+W2)※R≥1.0重复性，相对标准偏差RSD≤3.0％显色后测定，RSD≤5.0％健脾丸中熊果酸的含量测定[含量测定]取小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约4g，精密称定，加水30ml，放置使溶散，滤过，残渣用水30ml洗涤，在室温干燥至呈松软粉末状或低温干燥后研细，连同滤纸一并置索氏提取器内，加乙醚适量，加热回流提取4小时，提取液回收乙醚至干，残渣用石油醚（30~60℃）浸泡两次，每次10ml（浸泡约2分钟），倾去石油醚，残渣加适量三氯甲烷-无水乙醇（2:3）混合液使溶解，转移至2ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，精密吸取供试品溶液4ul与6ul，对照品溶液2ul与4ul，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸（20:5:8:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，进行扫描，波长：λS=540nm，λR=700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。本品含山楂以熊果酸（C30H48O3）计，小蜜丸每1g不得少于0.10mg；大蜜丸每丸不得少于0.90mg。五、气相色谱法适用于测定－挥发油及其它挥发性组分：冰片、桉叶素、樟脑、丁香酚、龙脑等－中药制剂含水量、含醇量系统适应性试验理论塔板数n＝5.54(tR/W1/2)2※最小理论塔板数，柱长，柱填充、载体性能等有影响分离度R=2(tR1-tR2)/(W1+W2)※R≥1.5（两峰完全分离）重复性，相对标准偏差RSD≤2.0％(n=5)拖尾因子T=W0.05h/2d1(d1峰极大至峰前沿之间的距离)※1.05≥T≥0.95实验条件的选择固定相的选择气固色谱－硅胶、石墨、化学键合相、高分子多孔微球等气液色谱－烃类、硅氧烷类、醇类、酯类，特殊固定液（高温、手性）柱温的选择样品沸点范围柱温固定液用量（固定液:载体）300~400℃200~250℃1~5%200~300℃150~180℃5~10%100~200℃各组分的平均沸点2/3左右10~15%气体等低沸点样品室温或50℃下15~25%宽沸程样品：程序升温法实验条件的选择载气的选择H2，He：流速大，柱长，热导检测器N2：流速小，氢焰检测器，电子捕获检测器流速：20－80ml/min其它条件的选择进样方式：直接进样、顶空进样（兼有分离分析作用）进样口（汽化室）温度：样品的沸点或稍高于沸点，30℃/30℃/50℃+T柱≤T汽≤50℃+T沸点检测室温度：30℃+T柱≤T检≈T汽实验条件的选择其它条件的选择进样时间：1秒以内进样量理论允许最大进样量使下降的塔板数不超过10％。气体0.1－1ml；液体0.1-1μl分流器分流进样，1/10~1/100检测器：TCD,FID,NPD,ECD气相色谱法毛细管柱柱长内径其它毛细管柱5-60m0.25mm,0.32mm，0.53mm固定液厚度0.1-0.5um填充柱2-4m2-4mm粒径为0.125-0.25mm气相色谱测定法内标法加校正因子求算校正因子待测组分含量测定外标法面积归一化法标准溶液加入法%/%///RRSSSSRRsRCACAAWAWfff%%SsXXCAAfCRXRXAACC%100%iiiAAC气相色谱法川贝枇杷糖浆中薄荷脑的含量测定[含量测定]照气相色谱（附录VIE）测定。色谱条件与系统适用性试验改良聚乙二醇毛细管柱（柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.25um），柱温110℃；进样口温度为250℃；检测器温度为250℃；分流比为25:1。理论板数按萘峰计算应不低于5000。校正因子测定精密称取萘适量，加环已烷制成每1ml含15mg的溶液，作为内标溶液。另取薄荷脑对照品75mg，精密称定，置5ml量瓶中，加环已烷稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加环已烷至刻度，摇匀。吸取1ul，注入气相色谱仪，计算校正因子。测定法精密量取本品50ml，照挥发油测定法（附录XD）试验，……(加环已烷回流提取），合并环已烷液，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加环已烷至刻度，摇匀。吸取1ul，注入气相色谱仪，测定，即得。本品每1ml含薄荷脑（C10H20O）应不得少于0.20mg。六、高效液相色谱法分离效能高、分析速度快及应用范围广适用于测定－挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物及离子型化合物，如蛋白质、氨基酸、生物碱、甾体、类脂、核酸、维生素及无机盐类系统适应性试验高效液相色谱法实验条件的选择色谱柱的选择流动相的选择—优质纯或光谱纯，脱气，过滤（0.45μm）部分含水溶剂：适用于分离中等极性、弱极性药物非水溶剂：分离疏水性物质缓冲溶液：适用于可溶于水并具可解离特性的化合物，如蛋白质、肽及弱酸、弱碱类化合物。洗脱方式：等度洗脱与梯度洗脱检测器：UVD,FD,ELSD,ECD,RID高效液相色谱法双黄连口服液的含量测定（反相HPLC外标一点法）[含量测定]黄芩照高效液相色谱法（附录VID）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:1）为流动相；检测波长为274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。供试品溶液的制备精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1ml含黄芩按黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于8.0mg。金银花照高效液相色谱法（附录VID）测定。七、离子色谱法离子色谱法（IC）系采用高压输液泵系统将规定的洗脱液泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱分析方法。离子色谱法常用于无机阴离子、无机阳离子。有机酸、糖醇类、氨基糖类、氨基酸、蛋白质、糖蛋白等物质的定性和定量分析。在药学方便的主要应用时药物的含量测定和有关物质检查。八、毛细管电泳法毛细管电泳法（CE）是经典电泳技术与现代色谱技术相结合的一种新型现代电泳技术，与传统电泳技术和现代HPLC相比具有很多优点：搞笑；快速；进样量少；低消耗、无污染；多模式，应用广。九、联用技术GC-MSLC-MS第二节含量测定方法验证提取条件的考察提取方式、浸泡时间、提取时间等分析方法的选择半月清散剂中红粉（HgO）的含量测定F检验—精密度t检验—准确度对照品的处理及标化含量测定用定性鉴别用→用两种洗脱系统进行含量标化，归一化法计算自制对照品→纯度检查、含量测定、结构确认等测定条件的选择AASNH4SCN滴定工作曲线确定线性化范围相关系数r（HPLC法≥0.999；TLC法≥0.995）稳定性试验—确定最佳的测定时间精密度考察相同方法对同一试样多次测定→RSD重复性试验同一分析者在同一条件下对同一批样品的多次测定（n=5）再现性试验不同分析者或不同实验室在不同实验条件下对同一批样品的多次测定灵敏度检测限or空白试验准确度考察（回收率）样品含量测定及数据处理CRSSNDSND%CBA%R